逍遥散及其配伍组方对阿尔茨海默病小鼠学习记忆的影响

王虎平 吴红彦

(甘肃中医学院基础课部 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃 兰州 730000)

阿尔茨海默病(AD)已成为严重威胁老年人生活质量甚至生命健康的疾病之一。现代医学对其发病机制认识不清，对症性的治疗根本不能满足临床的需求，于是，研究的方向转向了中医药。本研究基于从肝论治AD，以调肝名方逍遥散干预氢溴酸东莨菪碱所致AD模型小鼠，探讨逍遥散防治AD的作用及其机制，阐释其疏肝、养血、健脾相结合的配伍机制。

1 材料与方法

1.1 主要材料 Y型水迷宫由甘肃中医学院基础医学实验中心自制;逍遥散组成生药购于甘肃中医学院附属医院;氢溴酸东莨菪碱注射液由上海禾丰制药有限公司提供，批号:100101;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒、胆碱乙酰转移酶(ChAT)试剂盒、单胺氧化酶(MAO)试剂盒及考马斯亮蓝蛋白测试盒均为南京建成生物化学试剂有限公司提供，批号:20100522;SPF级KM小鼠60只，体重(20±2)g，雌雄各半，由甘肃中医学院科研实验动物中心提供，合格证号:SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药 KM小鼠随机分为空白组、模型组、逍遥散全方组、疏肝养血组、疏肝健脾组、健脾养血组，每组10只。空白组与模型组小鼠每天灌胃生理盐水0.2 ml/10 g，逍遥散全方组、疏肝养血组、疏肝健脾组、健脾养血组小鼠每天灌胃各组对应药物水煎液0.2 ml/10 g。逍遥散方中各药的剂量均按照2005版《中华人民共和国药典》中逍遥丸剂量换算得到〔1〕，逍遥散全方组(柴胡、当归、白芍、茯苓、白术、煨姜、薄荷、甘草)、疏肝养血组(柴胡、当归、白芍、薄荷)、疏肝健脾组(柴胡、茯苓、白术、煨姜、甘草、薄荷)、健脾养血组(当归、白芍、茯苓、白术、煨姜、甘草)小鼠每天灌胃生药量分别为 2.485、1.136、1.775、2.059 g/kg。连续灌胃给药10 d。

1.2.2 模型复制 给药第6、8、10天，除空白组小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理盐水0.2 ml·10 g－1外，其余各组小鼠分别于灌胃1 h后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱0.02 mg·10 g－1复制AD模型。

1.2.3 Y型水迷宫实验 给药第6、8天，各组小鼠分别于腹腔注射20 min后使用甘肃中医学院基础医学实验中心自制Y型水迷宫进行学习能力训练。给药第10天，各组小鼠分别于腹腔注射20 min后进行记忆能力测试。水迷宫实验中，小鼠从入水臂直接游至安全臂停靠台为正确，进入另一臂则为错误。学习能力以达到连续9次正确所需的次数为指标，超过30次则记为30，每次达到安全台的时间为潜伏时间;记忆能力以15次中正确的次数为指标，并记录每次的潜伏时间〔2〕。

1.2.4 脑组织匀浆SOD、MDA、AchE、ChAT及MAO活性的测定 行为学指标测试结束后，处死动物，迅速取出脑组织，以生理盐水制成10%的脑组织匀浆，用低温离心机3 000 r/min离心15 min，吸取上清液，按试剂盒要求测定小鼠脑组织匀浆SOD、MDA、AchE、ChAT 及 MAO 活性。

2 结果

2.1 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠学习能力及学习潜伏时间的影响 与空白组相比，模型组小鼠学习能力低下、潜伏时间较长，有显著性差异(P＜0.01)。与模型组相比，逍遥散全方组及各配伍组方组均能提高小鼠学习能力、降低其潜伏时间，有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);但以全方组最为明显，与各配伍组方组相比，有显著性差异(P＜0.05)。见表1。

2.2 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠记忆能力及记忆潜伏时间的影响 与空白组相比，模型组记忆能力低下、潜伏时间较长，有非常显著性差异(P＜0.01)。与模型组相比，逍遥散全方组及各配伍组方组均能提高小鼠记忆能力、降低潜伏时间，有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);但以全方组最为明显，与各配伍组方组相比，有显著性差异(P＜0.05)。见表2。

