液相色谱-示差折光法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的改进研究

汪良清，胡桂标

（东莞市养生源蜂业有限公司，广东 东莞 523216）

蜂蜜是一种天然食品，味道甜蜜，所含的单糖不需要经消化就可以被人体吸收，对妇、幼特别是老人更具有良好保健作用。目前我国蜂蜜消费需求远超蜂蜜产量，不法商贩为了牟取更大暴利，往往在蜂蜜中添加淀粉类、代糖类等物质，严重的损害了广大消费者的利益。目前，食品安全国家标准蜂蜜GB 14963-2011[1]以及中华人民共和国供销合作行业标准蜂蜜GH/T 18796-2012[2]中仍然采用GB/T 18932.22 液相色谱示差折光检测法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量[3]。但按照此方法检测，在样品前处理的时候操作比较繁琐且容易发生分层现象，对检测结果的准确性有一定的影响，同时修正了蔗糖、麦芽糖标准工作溶液浓度。另外，短波近红外光谱法[4]、毛细管电泳电化学检测法[5]、离子色谱脉冲安培法[6]、液相色谱蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）[7]等方法测定食品中的糖也略有报道。本实验在国家标准以及行业标准的基础上，分析蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

乙腈：色谱纯；水：重蒸馏水；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准物质：纯度≥99%西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司提供；RID-10A示差折光检测器：岛津公司生产；柱温箱：精度±0.1℃；电子天平：感量0.0001g；过滤膜：0.45μm。

1.2 色谱分析条件

色谱柱：碳水化合物分析柱（5μm，4.0mm×300mm）；流动相：乙腈+水（75+25）；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；示差折光检测器池温度：35℃；进样量：15μL。

1.3 配制标准工作溶液

1.3.1 果糖、葡萄糖标准储备溶液

准确称取5g果糖标准物质，4g葡萄糖标准物质，精确至0.0001g，放入同一个100mL容量瓶中，加入60mL水溶解，再用乙腈定容，摇匀备用。

1.3.2 蔗糖、麦芽糖标准储备溶液

准确称取2g蔗糖标准物质，2g麦芽糖标准物质，精确至0.0001g，放入同一个100mL容量瓶中，加入60mL水溶解，再用乙腈定容，摇匀备用。

1.3.3 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准工作溶液

标准储备溶液的用量，用乙腈+水（40+60）稀释定容体积，见表1。

2 测定方法

2.1 测定原理

试样用乙腈+水（40+60）溶解并定容，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤，经示差折光检测器测定，外标法定量。

表1 标准工作溶液的配制Table 1 Preparation of standard working solution

2.2 试样的制备

称取5g样品，精确至0.001g。置于100mL烧杯中，用乙腈+水（40+60）溶解均匀并定容至100mL容量瓶，摇匀后，用0.45μm滤膜过滤进入液相色谱测定。

3 分析

国标法：用一定量水溶解样品，再用乙腈定容，经常出现分层现象。特别是含水量越低的样品，分层现象越明显。见表2。

表2 不同蜂蜜含水量与分层程度比较Table 2 Hierarchical levels and water content comparison in different honey

改进法：现流动相为乙腈+水（75+25）测定结果跟国家标准方法的测定样品结果接近，见表3。

现用乙腈+水（40+60）直接溶解样品并摇匀，能有效地解决分层现象，见表4。

表3 不同流动相的对比结果Table 3 Comparison results of different mobile phases

表4 采用乙腈+水（40∶60）溶解样品对比结果Table 4 Comparison results of dissolve the sample by acetonitrile and water (40∶60)

4 精密度及回收率

4.1 精密度

从1.3.1、1.3.2标准储备溶液取果糖（C=5.0g/100mL）、葡萄糖（C=4.0g/100mL）、蔗糖（C=2.0g/100mL）、麦芽糖（C=2.0g/100mL）溶液测定6次，在此浓度下测定结果的相对标准偏差均小于1%，即本方法的重现性良好，试验结果见表5。

4.2 回收率

通过表3蜂蜜加标物实验来验证该方案的可行性，在加标浓度分别为0.4g/100mL，0.8g/100mL，1.5g/100mL时，均获得了较理想的回收率，试验结果见表6～表9。

5 结果讨论

跟GB/T 18932.22对比结果，原国家标准中第5点中蔗糖、麦芽糖标准工作溶液浓度各为0.60g/100mL，现修正为0.56g/100mL。保证结果的准确性；

降低乙腈的使用量，流动相：乙腈+水（75+25），测定结果跟国家标准方法的结果一致。这样可以降低企业成本，减少环境的污染；

表5 测定结果精密度Table 5 Precision of measurement results

表6 蜂蜜中果糖加标物实测结果Table 6 Measured results of spiked fructose in honey

表7 蜂蜜中葡萄糖加标物实测结果Table 7 Measured results of spiked glucose in honey

表8 蜂蜜中蔗糖加标物实测结果Table 8 Measured results of spiked sucrose in honey

表9 蜂蜜中麦芽糖加标物实测结果Table 9 Measured results of spiked maltose in honey

用乙腈+水（40+60）直接溶解样品，并用其定容至体积。此操作方法有效地解决分层现象；

本方法操作简单快速，重复性好，灵敏度高，准确性好，回收率高。

[1]GB14963-2011 蜂蜜[S].

[2]GH/T 18796-2012 蜂蜜[S].

[3]GB/T 18932.22-2003 蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法[S].

[4]饶震红，李民赞，吉海彦.短波近红外光谱法同时定量分析水溶液中葡萄糖、果糖和蔗糖[J].光谱学与光谱分析，2006，26（4）：633-635.

[5]单瑞峰.毛细管电泳电化学检测法测定南瓜中糖类物质[J].山东化工，2006，35（2）：33-35.

[6]崔 鹤，李戈登.离子色谱脉冲安培法测定蜂蜜中的葡萄糖、果糖、蔗糖[J].化学分析计量，2001（1）：25-26.

[7]YOUNG C S.用HPLC 和蒸发光散射检测对糖类分析的方法学[J].国外分析仪器，2002（2）：26-29.