西归中阿魏酸和佛手柑内酯提取工艺研究

孙帮燕，张海珠，钱丽萍，周萍

（大理学院药学与化学学院，云南大理671000）

西归中阿魏酸和佛手柑内酯提取工艺研究

孙帮燕，张海珠，钱丽萍，周萍*

（大理学院药学与化学学院，云南大理671000）

目的：优选西归中阿魏酸和佛手柑内酯的提取工艺。方法：采用超声提取，分别通过单因素试验和L9（34）正交试验，研究了提取次数、提取时间、提取温度和固液比四个因素对阿魏酸和佛手柑内酯含量的影响。结果：最佳提取工艺为A3B2C1D2，即提取次数为3次，提取时间为50 min，提取温度为55℃，固液比为1∶5。结论：该工艺简便、可靠，可为西归的进一步开发利用提供参考。［关键词］西归；阿魏酸；佛手柑内酯；提取工艺

西归（Seselopsis）是伞形科植物西藏凹乳芹（Vicatia thibertica de Boiss）的干燥根〔1〕，国内主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地，云南省大理市鹤庆县有悠久的栽培历史，民间常作为滋补蔬菜炖肉、炖鸡等食用。西归中含有阿魏酸、佛手柑内酯等八种生物活性成分〔2〕。阿魏酸具有抗血栓、抗炎镇痛、抗氧化、抗自由基等作用，其含量常作为评价一些中药材及中药制剂质量的指标〔3-4〕；佛手柑内酯主要用于杀灭钉螺，有一定抗凝血作用，能止血、降压和抗微生物活性〔5〕。目前有关西归提取工艺研究有总黄酮、多糖、总氨基酸的报道〔6-9〕，本文考察了西归中阿魏酸和佛手柑内酯两种成分的提取工艺（HPLC法测定西归中阿魏酸和佛手柑内酯的研究内容本课题组已另文报道），为后续的研究及充分利用西归资源提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；AE240电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；SK5200H超声波清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；RE-3000旋转蒸发仪器（上海亚荣生化仪器厂）；DFY-200摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。

1.2 试药阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-201012，纯度>99.6%）；佛手柑内酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：201104，纯度>98%）；甲醇（色谱纯），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。西归购自云南省大理州鹤庆县，经大理学院生药学教研室周浓副教授鉴定为西藏凹乳芹（Vicatia thibertica de Boiss）的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：PhenomeneX Gemini-NX C18110A柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯度洗脱程序：65%~65%B（0~3 min），65%~60%B（3~10 min）；60%~55%B（10~15 min），55%~45%B（15~20 min）；流速：1 mL/min；检测波长322 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2.2 样品溶液的制备精密称取西归样品2.0 g，置50mL烧瓶中，加入10 mL乙酸乙酯，常温下超声30 min，提取1次，过滤，滤液转移至圆底烧瓶中，蒸干溶剂，残渣用适量甲醇溶解，转移至5 mL量瓶，定容至刻度，即得样品溶液，0.45 μm微孔滤膜滤过，按“2.1”项下色谱条件操作，外标法计算样品溶液中阿魏酸和佛手柑内酯的含量。

2.3 提取工艺考察

2.3.1 单因素考察

2.3.1.1 提取次数对含量的影响精密称取西归2.0 g，加乙酸乙酯10 mL，提取温度30℃，超声30 min，分别提取1、2、3、4次，按“2.1”项下色谱条件操作，测定阿魏酸和佛手柑内酯的含量，见图1。

图1 提取次数对含量的影响

由图1可以得知，西归中阿魏酸和佛手柑内酯两者提取2次时含量最高，因此，两者的最佳提取次数为2次。

2.3.1.2 提取温度对含量的影响精密称取西归2.0 g，加乙酸乙酯10 mL，超声30 min，提取2次，分别在50、60、70、80℃下提取，按“2.1”项下色谱条件操作，测定阿魏酸和佛手柑内酯的含量，见图2。

图2 提取温度对含量的影响

由图2可以得知，在50~80℃之间，温度越高，阿魏酸的含量越大，70℃与80℃相比，含量无显著增加；而佛手柑内酯的含量在70℃之后却下降。因此，两者的最佳提取温度为70℃。

2.3.1.3 提取时间对含量的影响精密称取西归2.0 g，加乙酸乙酯10 mL，提取温度70℃，提取2次，分别超声30、40、50、60 min，按“2.1”项下色谱条件操作，测定阿魏酸和佛手柑内酯的含量，见图3。

图3 提取时间对含量的影响

由图3可以得知，两者的含量均随着提取时间的延长而增大，因此，最佳提取时间为60 min。

2.3.1.4 固液比对含量的影响精密称取西归2.0 g，提取温度70℃，超声30 min，提取2次，固液比分别为1∶5、1∶6、1∶7、1∶8，按“2.1”项下色谱条件操作，测定阿魏酸和佛手柑内酯的含量，见图4。

