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山沉香的质量控制研究

2013-08-28乌力吉王青虎格根苏布德

中成药 2013年6期
关键词:三氯甲烷试液羟基

奥·乌力吉, 王青虎, 荣 君, 格根苏布德, 晓 明

(内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古通辽 028000)

山沉香为木犀科植物贺兰山丁香Syringapinnatifolia flemslvar.alashanensisMaet S.Q.Zhou除去皮的干燥根和枝干,具有镇“赫依”、清热、止痛、平喘等功效,主治心“赫依”热、气喘、失眠、心跳、心绞痛等症,主要分布于我国的内蒙古阿拉善盟贺兰山水源涵养林保护区[1-2]。山沉香现已载入蒙医药相关书籍[3-4],但除其蒙药学和挥发油研究之外[5-11],本品没有“鉴别”和“定量测定”项,这对山沉香的质量、疗效和安全有一定的影响。根据山沉香化学成分前期研究结果可知,山沉香主要成分有挥发油、香豆素及木脂素类化合物。为了该药的正确使用和安全有效性,本实验采用TLC法对不同来源的山沉香进行鉴别,同时运用HPLC法同时测定其中 3,3'-二甲氧基-4,4',9,9'-四羟基简单木脂素、3,4(3',4')-二亚甲二氧基-9,9'-二羟基简单木脂素、Syripinnalignan A、Syripinnalignan B、Syripinnalignan C的量,为综合评价山沉香药材的质量提供参考依据。

1 仪器与试药

KQ—100型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);AUW200D型电子天平 (日本岛津);高效液相色谱仪(LC10—Atvp输液泵,SPD—M10Avp检测器,SCL—10Avp工作站,DGU—12A脱气机);UV—2501PC型分光光度计 (日本岛津)。乙腈和甲醇为色谱纯 (天津市光复精细化工研究所);水为超纯水;三氯甲烷、无水甲醇、无水乙醇和磷酸等均为分析纯;硅胶G(上海海洋化工厂);syripinnalignan B(S1),syripinnalignin A(S2),syripinnalignan C(S3),3,3'-二甲氧基-4,4',9,9'-四羟基简单木脂素 (S4),3,4(3',4')-二亚甲二氧基-9,9'-二羟基简单木脂素 (S5)均为自制[12]并用高效液相色谱仪分别测定其纯度均高于99.0%,可作为对照品使用,结构式见图1。药材来源见表1。

表1 药材来源

2TLC鉴别

2.1 供试液制备 称取山沉香1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇20 mL,超声处理30 min,摇匀,滤过。吸取滤液5 mL,置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,既得。

2.2 对照品贮备液的制备 分别精密称取S1、S2、S3、S4、S5各10 mg,置于10 mL量瓶,加甲醇溶解并用甲醇稀释至刻度,即得。

2.3 展开分析 分别吸取不同来源的样品供试液和对照品溶液 (S1、S2)5 μL,点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶板上,以三氯甲烷-丙酮 (10∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,用5%的香草醛硫酸乙醇溶液显色,加热使斑点清晰。结果见图2。

3 山沉香的定量测定

3.1 提取溶剂选择 称取样品 (A1)4份,每份1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别加三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇 (1∶1)、甲醇和75%甲醇20 mL,密塞,称定质量,超声处理30 min,再称定其质量,分别用三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇 (1∶1)、甲醇和75%甲醇补足损失的质量,摇匀,滤过。分别吸取滤液10 mL,蒸干,加色谱甲醇溶解并定容至10 mL。在实验所用的色谱条件下,测定色谱图,结果见图3和表2。

图1 5种对照品的结构式

图2 不同来源山沉香和S1、S2的TLC色谱图

图3 不同溶剂提取液HPLC色谱图

根据图3和表2的结果可知,除三氯甲烷提取液的色谱峰其余提取液色谱峰的吸收峰形状、数目和位置基本一致,但甲醇中被检测化合物的峰面积较高,故选择甲醇作为提取溶剂。

表2 不同溶剂提取液中被检测化合物的峰面积

3.2 检测波长扫描 取山沉香样品供试液 (A1)和对照品溶液适量,在200~400 nm范围内进行扫描,结果见图4。根据扫描结果选定281 nm为检测波长。

图4 样品和5种对照品的UV扫描图

3.3 色谱条件的选择 大连依利特hypersil ODS2色谱柱 (300 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长281nm,流动相为甲醇-水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min,记录色谱图时间40 min;进样量20 μL。在上述色谱条件下,syripinnalignan B(S1),syripinnalignin A(S2),syripinnalignan A(S3),3,3'-二甲氧基-4,4',9,9'-四羟基简单木脂素 (S4),3,4(3',4')-二亚甲二氧基-9,9'-二羟基简单木脂素 (S5)达到基线分离 (R>1.5),理论塔板数均不低于4 500。梯度洗脱程序见表3。

表3 梯度洗脱程序

3.4 方法学考察

3.4.1 标准曲线的绘画 精密吸取S1、S2、S3、S4、S5对照品贮备液适量,分别用色谱甲醇配成不同质量浓度的系列对照品溶液,按上述色谱条件和方法分析测定,以对照品的质量浓度 (μg/mL)为横坐标,对照品峰面积为纵坐标绘制标准曲线,计算其回归方程式,结果见表4。分离色谱图见图5。

表4 线性关系考察

图5 山沉香供试液和对照品溶液HPLC色谱图

3.4.2 精密度试验 S1,S2对照品贮备液适量,用色谱甲醇稀释至20 μg/mL对照品溶液,S3、S4、S5对照品贮备液适量稀释成6 μg/mL对照品溶液。在上述色谱条件下,进样量20 μL,进样6次,测得峰面积,计算S1,S2,S3,S4,S5的RSD值分别为1.02%、1.04%、1.98%、1.42%和1.56%。

3.4.3 稳定性试验 精密吸取供试液 (A1)20 μL,注入色谱仪,在24 h内每隔一定时间测定1次,进行稳定性考察。在24 h内测定5次,数据稳定。S1、S2、S3、S4、S5的RSD分别为1.18%、1.22%、2.01%、1.88%和1.74%。

3.4.4 重复性试验 取供试品 (A1)6份,精密称定,按上述色谱条件和定量测定项下进行测定,S1,S2,S3,S4,S5的 RSD分别为 1.19%、1.34%、1.89%、2.01%和1.81%。

3.4.5 加样回收率试验 称取供试品 (A1)6份,每份0.05 g,精密称定,按照表5分别精密加入S1,S2,S3,S4,S5,并按定量测定法进行测定,计算回收率,结果见表5。

表5 加样回收试验结果表(n=3)

3.4.6 定量测定 在上述色谱条件下,吸取不同来源山沉香供试液20 μL,注入色谱仪,按外标二点法计算质量分数。结果见表6。

表6 样品测定结果 (n=5)

4 讨论

本实验选用的展开系统的专属性、分离度和重复性较好,可作为山沉香定性鉴别的依据。

以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇 (1∶1)、甲醇和75%甲醇为溶剂进行了提取率的比较。结果S3在三氯甲烷中提取率高外,其余被检测成分在甲醇中提取率均高于其他溶剂,故选用甲醇为提取溶剂。

色谱条件选择中先用几种甲醇和水的等梯度洗脱,色谱峰分离不好,所以选用了梯度洗脱。在实验所用的梯度洗脱条件下,5种对照品与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。

根据表6可知,不同来源山沉香中化合物S1和S2的相对含有量较高,但来源不同其相对含有量变化不大,其他成分也变化不大。这说明不同来源山沉香中化学成分基本一致。

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