免疫固定电泳结合免疫球蛋白检测在多发性骨髓瘤诊断与分型中的应用评价

翁有红，张楠，王东平，徐雨航，沈越，李洪春

（徐州医科大学医学技术学院，江苏 徐州 221002）

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种浆细胞克隆性恶性增生性疾病，其发病率位居血液系统恶性肿瘤的第二位[1]。M 蛋白是单克隆B 淋巴细胞异常增生的大量结构均一的免疫球蛋白或其片段，在MM 的诊断中具有重要的意义[2]。由于多发性骨髓瘤细胞的增殖不同以及分泌异常免疫球蛋白的种类和数量不一致，使临床表现呈现多样化，据相关资料表明，漏诊率可达50%[3]。 因此，利用实验室常规检测项目血清蛋白电泳结合免疫球蛋白检测对MM 的发现、诊断、分型有着重要意义。 本实验回顾性分析330 例MM 患者血清蛋白电泳、免疫固定电泳、免疫球蛋白及血/尿轻链检测，报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 回顾性分析 2015 年1 月至 2018年7 月于徐医附院就诊的330 例MM 患者，均符合MM 诊断标准[4]，并得到医院伦理委员会的认可。同期选择90 例年龄和性别相匹配的体检人群作为对照。

1.2 仪器和设备 法国Serbia Hydrasys 2 全自动电泳仪和配套试剂，进行血清蛋白电泳和免疫固定电泳检测。 血清免疫球蛋白及轻链定量采用Beckman Coulter IMMAGE 800 特定蛋白分析系统进行检测。 尿轻链定量采用Siemens BNⅡ全自动蛋白分析仪进行检测。 试剂均为仪器的配套试剂。

1.2.1 血清蛋白电泳 按照仪器操作说明书和试剂盒要求进行电泳，并对相应条带进行灰度值扫描。

1.2.2 免疫固定电泳 参照仪器使用说明操作，具体方法简述如下：⑴加样和电泳：将血清加在琼脂糖凝胶板上不同位置，然后电泳；⑵固定：在已分开的蛋白电泳胶片上分别加入相应的单价抗血清，IgG、IgA、IgM 抗血清和抗 κ、λ 轻链抗血清；⑶洗脱：将未结合的蛋白质洗脱掉；⑷染色：氨基黑染料着色。

1.2.3 血清免疫球蛋白、 轻链以及尿轻链定量 采用免疫散射比浊法，检测时室内质量控制均在控。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS19.0 统计学软件进行数据分析，用 χ2检验计数资料，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基本资料 330 例多发性骨髓瘤 （MM）患者中，男 197 例，女 133 例，60 岁及以上 224 例，60岁以下106 例。 MM 在男女之间无明显差异，但在年龄之间（大于等于60 岁和小于60 岁）差异有统计学意义 （P＜0.001）， 好发于60 岁以上的中老年人，见表1、图1。

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2.2 330 例 MM 患者血清蛋白电泳分析 330 例MM 患者中 M 蛋白检出 226 例，条带 2、3、4、6、10、11、14，阳性率达 68.48%（226/330）。 见表2、图2。

图1 健康人与MM 患者年龄比较散点图

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图2 血清蛋白电泳分析显示M 蛋白

2.3 M 蛋白阳性的患者血清免疫固定电泳分析226 例M 蛋白阳性患者中224 位做了免疫固定电泳。 IgG 型 133 例（133/224，59.38%），IgA 型 57 例（57/224，25.45%），轻链型 32 例（32/224，14.29%），并出现1 例非分泌型和1 例双克隆型 （IgG+IgA），本研究中未统计到IgM 阳性的MM 患者， 见表3、图3。

2.4 免疫固定电泳结合免疫球蛋白检测在MM 患者中的联合分析

2.4.1 M 蛋白阳性患者血清免球蛋白及血/尿轻链分析 226 例M 蛋白阳性的 MM 患者中，有 141 例同时进行了血清蛋白电泳、固定电泳、免疫球蛋白和血/尿轻链检测。超过参考区间即为升高，并录入表格。 在50 例免疫固定电泳显示IgG+κ 阳性的MM 患 者中， 只 有 42 例 IgG 升高， 符 合率为84.00%， 但有 49 例血清轻链 κ 升高， 符合率为98.00%；在 45 例 IgG+λ 阳性的 MM 患者中，有 40例显示IgG 升高，符合率为88.89%，有45 例血清轻链 λ 升高，符合率为 100.00%；在 17 例 IgA+κ 阳性的 MM 患者中，有 15 例 IgA 升高，符合率为 88.24%，有 17 例血清轻链 κ 升高，符合率为 100.00%，但在19 例免疫固定电泳显示IgA+λ 阳性的 MM 患者中，有19 例免疫球蛋白IgA 升高，符合率为100.0 0%，而只有17 例血清轻链λ 升高，符合率为89.47%，其中有一例虽然在血清中未显示λ 轻链升高，但在尿液中表现为λ 轻链升高。 由此显示，免疫球蛋白和血/尿轻链定量检测， 及免疫固定电泳检测的结果吻合率较高。 见表4。

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图3 免疫固定电泳图谱分型

注： 参考范围： 血清免疫球蛋白 IgG 男性 8.00～17.00 g/L， 女性7.00～16.00 g/L；IgA 男性 1.00～4.90 g/L，女性 0.85～3.20 g/L。 血清 κ链 5.740～12.800 g/L，血清 λ 链 2.690～6.380 g/L。 尿液 κ 链 10.20～23.20 g/L，尿液 λ 链 4.00～40.80 g/L

