直接进样气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中的有机残留溶剂

余春梅，郑小锋，杨秀丽，周成林，王正凤

(西南药业股份有限公司药物研究所，重庆 400038)

硫酸氢氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)是法国Sanofi－Aventis公司研制的血小板聚集抑制剂，1998年首次在美国和英国上市，临床用于治疗动脉粥样硬化和急性冠状动脉综合征等[1－2]。《国家药品标准·新药转正标准》及药品检验机构均采用顶空进样法测定硫酸氢氯吡格雷残留有机溶剂的含量[3－4]，但该法对仪器有必须配置顶空设备的特殊要求，不利于方法的推广。笔者按照2010年版《中国药典(二部)》与人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)[5]的相关要求，建立了样品溶解后直接进样的气相色谱法，同时测定硫酸氢氯吡格雷中丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷3种溶剂残留量，并对方法进行了研究。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent GC6890型气相色谱仪(安捷伦科技有限公司，FID检测器);AB204 E型电子天平(梅特勒公司)。硫酸氢氯吡格雷(西南药业股份有限公司，批号为120801，120802，120803);N，N－二甲基甲酰胺(色谱纯，美国Tedia);丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷(分析纯，重庆川东化工厂)

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

以聚乙二醇为固定液如 HP－Innowax毛细管柱(30 m×0.53 mm，1.00 μm)为色谱柱，进样口温度 200 ℃，检测器温度220℃，采用程序升温，初始温度为40℃，维持5 min，以60℃ /min迅速升温至200℃，维持3 min。取系统适用性溶液1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图。丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3个成分峰之间的分离度不得小于2.0，理论板数均不得低于5 000。3种溶剂的限度分别为二氯甲烷0.06%，丙酮0.5%，乙酸乙酯0.5%。

2.2 溶液配制

混合对照品贮备液:分别取二氯甲烷0.1 mL、乙酸乙酯1 mL、丙酮1 mL，精密称定，一并置100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺(色谱纯)溶解并定容，冷藏放置;对照品及系统适用性溶液:取贮备液1 mL，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至20 mL，即得;供试品溶液:取样品1.000 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，即得;对照品加供试品溶液:精密称取样品 1.000 g，并准确量取混合对照品贮备液0.5 mL，一并置10 mL容量瓶中，溶解即得。

2.3 方法学考察

专属性试验:取N，N－二甲基甲酰胺(空白溶剂)、3种成分定位溶液、混合对照品溶液和供试样品溶液各1份，进行气相色谱分析，结果见图1，表明空白溶剂无干扰，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3个成分峰之间的分离度均大于2.0，供试品溶液图谱也未见干扰峰，可见方法的专属性符合要求。

检测限与定量限确定:取混合对照品溶液，逐步稀释后进行色谱分析。结果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷峰的信噪比(S/N)为2～3时，检测限分别为 1.6 ×10－6，2.5 ×10－6，6.0 ×10－6，信噪比为 10 时定量限分 别 为 5.0 ×10－6，10.0 ×10－6，18.0 ×10－6，均远低于残留溶剂控制浓度，表明方法灵敏度符合要求。

线性关系考察:分别取混合对照品贮备液 2，4，6，8，10 mL，置 100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，进样分析，记录色谱图。以峰面积为Y轴、浓度为X轴进行线性回归。结果丙酮回归方程为Y=261 176X+39.66(r=0.999 9，n=5)，线性范围为 0.02% ～0.1%;乙酸乙酯回归方程为Y=253 282X+22.40(r=0.999 9，n=5)，线性范围为 0.02% ～0.1%;二氯甲烷为Y=114 296X－13.29(r=0.9998，n=5)，线性范围为 0.0024% ～0.012%。

加样回收试验:取混合对照品贮备液加入样品中，定容使含对照品80%，100%，120%的溶液，平行配制3份，分别进样分析，记录色谱图，计算含量。结果丙酮的回收率为98.9%～101.5% ，RSD=1.11%(n=9);乙酸乙酯的回收率为 98.8% ～101.6% ，RSD=1.09%(n=9);二氯甲烷的回收率为 97.9% ～103.0%，RSD=1.81%(n=9)。

重复性试验:取对照品加入供试品溶液6份，重复进样，记录色谱图。结果峰面积的RSD分别为丙酮0.63%，乙酸乙酯0.63%，二氯甲烷 1.14%。

图1 方法专属性气相色谱图

中间精密度试验:另配制浓度相同的对照品加供试品溶液6份，于不同时间、更换人员进行测定。结果峰面积的RSD分别为丙酮0.95% ，乙酸乙酯 0.90%，二氯甲烷 0.90%。

耐用性试验:取对照品加供试品溶液和混合对照品溶液，考察进样口温度、柱温初始温度以及检测器温度在标准条件和温度变动情况下的测定结果(每个条件2次)。结果进样口温度变化在10℃以下时，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分别为0.27%，0.21%，0.84%;柱温初始温度变化在5℃以下时，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分别为0.39%，0.87%，1.82%;检测器温度变化在10℃以下时，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分别为0.16%，0.22%，0.80%。可见，RSD均小于2.0%，方法耐用性符合要求。

2.4 样品检测

照拟订方法连续对3批样品进行残留溶剂测定，结果3批样品均未检出丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷或该3种溶剂峰均低于检测限，说明样品的相关工艺控制符合要求。

3 讨论

使用涂布聚乙二醇的强极性HP－Innowax毛细管柱，较容易地实现了3种成分的良好分离。在溶剂N，N－二甲基甲酰胺色谱图中，在初始温度维持的色谱区间内，发现了1个明显的杂质峰。该杂质峰虽并未干扰到本法测定的有机溶剂峰，但仍提示了配制对照品及供试品溶液时，需使用纯度要求比较高的色谱级溶剂以避免可能的干扰。

使用样品溶解后直接进样进行毛细管气相色谱分析，对硬件设备的要求较顶空进样法低，且操作简单、耗时少、灵敏度高，测定结果准确、可靠，适合用于硫酸氢氯吡格雷的有机残留量控制。

[1]贾国强，张信红.新型的ADP受体拮抗剂硫酸氢氯吡格雷[J].中国药物应用与监测，2002，17(5):52 －53.

[2]邹 江，迟晓巍，王龙山，等.硫酸氢氯吡格雷位置异构体的合成 [J].中国医药工业杂志，2010，41(1):6 －8.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:61.

[4]田 勇，唐素芳.硫酸氢氯吡格雷中有机溶剂残留量的顶空毛细管气相色谱法测定[J].中国医药工业杂志，2012，43(2):134－136.

[5]人用药物注册技术要求国际协调会.残留溶剂指导原则[M].北京:人民卫生出版社，2000:236.