PTEN、p16、突变型 p53在膀胱癌组织中的表达及意义

王新华，崔 涌，孟宪杰

(石河子人民医院，新疆石河子832000)

膀胱尿路上皮癌的发生发展是一个多因素、多基因作用的复杂过程，与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。通常认为，遗传学上的基因突变是肿瘤发病机制中的关键事件，尤其是抑癌基因突变，与肿瘤的发生有密切关系。本研究通过检测膀胱癌组织中抑癌基因PTEN、p16及突变型p53的表达情况，探讨PTEN、p16、突变型p53在膀胱癌组织中的表达及意义。

1 资料与方法

1．1 临床资料 选择2005年1月～2010年10月在石河子人民医院行手术切除的膀胱癌患者45例，男30例、女15例，年龄38～80岁、中位年龄65岁，术前均未经过放化疗。经病理检查证实为膀胱癌，肿瘤分级按WHO的分级标准，低级别尿路上皮癌24例，高级别尿路上皮癌21例。取手术切除的膀胱肿瘤组织标本作为观察组。对照组为12例前列腺增生、膀胱结石、输尿管囊肿患者经膀胱手术所取正常膀胱黏膜组织。

1．2 方法

1．2．1 检测方法 将标本用10%中性甲醛固定，石蜡包理，连续切4μm厚切片。采用免疫组化SP法检测组织中PTEN、p16、突变型p53的表达，操作步骤严格按照说明书进行。PTEN为鼠抗人单克隆抗体，p16为鼠抗人单克隆抗体，突变型p53为鼠抗人单克隆抗体，均购自中杉生物技术公司。PBS代替一抗作阴性对照。切片脱蜡水化后，3%H2O2室温处理10 min，抗原热修复，血清室温孵育10 min，滴加一抗，4℃过夜，滴加生物素标记的二抗，室温孵育10 min，滴加辣根过氧化酶标记的链亲和素，室温10 min显色。苏木精复染，脱水，透明，封片。以细胞质或细胞核呈棕黄色为阳性细胞，每例随机观察10个高倍视野，计算阳性细胞百分率，阳性细胞百分率≥5%为阳性，＜5%或缺乏为阴性。

1．2．2 统计学方法 采用 SPSS13．0统计软件，PTEN、p16及突变型p53表达与各病理指标的相互关系比较采用χ2检验和四格表的精确概率法判断。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 PTEN、p16、突变型p53在膀胱癌和正常膀胱组织中的表达比较 PTEN阳性反应大多定位于细胞质(见图1)，膀胱癌和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为44．4%(20/45)和91．7%(11/12);p16阳性反应定位于细胞质或细胞核(见图2)，在膀胱癌和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为42．2%(19/45)和100%(12/12);突变型p53阳性反应定位于细胞核(见图3)，在膀胱癌和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为46．7%(21/45)和16．7%(2/12)。三者在膀胱癌和正常膀胱组织中的表达比较均有统计学差异(P均＜0．05)。

2．2 膀胱癌组织中PTEN、p16、突变型p53的表达与临床病理特征的关系 见表1。

2．3 PTEN、p16、突变型 p53的相关性 20例PTEN表达阳性组织中，p16表达阳性12例(60．0%);25例PTEN表达阴性组织中，p16表达阳性7例(28．0%);两者比较有统计学差异(P＜0．05)。19例p16表达阳性组织中，突变型p53表达阳性12例(63．2%);26例p16表达阴性组织中，突变型p53阳性表达9例(34．6%);两者比较无统计学差异(P＞0．05)。20例PTEN表达阳性组织中，突变型 p53表达阳性 11例(55．0%);25例PTEN表达阴性组织中，突变型p53阳性表达10例(40．0%);两者比较无统计学差异(P ＞0．05)。

图1 p16在膀胱癌组织中的阳性表达(×200)

图2 PTEN在膀胱癌组织中的阳性表达(×200)

图3 p53在膀胱癌组织中的阳性表达(×200)

表1 PTEN、p16、突变型p53的表达与膀胱癌的临床病理特征的关系(例)

3 讨论

膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，其中90% ～95%是尿路上皮癌［1］。目前，浸润性膀胱癌仍是患者死亡的主要原因，手术切除肿瘤是膀胱癌的常规治疗方法，然而术后复发率高、易进展导致患者病死率升高。为了更好地监测膀胱癌的进展，国内外学者进行了大量研究，但目前尚无理想的评价膀胱癌生物学行为的方法和标记物。

PTEN是第一个被发现具有磷酸酶活性的抑癌基因，其定位于染色体10q23．3，编码PTEN蛋白，参与氨酸磷酸酶和丝氨酸/苏氨酸磷酸酶介导的信号传导过程，使第二信使PIP3去磷酸化，从而抑制细胞生长和凋亡，在多种肿瘤中频发突变和缺失，其异常表达已证实与多种肿瘤的发生发展密切相关［2］。Tsuruta等［3］研究显示，PTFN基因失表达与膀胱癌的分级、分期密切相关，并促进肿瘤细胞的侵袭和转移，在肿瘤演变中起重要作用。本研究显示，膀胱癌组织中的PTFN阳性表达率明显低于正常膀胱组织，且随着肿瘤恶性程度增高和临床进展呈明显降低趋势，提示PTEN基因表达缺失不仅是膀胱癌发生过程中的早期事件，在肿瘤进展过程中也发挥着重要的作用。而PTEN阳性表达对膀胱癌术后复发无明显影响，与Koksal等［4］的报道一致，表明PTEN不适合作为预测膀胱癌复发的独立指标。

p16基因是1993年由Serrano等发现的肿瘤抑制基因，位居染色体9p21，编码一个相对分子量16 000的多肽［5］。p16基因是直接参与细胞周期调控的抑癌基因，p16与细胞周期蛋白D1竞争结合细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)和(或)CDK6，特异性抑制细CDK4和CDK6活性，从而抑制增殖，是一种多肿瘤抑制基因［6］。p16是CDK的抑制因子，p16-cyclinD/CDK-PRB通路异常是肿瘤发生的早期事件［7］。本研究显示，膀胱癌组织中的p16阳性表达率明显低于正常膀胱组织。随着肿瘤恶性程度的增高，p16阳性表达率明显下降。

p53是细胞周期中重要的调节因子，通过调节p21的转录活性使细胞周期停留在G1～S期［8］，具有调节血管生成、促进凋亡及调节DNA修复的作用，可抑制正常细胞向癌细胞转化［9］。p53基因突变在膀胱癌中很普遍，无论是p53基因突变还是p53蛋白在核内的积聚，都在膀胱癌的进展中起重要作用，且p53蛋白过度表达是膀胱癌高度恶性和预后不良的重要指标之一［10］。本研究显示，随着肿瘤恶性程度的增高，p53阳性表达率明显升高。

本研究进一步对PTEN、p16、突变型p53的相关性进行分析，结果表明，p16基因的表达与PTEN有相关性，随着P16阳性表达率的下降，PTEN阳性表达率也下降，提示二者可能在肿瘤的形成过程中发挥协同作用。

综上所述，p16、PTEN和突变型p53基因表达与膀胱癌的发生发展有密切关系，抑癌基因p16、PTEN失活是膀胱癌发生的早期事件，可作为早期诊断的标记物，随着肿瘤恶性程度的增高，二者表达明显下降，但二者不适合作为预测膀胱癌复发的独立指标;突变型p53蛋白的过度表达是膀胱癌高度恶性的标志之一。

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