2.4.2 104 例M 蛋白阴性患者血清免疫球蛋白和血/尿轻链特征 104 例 M 蛋白阴性 MM 患者，大多是血或/和尿轻链增高（75/104），5 例血清 IgG 增高的MM 患者， 只表现为1 例免疫固定电泳IgG阳性，而 3 例 IgG 阳性中，有 2 例血清 IgG 没有明显增高；15 例IgA 阳性中11 例表现为血清IgA 增高。在仅有血或/和轻链增高的MM 患者中，也同样表现为 2 例 IgG 和 4 例 IgA 阳性。 见表5。

3 讨论

MM 是一种骨髓内单克隆浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，占血液系统恶性肿瘤的10%[5]。 其起病缓慢，临床上主要表现为贫血、骨痛、肾功能不全、感染、出血、神经症状、高钙血症、淀粉样变性等[6]，临床上易造成漏诊。 因此，MM 的早期诊断及分型对愈后和疗效尤为重要。

从本研究的统计数据可以看出，多发性骨髓瘤中，M 蛋白的检出率占有较高的比例，达到64.48%（226/330），且以 IgG 型为主，其次是 IgA 型，与国内陈云峰等报道[7]较为一致。而IgG 型 κ 和 λ 所占比例没多大差别（32.14%，27.23%），IgA 型 κ 和 λ也基本相等（12.50%，12.95%），这与国内刘汐盈的报道[8]也较为一致。 本研究同时显示：轻链型占到一定的比例，达 14.28%（κ：4.46%，λ：9.82%），因为轻链型MM 的瘤细胞仅合成单克隆型轻链，不合成相应重链，其特点包括肾损害突出，预后较差等。在MM 患者中，肿瘤浆细胞过量会产生一种单克隆免疫球蛋白轻链，同时抑制另一种轻链的生成，κ/λ比率严重失调，表现为轻链型MM。 另外，分析显示：330 例MM 患者中，双克隆型1 例，非分泌型1例。 本次实验未统计到IgM 型，这可能与临床上该型患者较少，样本量不足有关。

表5 M 蛋白阴性MM 患者血清免疫球蛋白和血/尿轻链分变化

针对141 例M 蛋白阳性同时进行免疫固定电泳、 免疫球蛋白以及血/尿轻链定量检测的MM 患者，IgG 型MM 免疫球蛋白检出率为 86.32%（82/95），血轻链检出率为 98.95%（94/95），尿轻链检出率为 77.89%（74/95）；IgA 型 MM 免疫球蛋白检出率为94.44%（34/36），血轻链检出率为94.44%（34/36），尿轻链检出率为 80.56%（29/36）；轻链型 MM血轻链检出率为60.00%（6/10）， 尿轻链检出率为80.00%（8/10）。这说明免疫球蛋白定量检测存在一定漏诊率， 血/尿轻链的定量检测对轻链型MM 检出率较低，分析原因可能是轻链型MM 样本较少导致;同时有1 例患者免疫球蛋白检测显示IgG 升高，但免疫固定电泳未检测出，说明免疫固定电泳也存在一定漏诊率，分析原因可能是样本纯度不足或样本量不足导致条带没有呈阳性，使定性存在一定的误差；有一例IgA+λ 型MM 患者在血清中未显示λ轻链升高，但在尿液中表现为λ 轻链升高，可能由于时间的推移，血清轻链经过肾小球滤过作用，从尿中排出。尿轻链中会出现κ、λ 同时增高的情况，可能由于MM 患者蛋白质代谢紊乱，导致轻链从尿中排出。

而104 例M 蛋白阴性患者中72.12%（75/104）表现为血或/和尿轻链增高，5 例血清IgG 增高的MM 患者，只有1 例免疫固定电泳IgG 阳性，说明免疫固定电泳存在一定的漏诊率。 而3 例免疫固定电泳IgG 阳性的患者中，有2 例血清IgG 没有明显增高；15 例IgA 阳性中仅有11 例表现为血清I-gA 增高；在88 例免疫球蛋白定量检测未显示增高的患者中，有 2 例IgG 和4 例IgA 阳性，说明免疫固定电泳对免疫球蛋白定量检测起到了一定的补充作用。 在我们实验室仅检测 IgG、IgA、IgM 型MM， 而临床上也存在一定量的IgD 和IgE 型MM患者， 可能会造成免疫球蛋白定量检测检出率降低。

文献表明，免疫固定电泳在MM 的诊断和鉴别诊断上具有重要意义[9，10]。 针对 MM 患者的该研究结果显示，虽然免疫固定电泳的检出率比血清及尿液轻链的检出率高，但仍有一定的漏诊率，而免疫固定电泳联合免疫球蛋白定量检测可大大提高检出率。 据了解，血清轻链和尿液轻链的检测对MM的诊断意义已得到了国内外的肯定[11，12]，因此，免疫固定电泳联合免疫球蛋白、 血/尿轻链定量检测可提高MM 的检出率，并辅助判断MM 的分型。

综上所述，免疫固定电泳配合免疫球蛋白定量检测可以降低MM 漏诊率，对其进行分型，统计不同地区的分型可为临床工作者的诊断和预后判断提供重要依据， 并可按照分型制定个体化治疗方案。