血管紧张素原基因M235T多态性和房颤传统危险因素的交互作用

王 成 (新乡市中心医院心血管内一科，河南 新乡 453100)

研究表明遗传因素参与房颤的发生及发展〔1，2〕。肾素-血管紧张素系统(RAS)是体内重要的神经内分泌系统，其过度激活可以引起心房重构，最终导致房颤的发生。血管紧张素原(AGT)是RAS系统重要的组成部分，AGT基因M235T多态性是房颤发生的独立危险因素〔3，4〕。近来国外有研究表明，M235T多态性与高血压、高脂血症共同导致了冠心病的发生〔5，6〕，但目前还没有关于M235T多态性与房颤传统危险因素是否协同导致房颤发生的相关研究。本研究针对中国汉族人群，探讨M235T多态性是否与房颤传统危险因素协同导致房颤的发生。

1 资料与方法

1.1 研究对象 慢性房颤组250例，男146例，女104例，年龄(54.53±6.58)岁，均为2010年5月至2012年5月在本院心内科住院的患者。纳入标准:①静息心电图、24 h动态心电图均提示永久性房颤，并且不伴有其他心律失常;②体表心电图、胸片、超声心动图、生化功能、心肌酶谱及冠状动脉造影等排除冠心病〔7〕、扩张型心肌病、肥厚型心肌病、致心律失常型右室心肌病及心脏瓣膜病等器质性心脏病〔8〕;③排除病态窦房结综合征、长R-R间期、Ⅱ度或高度房室传导阻滞等心律失常;④排除电解质紊乱和代谢性疾病，如风湿性关节炎、糖尿病等。对照组200例，男122例，女78例，年龄(52.04±5.64)岁，为同期在我院体检的健康体检者，经询问病史、心电图、血生化、心脏彩色多普勒超声及心脏ECT等检查排除房颤及其他心律失常，并且均符合上述排除标准。

1.2 AGT基因M235T多态性检测 本实验经过医院伦理委员会批准。病例组和对照组均空腹12 h后采集静脉血4 ml，抽血前均签署知情同意书。采用PCR-RFLP法检测M235T多态性。PCR引物序列如下，引物1:5'-CGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTC-3';引物 2:5'-AGGGTGCTGTCCACACTGGACCC-3'。扩增条件如下:首先于90℃预变性3 min，然后94℃ 1 min，68℃1 min，72℃ 1 min，共35个循环，最后于 72℃延伸10 min。在20 μl反应体系中分别加入 PCR 产物 7 μl和 ThtⅢ酶(10 U/μl，于65℃水浴消化4～6 h。PCR产物及酶切产物均使用琼脂糖凝胶电泳检测。AGT基因PCR产物为163 bp，该产物经ThtⅢ酶切后产生不同的特异性片段，形成3种基因型:MM基因型(野生型)，因不含酶切位点不被切开，显示l条163 bp的扩增片段;MT基因型(杂合子)，同时具有140 bp和163 bp两条条带;TT基因型(突变型)为1条新的140 bp的酶切片段。

1.3 统计学分析 计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验;用基因计数法计算病例组和对照组的基因型频率，是否符合哈迪-温伯格(H-W)平衡定律采用χ2检验;AGT基因M235T多态性与房颤关系采用非条件Logistic回归分析，关联程度用优势比(OR)及95%可信区间(CI)表示，采用SPSS13.0软件进行统计学处理;AGT基因多态性与房颤传统风险因子的关系采用叉生分析表法〔9〕分析。

2 结果

2.1 病例组及对照组临床和生化特征比较 两组年龄及性别分布无统计学差异(P＞0.05)。两组BMI、高血压、糖尿病及脑梗死病史比例、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDLC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 AGT基因多态性分析 对照组M235T基因型分布均符合H-W平衡定律(P＞0.05)。M235T病例组、对照组主要基因型均为TT，两组差别无统计学意义(P＞0.05)，主要等位基因均为T，亦无明显统计学意义(P＞0.05)。见表2。

2.3 Logistic回归分析 以房颤为应变量，年龄、性别、BMI、TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、吸烟史、高血压史、糖尿病史、脑梗死史为自变量。结果表明TG、高血压、糖尿病及脑梗死史以及M235T多态性TT型为房颤发生的独立危险因素。携带AGT基因M235T多态性的TT型患房颤的风险增加(OR=2.02，95%CI=1.14～2.56)。

