石榴茶提取物对小鼠抗疲劳抗氧化作用的研究

刘志国，赵文亚，刘洪波，张清，鲍娟，杜文娅

（1.枣庄学院体育学院，山东枣庄 277160；2.枣庄学院生命科学学院，山东枣庄 277160）

近年来有研究证明，很多植物性食品如绿茶、普洱茶等的提取物能有效地清除运动时机体产生的自由基，提高体内糖原含量，增强机体的运动能力。

茶是一种常见的饮品，有关抗疲劳抗氧化作用的研究，杜云研究了茶多酚对运动大鼠抗疲劳作用的实验研究[1]，张冬英等研究了普洱茶熟茶抗疲劳作用研究[2]，梁勇等研究了云南绿茶抗疲劳作用的研究[3]。作为茶叶中的的一个特有品种，石榴茶以其清香醇厚的口感和良好的保健功能深受广大消费者的喜爱[4]。用水把石榴茶中的有效成分提取出来即石榴茶提取物，目前对于石榴茶提取物抗氧化抗疲劳作用的研究文献还比较少。本实验拟以石榴茶提取物为原料，研究其对小鼠运动能力和心肌抗氧化能力的影响，为深入研究石榴茶的保健作用，推动石榴茶产业的发展提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 石榴茶提取物

采用购至两个厂家的石榴茶（山东枣庄榴园榴叶茶厂和峄县榴茶厂）进行制备。

1.1.2 实验动物

昆明种小鼠，雌雄各40 只，体重（20±2）g，购自济南立秋实验动物繁殖中心，动物合格证号SCXK（鲁）20110024。

1.1.3 试剂

SOD 试剂盒、MDA 试剂盒、GSH-Px 试剂盒、LG试剂盒、MG 试剂盒，均购自上海恒远生化试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 石榴茶提取物的制取

将石榴茶粉碎，沸水浸提，茶水之比为1 ∶20，然后进行减压浓缩，制成石榴茶提取液，其浓度为1 ∶1，降至室温后低温冷藏[5]。

1.2.2 动物给药及分组

小鼠进行群养，每日喂食专用鼠饲料（山东大学医学院动物实验中心提供），自由饮用纯净水。6 d 后，按照每组20 只进行实验把小鼠随机分为4 组：对照组、石榴茶提取物低、中、高剂量组，雌雄各半。根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》的要求，在小鼠实验中其中一个剂量组的剂量应当是人体推荐剂量的5 倍，且最高剂量不超过人体推荐剂量的30 倍[6]。低、中、高剂量组分别给予石榴茶提取物0.5、1.0、2.0 g/kg，相当于推荐人体剂量的5 倍、10 倍、20 倍。采取灌胃法，在每天11：00～12：00 间，对照组小鼠每天分别一次性灌胃蒸馏水，低、中、高实验组灌服和相应量的石榴茶提取物溶液，其余时间自由进食饮水。每5 d 称体重一次，然后根据体重灌胃，持续30 d。

1.2.3 力竭游泳时间及心肌生化指标的测定

小鼠在末次灌胃20 min 后，按各自体重的5%负重（尾部细棉绳系上相应重量的铅皮）游泳，投入温度（25±1）℃，深35 cm 的水池中，记录小鼠从入水至不再浮出水面所持续的时间。第一批4 个组别的实验各取10 只小鼠平行进行，以减少系统误差。采用断头法迅速处死力竭小鼠，生理盐水冲洗取出的心脏、然后滤纸吸干水分，再用生理盐水制成10%的均匀浆液，倒入离心管，3 000 r/min 离心12 min，然后冷藏，按照标准测定方法严格操作，测定心肌中GSH-Px、SOD、MDA 的含量。

1.2.4 运动后肝脏和后腿肌肉中生化指标的测定

第二批每组10 只小鼠在末次灌胃20 min 后，在水温（25±1）℃的水中游泳10 min，然后立即断头处死，迅速取出小鼠的肝脏和后腿肌肉，用生理盐水冲洗、滤纸吸干水分，然后用生理盐水制成10%的匀浆液，倒入离心管，3 000 r/min 离心12 min，取上清液，按照试剂盒说明严格操作，测定肝脏中LG 和后腿肌肉中MG 的含量。

1.3 统计分析

2 结果与分析

2.1 石榴茶提取物对小鼠力竭游泳时间的影响

石榴茶提取物对小鼠力竭游泳时间的影响，见表1。

表1 石榴茶提取物对小鼠力竭游泳时间的影响（，n=10）Table 1 The influence of pomegranate tea extract on the swimming time in exhausted rats