由图4可以得知，随着固液比的增大，两者的含量减小，可能是因为在1∶5时，固液比已经达到饱和，继续加大溶剂的量反而稀释了溶液。因此，最佳固液比为1∶5。

图4 固液比对含量的影响

由以上结果可以得知，提取时间、提取温度、提取次数、固液比均影响阿魏酸和佛手柑内酯的含量，单因素试验得出的最佳提取条件为：提取时间为60 min，提取温度为70℃，提取次数为2次，固液比为1∶5。

2.3.2 正交试验为进一步优化两种成分的提取工艺，根据单因素试验结果选取了4个因素：提取次数（A）、提取时间（B）、提取温度（C）、固液比（D），采用L9（34）正交表进行了正交试验，见表1、2。

表1 试验因素水平

表2 正交试验结果

由表2可以得知：对阿魏酸含量产生影响的各因素为B（提取时间）>D（固液比）>A（提取次数）>C（提取温度），最佳提取工艺是A3B2C1D2。对佛手柑内酯含量产生影响的各因素主次为D（固液比）>B（提取时间）>A（提取次数）>C（提取温度），最佳提取工艺是A1B2C3D2，因佛手柑内酯在A1、A3，C1、C3两条件下的提取效果差异不大，考虑两种成分的提取效率，选择A3B2C1D2作为两者的最佳提取工艺，即提取次数为3次，提取时间为50 min，提取温度为55℃，固液比为1∶5。

2.3.3 验证试验在上述正交试验的最佳条件下平行3次试验，得到的结果是：阿魏酸的含量分别为0.156 9 mg/g、0.160 2 mg/g、0.158 8 mg/g，RSD为1.04%；佛手柑内酯的含量分别为0.089 8 mg/g、0.090 1 mg/g、0.088 3 mg/g，RSD为1.08%，说明该提取工艺合理、可靠。

3 讨论

有文献〔10〕报道，用一定体积分数的甲醇及乙醇提取西归中阿魏酸具有很好的效果，本实验通过用甲醇、乙醇和乙酸乙酯在相同条件下进行提取，结果表明，用乙酸乙酯提取阿魏酸和佛手柑内酯的效果最好。

实验比较了超声和回流提取两种方法，加热回流提取方法对所测成分的提取效率高，因两种提取方法测得含量差别不大，故选择简单、易操作且节约试剂的超声提取法。优化得到的西归中阿魏酸和佛手柑内酯提取工艺可以为西归资源的进一步开发利用和研究提供参考。

〔1〕周浓，段意梅，陈强，等.白族药西归的生药学鉴定〔J〕.安徽农业科学，2007，35（8）：2307，2425.

〔2〕张维明，段志红，孙凤，等.西归的化学成分研究〔J〕.天然产物研究与开发，2004，16（3）：218-219.

〔3〕金汝城，李贵文，马素丽，等.当归中阿魏酸提取工艺的优化研究〔J〕.中成药，2008，30（4）：516-519.

〔4〕金月，李江.RP-HPLC法测定川芎药材中阿魏酸的含量〔J〕.西北药学杂志，2010，25（2）：85-87.

〔5〕刘庆，王成军.西归应用研究进展〔J〕.中国药业，2008，17（8）：62.

〔6〕周萍，王成军，张海珠.西归总黄酮提取及含量测定〔J〕.安徽农业科学，2010，38（4）：2053-2054.

〔7〕许嘉强，孙进，李艳，等.西归多糖的提取及含量测定研究〔J〕.大理学院学报，2009，8（10）：15-17.

〔8〕周萍，王成军，张海珠.西归中多糖的提取及含量测定〔J〕.时珍国医国药，2010，21（9）：2210-2211.

〔9〕梁英丽，李艳，高孟婷，等.西归中总氨基酸含量测定方法研究〔J〕.大理学院学报，2009，8（10）：7-9.

〔10〕肖培云，杨永寿，刘光明.白族药西归中阿魏酸的含量测定〔J〕.云南中医中药杂志，2007，28（12）：29-30.

（责任编辑 李杨）

Study on Extraction Process of Ferulic Acid and Bergapten from Seselopsis

SUN Bangyan,ZHANG Haizhu,QIAN Liping,ZHOU Ping*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To explore the extraction process of ferulic acid and bergapten from seselopsis.Methods:Ferulic acid and bergapten were extracted by supersonic wave method.Under optimized by single element and L9（34）orthogonal experiment,we investigated the relationships of extract content with the number of extraction times,extraction time,ratio of raw material to liquid and temperature.Results:The optimal extraction process was A3B2C1D2,refluxing and extracting for 3 times at 55℃,50 minute per time, ratio of raw material to liquid at 1∶5.Conclusion:The optimal extraction process is simple and reliable,and it serves as reference for further development and utilization of seselopsis.

seselopsis;ferulic acid;bergapten;extraction process

R284.2

A

1672-2345（2013）06-0017-03

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.06.005

大理学院大学生科研基金资助项目（KYSX2011069）

2013-01-31

孙帮燕，药学专业2009级本科生. *通信作者：周萍，教授.