38例慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析

刘晓会，卢振霞，胡南均，白元松

（吉林大学中日联谊医院 血液肿瘤科，吉林 长春130033）

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种单克隆性的小淋巴细胞低度恶性造血系统疾病，以外周血及骨髓中成熟的淋巴细胞增多为主要临床特点，从2001年始，WHO分型定义CLL均为B细胞型，取消T细胞－CLL，将其归为T幼稚淋巴细胞白血病［1］。CLL在我国相对少见，近年发病率有升高的趋势［2］，本病发病年龄较晚，临床进程个体差异较大，总生存期从数个月到十余年不等。而免疫表型的研究对CLL的诊断、与其它淋巴系统疾病的鉴别诊断及预后有重要意义，现将我院从2010年1月至2012年12月明确诊断的38例CLL患者的免疫表型特点进行回顾性分析，探讨其与Moreau积分系统、临床分期的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

38例患者均为2010年1月至2012年12月我院初诊的CLL，其中男21例，女17例；年龄34－71岁，中位年龄56岁；Rai分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例。患者均行血常规、外周血涂片、骨髓细胞形态学检查等。所有患者诊断标准参照《血液病诊断及疗效标准》［3］。CLL的评分依据Moreau等［4］提出的免疫表型积分系统（见表1）。

表1 CLL的免疫表型积分系统

1.2 试剂及仪器

单克隆抗体包括 CD5、CD23、CD22、CD20、FMC7、CD19、CD38、CD11C、κ轻链、λ轻链，均购自Becton Dickinson公司，流式细胞仪是Becton Dickinson的BD LSRFortessa型号，应用BD FACSDiva software进行分析。

1.3 抗原的检测

治疗前取肝素抗凝的新鲜骨髓（6h内），1 500 rpm离心5min，弃去上清，加入红细胞裂解液，混匀，冰上裂解5min，加入1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS）终止裂解，1 500rpm离心5min，弃去上清，加入PBS重悬细胞，显微镜下计数有核细胞，取出适当体积的细胞悬液调整细胞数至（0.5－1）×106／ml，采用三色流式分析方案检测细胞抗原，每管加入Fc受体阻断剂，阻断非特异性结合。后加不同组合的抗体，同时做同型对照，混匀，避光冰上孵育20min，上机检测分析，每管获取20000个细胞，抗原表达在淋巴细胞中≥20%为阳性。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0统计软件进行分析，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 相关抗原在CLL中的表达情况

38例患者均表达抗原CD19、HLA－DR，阳性率为100%；CD20、CD22、CD23阳性率均为97.3%，κ轻链阳性率52.6%，CD11C、FMC7、λ轻链的阳性率分别为26.3%、34.2%、26.3%，CD38阳性率为15.8%，无一例表达抗原CD10。见表2。按照Moreau积分系统计算（见表1），38例患者中31例积分≤3分，7例＞3分。

表2 38例CLL患者免疫表型特点

2.2 相关抗原表达与临床分期的关系

在相关研究中已证实临床分期的预后价值［5］。本研究结果表明CD5、FMC7、CD11C、κ轻链、λ轻链表达情况与临床分期之间无明显相关性（P＞0.05）。见表3。

表3 各免疫表型、轻链与临床分期的关系

3 讨论

慢性淋巴细胞白血病的诊断除了结合临床症状、外周血涂片及骨髓象检查外，还要结合免疫表型分析。细胞的免疫表型是在分化增殖的不同阶段表达的不同抗原分子，而流式细胞术通过收集激光照射到细胞后散射光信号和荧光信号反应细胞的特征，是慢性淋巴细胞白血病诊断的重要依据之一。

CLL患者的免疫表型具有一定的特点，即为CD5＋的B细胞，同时伴有CD19、CD20、CD23的表达，不表达CD10，呈κ轻链或λ轻链型［6］。CD5是B细胞的一种重要表面抗原，其在CLL的意义在国内外进行大量的研究，国外报道CLL的CD5＋表达率超过90%［7］，但国内有报道CD5＋表达率为78.6%［8］，本研究中有33例患者（86.8%）为CD5阳性，有5例（13.2%）不表达CD5。

根据Moreau等提出的CLL积分系统，积分＞3分为典型的免疫表型，≤3分为非典型的免疫表型，本组患者中13.2%病例不表达CD5，34.2%病例表达FMC－7，84.2%病例为 CD22强阳性，31例患者积分≤3分。日本Tomomatsu等［9］也报道大部分CLL患者积分≤3分，韩国Jang等［10］报道56%（22／39）CLL患者积分≤3分，均为不典型的免疫表型。因CLL在亚洲国家发病率远远低于西方国家，缺乏大样本临床研究数据，Moreau评分系统是否存在人种差异有待扩大样本量进一步证实。

本研究结果表明CD5、CD11C、FMC7、κ轻链、λ轻链与临床分期无明显相关性，但对CLL的预后预测价值仍需要进一步探讨。吴玉洁［11］等对24例CLL患者的研究中发现CD38与临床分期也无明显相关性。Gentile等［12］发现CD38＋与CD38－的患者相比，男性多于女性，血红蛋白及血小板显著减少，淋巴细胞计数明显增加，且PFS明显缩短，对化疗的反应差，病情进展快；而在年龄、乳酸脱氢酶水平、形态学及免疫学特征方面无明显差异，CD38＋还是疾病侵袭性的一个重要标志，无论患者的临床分期如何，CD38阳性表达均是CLL的独立预后因素［13］，而其他抗原表达所提供的预后预测价值尚需进一步研究探讨。

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