不同促渗剂对蛇床子软膏透皮吸收特性的影响

周 开，岑锐标，陈伯从

(广东省佛山市中医院药剂科，广东 佛山 528000)

蛇床子为伞形科植物蛇床Cnidium monnieri(L.)Cuss.的干燥成熟果实，具有解毒杀虫、燥湿祛风功效，主要用于外治外阴湿疹、妇人阴痒、湿疹疥癣等。蛇床子素是蛇床子提取物中主要的香豆素类有效成分，具有抗高血压、抗凝血、抗菌、杀虫、抗炎镇痛等作用[1]。沈琦等[2]报道，高良姜油对5－氟尿嘧啶的促渗作用显著大于氮酮，具有较好的开发价值。参考文献[3－5]，拟以离体裸鼠腹部皮肤为屏障，采用改良扩散池法研究氮酮、油酸和高良姜挥发油对蛇床子软膏中蛇床子素经皮吸收的影响，为蛇床子外用制剂的开发优化提供理论依据。现报道如下。

1 试验材料

Waters高效液相色谱仪(515泵，2487紫外检测器，美国waters公司);N3000色谱工作站(浙江大学);AUW120型电子分析天平;TK－12A型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司);KQ5200DE型数控超声清洗器(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。蛇床子药材(广州致信中药饮片有限公司，经广州中医药大学李薇教授鉴定为正品);蛇床子素对照品(购自广东省药品检验所，批号为110822－200905);高良姜油、硬脂酸、蓖麻油、液体石蜡、三乙醇胺、乳化剂OP、甘油、氮酮(Azone)、油酸(AO)、乙醇均购于广州市东征化玻公司，甲醇均为色谱级，水为去离子双蒸水。裸鼠，6～7周龄，体重(80±15)g，由广州中医药大学实验动物中心提供，实验动物卫生许可证号SCXK(粤)2008－0020，粤监证字2008A002。

2 方法与结果

2.1 蛇床子膏制备

取蛇床子500 g，加10倍量75%乙醇，加热回流提取2次，每次 1.5 h，合并醇提液减压浓缩至相对密度 1.20～1.25(50℃)，得蛇床子提取物。将此提取物分成4份，分别加入三乙醇胺、乳化剂OP、甘油适量，保温至80℃，为水相;另取硬脂酸、蓖麻油、液体石蜡适量加热保温至80℃，为油相;其中3份分别加入处方比例3%的氮酮、油酸和高良姜油，再将油水两相混合，搅拌至冷凝，即得不同促渗剂的蛇床子软膏。

图1 高效液相色谱图

2.2 蛇床子素含量测定(高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温 30 ℃，流动相为甲醇 －水(80∶20)，检测波长 322 nm，流速 1 mL/min，进样量 10 μL。ODS C18保护柱连接于分析柱前。理论塔板数按蛇床子素计应不小于3 000。在上述色谱条件下，蛇床子素与经皮渗透样品峰形良好，且阴性无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察:精密称取蛇床子素对照品10 mg，用乙醇溶解并定容至100 mL，配制成0.1 g/L的贮备液。取贮备液，加乙醇，分别制成质量浓度为 0.1，0.5，2.5，7.5，20.0 μg/mL 的系列对照品溶液，按拟订色谱条件每个样品重复进样3次，以质量浓度(X)对吸收峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程Y=7 020.68X+160.37，r=0.999 6。结果表明，蛇床子素质量浓度在0.1～20.0 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液(2.5 μg/mL)10 μL，分别于1 d内重复测定6次，以峰面积计算，日内精密度的RSD为1.01%;于6 d内每天测定1次，以峰面积计算，日间精密度的RSD为1.58%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 2，4，6，8，10，12，18，24，36 h时依法测定。结果蛇床子素含量的RSD为1.83%(n=9)，表明供试品溶液在36 h内稳定性良好。

回收率试验:取空白接收液9份，分别加入一定量的蛇床子素对照品，制成低、中、高质量浓度(0.5，7.5，20.0 μg/mL)的系列溶液，每个质量浓度制备3份，测定峰面积，计算回收率。结果低、中、高质量浓度回收率的RSD分别为 2.35%，2.14%，1.96%。

2.3 体外透皮试验

离体皮肤制备:将裸鼠脱颈椎处死，立即剥取腹部皮肤，将取下的皮肤平铺在干净的玻璃板上，角质层朝下。用载玻片小心刮去皮下脂肪层和结缔组织，用生理盐水冲洗至无浑浊，置－20℃冰箱保存。试验时目视检视皮肤的完整性，不能有任何破损。