小鼠负重游泳能力与抗疲劳效果呈正相关，能反映小鼠运动水平的高低。由表1 可知，小鼠负重游泳时间较对照组要长。低剂量组和对照组相比有显著性差异（P＜0.05），中剂量组和高剂量组与对照组相比有极显著性差异（P＜0.01）。表明石榴茶提取物能不同程度延长小鼠游泳的时间，提高抗疲劳能力，其中以高剂量组效果最好。

2.2 石榴茶提取物对小鼠运动后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影响

石榴茶提取物对小鼠运动后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影响，见表2。

表2 石榴茶提取物对小鼠运动后SOD、MDA 和GSH-Px 含量的影响（，n=10）Table 2 The influence of pomegranate tea extract on SOD，MDA and GSH-Px in post-exercise rats

有研究证明，小鼠体内SOD、GSH-Px 的含量与抗疲劳效果呈正相关，MDA 的含量与抗疲劳效果呈负相关。实验结果从表2 可以看出，SOD 在实验组中小鼠心肌中的含量与低、中、高剂量组相比均有增高趋势，分别增加了4.15%、8.99%和19.09%，其中低剂量组和对照组呈显著性差异（P＜0.05），中、高剂量组均和对照组呈极显著性差异（P＜0.01）；与对照组相比，实验组中MDA 的含量依次降低了0.35%、4.95%、12.01%，其中，中、高剂量组和对照组相比分别呈显著性差异（P＜0.05）和极显著性差异（P＜0.01）；与对照组相比，低、中、高剂量组中GSH-Px 的含量依次提高了10.94 %、44.53%、74.22%，其中低剂量组和对照组呈显著性差异（P＜0.05），中、高剂量组和对照组呈极显著性差异（P＜0.01）。实验表明，石榴茶提取物对于提高心肌的抗氧化能力有较好地促进作用。

2.3 石榴茶提取物对小鼠运动后LG 和MG 含量的影响

石榴茶提取物对小鼠运动后LG 和MG 含量的影响，见表3。

表3 石榴茶提取物对小鼠运动后LG 和MG 含量的影响（，n=20）Table 3 The influence of pomegranate tea extract on LG and MG in post-exercise rats

体内糖的主要储备形式是肝糖原和肌糖原，其量的多少反映小鼠的运动能力，决定抗疲劳效果。实验证明，由表3 所示，与对照组相比，实验组中小鼠肝脏中LG 的含量依次增高，其中低剂量组呈显著性差异（P＜0.05），中、高剂量组均呈极显著性差异（P＜0.01）；与对照组相比，实验组低、中、高剂量组后腿肌肉中MG 的含量均有增高，其中低剂量组呈显著性差异（P＜0.05），中、高剂量组和对照组均呈极显著性差异（P＜0.01）。实验表明，石榴茶提取物能较好地提高肝脏中LG 和后腿中MG 的含量，提高小鼠的运动和抗疲劳能力。

3 讨论

运动性疲劳是机体运动能力下降的现象。大强度运动后小鼠生理生化指标会发生变化，产生大量自由基，是造成运动性疲劳的重要因素。为了提高运动能力，可从增加体内抗氧化剂和糖原含量来抑制运动性疲劳[7-8]。通过石榴茶提取物对小鼠抗疲劳作用的研究，根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》结果判定原则，“若1 项以上（含1 项）运动试验和2 项以上（含2 项）生化指标为阳性，即可以判断该受试物具有抗疲劳作用。”，实验显示：石榴茶提取物能增强小鼠游泳能力，提高心肌中SOD 和GSH-Px 的含量并降低MDA 含量，增强肝糖原和肌糖原的储备能力，显示石榴茶提取物能提升小鼠抗氧化抗疲劳能力，为石榴茶的推广应用提供了依据。

[1]杜云.茶多酚对运动大鼠抗疲劳作用的实验研究[J].西北大学学报：自然科学版,2012,42(5)：783-786

[2]张冬英,黄业伟,汪晓娟,等.普洱茶熟茶抗疲劳作用研究[J].茶叶科学,2010,30(3)：218-222

[3]梁勇,邵宛芳,黄业伟,等.云南绿茶抗疲劳作用研究[J].食品工业科技,2011,32(1)：271-272

[4]刘金勇,李秀娟.峄城区石榴茶产业发展战略[J].中国林副特产,2004,71(4)：65-66

[5]黄业伟,邵宛芳,冷丽影,等.普洱茶生茶抗疲劳作用研究[J].西南农业学报,2010,23(3)：801-804

[6]国家卫生部卫生法制与监督司.保健食品功能学评价程序和检验方法[M].北京：国家卫生部,1996：6-7

[7]曲绵域,高云秋,浦钧宗,等.实用运动医学[M].北京：北京科学技术出版社,2003：198-201

[8]Coyle C H,Philips B J,Morrisroe S N,et al.Antioxidant effects of green tea and its polyphenols on bladder cells[J].Life sci,2008,83(1/2)：12-18