表1 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠学习能力及学习潜伏时间的影响，n=10)

表1 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠学习能力及学习潜伏时间的影响，n=10)

与模型组相比:1)P＜0.05，2)P＜0.01;与逍遥散全方组相比:3)P＜0.05，表2～4同

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表2 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠记忆能力及记忆潜伏时间的影响n=10)

表2 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠记忆能力及记忆潜伏时间的影响n=10)

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2.3 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠脑组织匀浆SOD、MDA活性的影响 与空白组相比，模型组小鼠脑组织SOD活性增高、MDA活性降低(P＜0.01)。与模型组相比，逍遥散全方组及各配伍组方组均能提高小鼠脑组织SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方组最为明显，与各配伍组方组相比，有显著性差异(P＜0.05)。见表3。

2.4 逍遥散及其配伍组方对AD模型小鼠脑组织 AchE、ChAT、MAO活性的影响 与空白组相比，模型组小鼠脑组织AchE活性增高、ChAT活性降低(P＜0.01)。与模型组相比，逍遥散全方组及各配伍组均能提高小鼠脑组织SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方组最明显，与各配伍组相比差异显著(P＜0.05)。见表4。

表3 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠脑组织匀浆SOD、MDA活性的影响s，n=10)

表3 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠脑组织匀浆SOD、MDA活性的影响s，n=10)

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表4 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠脑组织匀浆AchE、ChAT、MAO活性的影响，n=10)

表4 逍遥散及各配伍组方对AD模型小鼠脑组织匀浆AchE、ChAT、MAO活性的影响，n=10)

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3 讨论

现代医学认为，AD的发病可能与基因突变、免疫功能紊乱、神经递质改变、神经生长营养因子缺失等诸多因素有关，相应的治疗多为胆碱酯酶抑制剂、抗氧化剂、神经营养因子、兴奋性氨基酸等对症给药，根本不能满足患者的临床需求。中医药在AD的防治中取得了一定的成效。中医学认为，AD主要在于肾、心、脾三脏功能的失调，总属本虚标实，虚责之于年老体弱、五脏虚损、脑失所养;实责之于气滞血瘀、痰浊内阻、蒙蔽脑窍，多以补益心肾，填精益髓，散血化痰，开窍醒神为治。

本课题组基于中医基本理论和现代药理研究，认为AD与肝功能的失调密切相关。经云:“肝者，将军之官，谋虑出焉”，“肝者，罢极之本，魂之居也”。肝主疏泄，畅情志，藏阴血，司筋脉，为神魂之居，行为之主，与AD精神与行为两方面的失常关系甚密。据此，我们提出了从肝论治AD的假说，并用调肝名方逍遥散系列开展了相关实验研究，取得了良好效果〔3～5〕，为AD的从肝论治及其逍遥散的防治研究奠定了基础。

本研究亦表明，逍遥散及其配伍组方皆能较好的改善AD模型小鼠学习记忆、抗氧化及中枢神经递质活性，对AD有较好的防治作用，更加确立了AD从肝论治的正确性及“调肝”治法的有效性;各组指标皆显示逍遥散全方组明显优于其他配伍组方组，充分体现了逍遥散中疏肝、养血、健脾三者结合的配伍结构与气血同调，体用并治，补泻兼施的协同功用对防治AD的有效性及科学性，为AD提供了新的论治方法和组方思路。至于逍遥散防治AD的深层机理有待进一步探讨。

1 中华人民共和国药典2005年版〔M〕.北京:化学工业出版社，2005:564.

2 陈 勤.抗衰老研究实验方法学〔M〕.北京:中国医药科技出版社，1996:94.

3 吴红彦，王虎平.逍遥散及其拆方对痴呆模型小鼠学习记忆能力及抗氧化能力的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2009;15(10):102-4.

4 吴红彦，王虎平.以肝脾论治老年性痴呆及逍遥散对老年痴呆模型小鼠学习记忆能力、中枢胆碱能神经元活性的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2010;16(5):168-70.

5 吴红彦，王虎平，王彩霞.黑逍遥散对老年性痴呆的防治作用及其机制研究〔J〕.时珍国医国药，2011;22(4):912-3.