自拟康肾口服液对大鼠庆大霉素急性肾损伤模型的影响

赵京生，易伟国

康肾口服液由人参、生黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、怀山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草等组成，具有益气温阳，固本涩精，活血通络之功，用于慢性肾炎、肾病综合征、阳痿早泄等治疗。为探究疗效原理笔者对庆大霉素诱发大鼠急性肾损伤模型的影响进行了实验研究。室提供，批号20110425；尿毒清颗粒，山康辰药业（内蒙古）有限责任公司生产，批号20110114；呋塞咪片，天津力生制药股份有限公司生产，批号1101008；氯化钠注射液，河南太龙药业股份有限公司生产，批号11082465；硫酸庆大霉素注射液，河南辅仁怀庆堂制药有限公司生产，批号1108301；甲醛溶液（分析纯），烟台市双双化工有限公司生产，批号20110310；冰乙酸（分析纯），天津市恒兴化学试剂制造有限公司生产，批号20110113；肌酐（Cr）试

1 实验材料

1.1 药品 康肾口服液由解放军第371医院制剂剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20111223；尿素氮（BUN）试剂盒（脲酶法），南京建成生物工程研究所生产，批号20111223；尿蛋白定量试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20120109；尿 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)（ELISA）试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20111201B；考马斯亮兰试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20111227；SOD试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20120105；丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，批号20111227。

1.2 实验动物 大鼠，清洁级，Wistar，河北省动物实验中心提供，合格证号1112128。

1.3 仪器 UV－2000紫外可见分光光度计，尤尼柯 （上海）仪器有限公司；酶标仪，680Microplate Reader，Bio-Rad Laboratories；TGL-16G 台 式 离 心机，上海安亭科学仪器厂；DY89-1型电动玻璃匀浆机，宁波新芝生物科技有限公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。

1.4 实验方法 取清洁级雄性Wistar大鼠84只，随机均匀分为7组，12只/组；其中1组为空白对照组，其余6组造庆大霉素急性肾损伤模型。造模型6组大鼠分别于每天上午腹腔注射硫酸庆大霉素注射液140 mg/kg造模（1 ml/100 g），下午分别灌服大、中、小剂量康肾口服液（20 ml原药液/kg、10 ml原药液/kg、5 ml原药液/kg，原药液、生理盐水稀释1倍、生理盐水稀释2倍，2 ml/100 g）、尿毒清颗粒混悬液（4.2 g/kg，用生理盐水配成 0.21 g/ml，2 ml/100 g）、呋塞咪片混悬液（6.6 mg/kg，用生理盐水配成0.33 mg/ml，2 ml/100 g）和同体积的生理盐水（2 ml/100 g）；空白对照组腹腔注射等体积生理盐水和灌服同体积生理盐水。每天上午造模型、下午灌服相应药物，连续用药7 d。于第7天造模后灌服相应药物，于给药后1 h将大鼠放入代谢笼中收取24 h尿液，按试剂盒说明书测尿肌酐、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）；第8天大鼠眶静脉采血，分别测血肌酐、尿素氮；然后处死大鼠，迅速开腹取两侧全肾，用滤纸吸干肾表面血液后称重；取右肾脏制成10%的匀浆，按试剂盒说明书测SOD、MDA水平；左肾用10%甲醛固定，切片，镜检。

1.5 测定项目 肾系数的测定：将大鼠处死后，迅速开腹取两侧全肾，用滤纸吸干肾表面血液后称重，肾系数=两侧肾质重和（g）/体质重（kg）×100%。

血、尿标本测定：血肌酐（除蛋白法）、尿素氮及尿肌酐（除蛋白法）由紫外分光光度计完成，尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)由酶标仪完成。严格按说明书操作。

肾皮质匀浆测定：超氧化物歧化酶（SOD）（羟胺法），丙二醛（MDA）（TBA法）。采用南京建成生物工程研究所试剂盒。严格按说明书操作。

肾组织形态学检测：肾组织标本用10%甲醛固定，石蜡包埋，切成3 μm厚的切片，分别做HE染色，以做光学显微镜检查。

计算公式：

蛋白含量（g/L）=测定管OD值-空白管OD值标准管OD值-空白管OD值×标准管浓度（g/L）

表 1 各组大鼠肾指数及尿蛋白总量（±s）

表 1 各组大鼠肾指数及尿蛋白总量（±s）

注：与模型组比，#P<0.01

组别 n 剂量（ml原药液/kg） 肾指数（g/100 g） 尿蛋白总量（mg/L）空白对照组 12 0.799±0.040# 616.3±144.0#模型组 11 1.200±0.030 1702.8±140.3呋塞米片组 11 6.6 mg 1.100±0.098# 1373.6±241.1#尿毒清颗粒组 12 4.2 g 1.030±0.081# 1373.0±188.9#大剂量肾康口服液组 12 20 1.079±0.089# 1533.0±175.8#中剂量肾康口服液组 12 10 1.028±0.085# 1589.4±129.6#小剂量肾康口服液组 12 5 1.029±0.068# 1513.6±175.1#

2 结果

从表1可看出，与空白对照组比，模型组肾指数及尿蛋白总量均显著增加（P<0.01），说明造庆大霉素大鼠肾病模型成功。与模型组比，大、中、小剂量康肾口服液组、呋塞咪片组和尿毒清颗粒组均可显著降低肾指数（P<0.01），均可显著降低尿蛋白总量（P<0.01）；以中、小剂量康肾口服液组对肾指数的降低作用为好，以小剂量康肾口服液组对尿蛋白总量的降低作用为好。