2.4 AGT基因多态性与传统风险因素的交互研究 将M235T多态性TT型携带者与传统房颤风险因素(TG、TC、HDL-C、LDL-C、TG、高血压、糖尿病及脑梗死等)纳入叉生分析软件，结果表明M235T多态性TT型与患脑梗死或高血压协同增加了患房颤的风险。见表3。

表1 房颤组及对照组特征(s)

表1 房颤组及对照组特征(s)

指标 房颤组(n=250)对照组(n=200)P值54.53±6.58 52.04±5.64 0.34 BMI(kg/m2)23.08±4.53 19.87±3.56 0.56 TG(mmol/L)1.75±0.68 1.18±0.24 0.00 TC(mmol/L)4.95±1.22 3.98±1.58 0.00 HDL-C(mmol/L)1.16±0.36 1.76±0.32 0.00 LDL-C(mmol/L)2.87±0.68 2.31±0.52 0.05男性〔n(%)〕 120(48.0)108(54.0)0.52高血压〔n(%)〕 58(23.2)20(10.0)0.00糖尿病〔n(%)〕 45(18.0)17(8.5)0.001)脑卒中〔n(%)〕 29(11.6)5(2.5)年龄(岁)0.38

表2 两组M235T SNPS基因型及等位基因的分布〔n(%)〕

表3 M235T基因多态性与传统风险因素的交互作用

3 讨论

房颤是最常见的持续性心律失常，国内总发病率为0.4%，随着年龄增长房颤的发生率逐渐增加，＞75岁发病率可达10%左右。其发生与近期心衰史、高血压病史、≥75岁、糖尿病、脑卒中等危险因素相关。M235T多态性是AGT基因第二个外显子的第704位的胸腺嘧啶核苷酸(T)变成了胞嘧啶核苷酸(C)，导致第235个密码子编码的甲硫氨酸(Met)变成了苏氨酸(Thr)，因为第235个密码子编码的氨基酸不一致，形成了两个等位基因:235M(野生型)和235T(变异型)，对人类而言构成了3种基因型:纯合子235MM、235TT和杂合子235MT。M235T多态性增加房颤风险的机制未明，研究表明TT基因型携带者血清AGT水平升高，而AGT水平的升高又相应引起血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度的增加。AngⅡ通过成纤维细胞的AngⅡ受体Ⅰ(ATⅠ)介导，主要经丝裂原活化蛋白激酶家族的细胞外信号调节激酶途径刺激成纤维细胞的增殖，从而诱导其Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌增加，最终导致心房纤维化〔9，10〕。同时，AngⅡ水平增高，通过与AT1受体结合可激活MAPK系统，从而激活 MAPK家族的信号分子ERK，而ERK激活可使缝隙蛋白 S255，S279，S282多位点磷酸化，导致心肌缝隙连接蛋白(Cx)合成增加;升高的AngⅡ与AT1受体结合，经与G蛋白耦联，导致细胞内Ca2+内流增加，从而激活Ca2+依赖的蛋白酶Cal2 pains并破坏细胞亚微结构，导致溶酶体释放，最后使Cx降解增加及含量降低〔11〕。这种合成-降解的失衡可能会引起Cx重构，而心房纤维化和Cx重构对房颤的发生及发展具有重要影响〔4〕。

近年来，基因-环境间交互作用对心血管疾病的影响逐渐成为研究热点。波兰的Niemiec等〔4〕研究纳入255名高加索人(包括158名冠心病患者和97名无冠心病患者)，分析结果表明冠心病患者M235T的T等位基因与血胆固醇过多(TC≥5 mmol/L或LDL-C≥3 mmol/L)协同增加了患冠心病的危险。而M235T多态性与房颤危险因素的交互作用研究目前还未见相关报道。本文发现M235T与脑梗死、高血压协同增加了患房颤的风险，其机制可能是ATⅡ不仅能使小动脉平滑肌收缩及外周血管阻力增加，还能兴奋交感神经系统，使去甲肾上腺素分泌增加及血管收缩，最终促进高血压及脑梗死的发生与发展，其机制还有待进一步研究。

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