试验操作:取离体裸鼠腹皮，常温下解冻，以生理盐水洗净，用滤纸吸干表面水分，将处理好的皮肤固定于扩散池的供体池和接收池之间，角质层面向供体池，接收池内放置磁力搅拌子。接收池中加入30%乙醇－70%生理盐水作为接收介质，并排出气泡，在供体池中离体鼠皮表面均匀涂抹不同促渗剂的蛇床子软膏。水浴保持(32±0.5)℃，恒速200 r/min。透皮试验开始稳定20 min后，于 1，2，4，6，8，10，12，24 h 时从接收池取样 1 mL，同时补充等体积同温的空白接收液。将所取样品液用0.45 μm微孔滤膜过滤，续滤液采用2.2.1项下方法分别测定接收液中蛇床子素的含量。以其累积渗透量和增渗倍数(ER)为参考量，考察促渗剂对蛇床子素透皮吸收特性的影响。

数据处理:将得到的数据依照下列公式处理，求得累积渗透量、透皮速率和增渗倍数。

Q=(VCn+∑CiVi)/A(i=1，2，……n－1)，JS=dQ/dt×A(即是Q－t方程斜率)，ER=J/J0。式中Qn为t时间药物的累积透过量(μg/cm)，A为渗透面积(cm2)，Cn为t时间浓度测量值(μg/mL)，Ci为t时间以前浓度测量值(μg/mL)，V为接收液总体积(mL)，Vi为每次取样体积(mL);J为透皮速率常数[μg/(cm·h)]，J0为未加促渗剂的透皮速率常数[μg/(cm·h)]。

表1 不同促渗剂对蛇床子软膏透皮特性的影响

图2 不同促渗剂对蛇床子软膏经皮吸收的影响

结果:按上述试验方法进行操作、分析，结果见表1及图2。可见，与不加渗透促进剂组(FCO组)相较，3种促渗剂对蛇床子素均有较好的促进渗透作用，尤以3%高良姜油效果最佳，J达到13.565 μg/(cm·h)，ER为 3.80。因此，蛇床子提取物和高良姜油合用，可以促进蛇床子素的经皮吸收，为二者的配伍提供了理论依据。

3 讨论

软膏剂中药物的作用必须经过释放、穿透和吸收进入血液循环3个阶段，穿透阶段通常成为药物吸收的限速阶段。蛇床子素为香豆素类衍生物，相对分子质量为224，具有一定的透皮性能，但透皮速度受基质因素和角质层限制。为了更好地发挥其药效，加入适量的透皮促进剂是必要的。近年来选用氮酮较普遍，其对人体黏膜产生的刺激最低，有效浓度也低，使用浓度一般在1% ～3%，对亲水性及亲油性药物均有促进作用[6]。油酸可破坏角质层类脂膜结构及在角质层细胞间形成腔隙，促进药物渗透[7]。故选用二者作透皮促进剂参考，考察高良姜油对蛇床子素的透皮促进作用。

中药挥发油作为透皮吸收促进剂，近年来已越来越受到重视，薄荷脑、冰片常用作中药经皮制剂的促渗剂。本研究结果表明，高良姜挥发油对蛇床子素的透皮吸收有较好的促进作用，促渗作用较相同剂量的氮酮和油酸为优，说明高良姜和蛇床子配伍外用是合理的。

[1]刘建新，连其深.蛇床子素的药理学研究进展[J].时珍国医国药，2005，16(12):1 235 － 1 237.

[2]沈 琦，胡晋红，徐莲英.不同来源丁香油、高良姜油对氟尿嘧啶透皮吸收的影响[J].药学服务与研究，2001，1(1):13，30.

[3]王利胜，占建坤，周莉玲.高效液相色谱法测定跌打活络微乳中蛇床子素的含量[J].时珍国医国药，2006，17(1):2 －3.

[4]苑振亭，陈大为，徐 晖，等.渗透促进剂对蛇床子素透皮吸收的影响[J].中国药学杂志，2003，38(9):683 －685.

[5]王利胜，赖宝林，吴 阳，等.氮酮对跌打活络微乳喷雾剂体外透皮吸收影响的研究[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(6):26－29.

[6]王 霞，吴胜林，刘 莉，等.几种促渗剂对布洛芬巴布剂体外透皮性的影响[J].湖北中医药大学学报，2011，10(5):41－43.

[7]廉云飞，李 娟，平其能，等.吲哚美辛微乳的制备及经皮吸收研究[J].中国医药工业杂志，2005，36(3):148－152.