从表2可看出，与空白对照组比，模型组血肌酐、尿素氮均显著增高（P<0.01），尿肌酐显著减少（P<0.01），说明造庆大霉素性大鼠肾病模型成功。与模型组比，大、中、小剂量肾康口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血肌酐（P<0.01）；小剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组可显著降低尿肌酐 （P<0.01），中剂量康肾口服液组可明显降低尿肌酐（P<0.05）；各给药组均有降低尿肌酐的趋势（P<0.05）；以中、小剂量康肾口服液组对血肌酐、尿素氮的降低作用为好。

从表3可看出，与空白对照组比，模型组血NAG 和MDA水平均显著升高（P<0.01），血SOD活力显著降低（P<0.01），说明造庆大霉素性大鼠肾病模型成功。与模型组比，大、中剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血NAG水平（P<0.01），小剂量康肾口服液组和呋塞咪片组可明显低血NAG水平（P<0.05）；中、小剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血MDA水平 （P<0.01），大剂量康肾口服液组和和呋塞咪片组可明显降低血MDA水平（P<0.05）；大剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组可显著降升高血SOD活力 （P<0.01），中、小剂量康肾口服液组可明显升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中剂量康肾口服液组对庆大霉素性大鼠肾病模型血NAG和MDA水平的降低作用、对血SOD活力升高作用为好。

表 2 各组大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

表 2 各组大鼠血肌酐、尿素氮和尿肌酐水平（±s）

注：与模型组比，*P<0.05，#P<0.01

组别 动物数（只） 剂量（ml原药液/kg） 血肌酐（μmol/L） 尿素氮（mmol/L） 尿肌酐（μmol/L）空白对照组 12 24.411±5.678# 9.463±2.324# 4391.9±1315.6#模型组 11 79.383±16.854 32.20±6.822 2566.0±1686.9呋塞咪片组 11 6.6 mg 68.238±18.134 28.515±7.953 2837.9±1115.3尿毒清颗粒组 12 4.2 g 57.533±11.994# 24.235±4.208# 3232.8±1085.3大剂量肾康口服液组 12 20 59.684±13.816# 24.663±10.488 3409.8±1471.4中剂量肾康口服液组 12 10 53.016±9.612# 24.417±6.951* 3285.2±1311.8小剂量肾康口服液组 12 5 55.382±13.140# 21.339±4.092# 3374.9±1006.2

表 3 各组大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

表 3 各组大鼠血NAG、MDA水平和SOD活力（±s）

注：与模型组比，*P<0.05，#P<0.01

组别 动物数（只） 剂量（ml原药液/kg） NAG（u/L） MDA（nmol/mg） SOD（u/mg）空白对照组 12 3.626±0.720# 0.785±0.116# 239.0±63.1#模型组 11 7.257±0.886 1.384±0.392 162.8±19.0呋塞咪片组 11 6.6 mg 6.134±1.452* 0.963±0.356* 186.9±38.9尿毒清颗粒组 12 4.2 g 4.167±0.846# 0.814±0.199# 209.1±43.3#大剂量康肾口服液组 12 20 5.881±0.698# 0.972±0.387* 195.8±25.9#中剂量康肾口服液组 12 10 5.811±1.084# 0.810±0.178# 191.0±32.9*小剂量康肾口服液组 12 5 6.015±1.374* 0.901±0.298# 188.6±34.6*

3 讨论

本实验造庆大霉素大鼠急性肾损伤模型成功。与模型组比康肾口服液组、呋塞咪片组和尿毒清颗粒组均可显著降低肾指数（P<0.01），显著降低尿蛋白总量（P<0.01）；康肾口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血肌酐（P<0.01）以中、小剂量康肾口服液组对血肌酐、尿素氮的降低作用为好。大、中剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血NAG水平（P<0.01），小剂量康肾口服液组和呋塞咪片组可明显低血NAG水平（P<0.05）；中、小剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组均可显著降低血MDA水平（P<0.01），大剂量康肾口服液组和和呋塞咪片组可明显降低血MDA水平（P<0.05）；大剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组可显著降升高血SOD活力（P<0.01），中、小剂量康肾口服液组可明显升高血SOD活力（P<0.05）；以大、中剂量康肾口服液组对庆大霉素性大鼠肾病模型血NAG和MDA水平的降低作用、对血SOD活力升高作用为好。

本实验提示：康肾口服液对慢性肾炎、肾病综合征有较好的治疗作用，且优于尿毒清颗粒和呋塞咪片。

志谢 本实验在河南中医学院苗明三教授指导下完成，特此致谢

[1]汪延辉，刘 毅，吕吟秋，等.阿魏酸钠和硝苯地平对大鼠庆大霉素肾毒性的干预作用[J].中国中西医结合肾病杂志，2009，10(3):244-245.

[2]汪延辉，刘 毅，郭利明，等.番茄红素对大鼠庆大霉素肾毒性的保护作用[J].中国中西医结合肾病杂志，2008，9(2):141-142.

[3]陈秀兰，郭 丽，张予阳，等.固精丹对庆大霉素急性肾损伤的防治作用及机制研究[J].中成药，2007，29(6):801-805.

[4]樊文广，袁亚光，杨 盛.川芎及黄芪预防庆大霉素致大鼠急性肾功能衰竭的实验研究[J].内蒙古医学杂志，2007，39(2):146-150.