HPLC法测定都梁丸中阿魏酸的含量

张艳秋+王静+袁子民+张振秋

【摘 要】目的：建立HPLC法测定都梁丸中阿魏酸的含量。方法：采用Diamonsil C18色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸（65∶35）为流动相，柱温35 ℃，测定波长321nm。结果：阿魏酸进样量在0.0144～0.288μg范围内线性关系良好，r=0.9997，平均加样回收率为98.3%，RSD为1.02%。结论：该法准确、快速、重复性好，可用于都梁丸中阿魏酸的含量测定。

【关键词】都梁丸；阿魏酸；高效液相色谱法

【中图分类号】R286.0 【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2016）15-0015-02

Abstract：Objective To establish HPLC for determining the content of ferullic acid in Duliang Pills.Method An HPLC method was developed.The chromatographic conditions were as follow： Diamonsil C18 column and methanol-0.1% phosphoric acid （65∶35） as mobile phase， The column temperature was 25℃，detection wavelength at 321nm.Result The recovery range of ferullic acid was 0.0144～0.288μg， r=0.9997.The average recovery rate was 98.3% and RSD was 1.02%.Conclusion The method is simple and accurate，with good repeatability，and can be used for determination of ferullic acid in Duliang Pills.

Keywords：Duliang Pills； Ferullic acid； HPLC

都梁丸（大蜜丸）由白芷（酒炖）、川芎两味药组成，具有祛风散寒，活血通络的功效，临床主要用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛，症见头胀痛或刺痛、痛有定处、反复发作、遇风寒诱发或加重。该制剂的质量标准收载于《中国药典》2015版一部（HPLC法）[1]。目前，药典都梁丸质量标准含量测项下及文献报道[2]的都梁丸质量标准研究中均只测定了白芷中欧前胡素的含量，缺少对川芎中阿魏酸的质量控制。本研究采用高效液相色谱法（HPLC法），测定都梁丸中阿魏酸含量，为都梁丸质量标准的提高提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。

1.2 材料 阿魏酸对照品（批号：0738-200108中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水；都梁丸（大蜜丸，市售）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（65∶35）；柱温：35℃，检测波长：321nm，流速：1.0mL/min。

2.2 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含0.0144mg的对照品溶液备用。

2.3 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取约3g，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，以70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜后置棕色量瓶中，即得。

2.4 专属性试验 按处方量取白芷细粉，按都梁丸制法制备阴性样品，再按“2.3”供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，分别精密吸取供试品溶液、阴性对照液及对照品溶液各10μL，按“2.1”色谱条件依法测定，结果阴性对照溶液在阿魏酸相同保留时间处无色谱峰干扰，HPLC色谱图见图1。

2.5 标准曲线制备 分别精密吸取“2.2”项下的对照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，按“2.1”项下的色谱条件依法测定，记录各色谱峰峰面积，以阿魏酸色谱峰的峰面积为纵坐标，阿魏酸对照品的进样量为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=4710X–0.284，r=0.9997。表明进样量在0.0144～0.288μg范围内线性关系良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号20150910），分别在0、2、4、6、8、10 h进样测定，记录色谱峰面积，结果供试品溶液在10 h内稳定，RSD为1.93%。

2.7 重复性试验 取同一批次供试样品（批号20150910），按“2.3”供试品溶液制备方法，同法制备6份供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液10 μL依法测定，记录各色谱峰峰面积，并按外标一点法计算含量。结果平均含量为0.177mg/g，RSD为1.73%。

2.8 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液（批号20150910）10μL，分别连续进样6次，记录色谱图及各色谱峰峰面积，结果表明该法精密度良好，RSD为1.86%。

2.9 回收率试验 取已知含量重量差异项下的本品（0.177mg/g，批号20150910），剪碎，混匀，取约3g，共取6份，分别精密称定，各精密加入等量的硅藻土，研匀，取约1g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入阿魏酸对照品溶液（0.085mg/mL）1.0mL，再分别精密加入70%甲醇24mL，其余按“2.3”供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并依法测定，结果见表1，表明回收率符合相关规定。

2.10 含量测定 取20150910、20150915、20150923批样品，分别按“2.3”供试品溶液的制备方法制备，按“2.1”色谱条件依法测定，按外标一点法计算含量，结果阿魏酸的含量分别为0.177mg/g、0.168mg/g、0.186mg/g（n=3）。

3 讨论

3.1 本品川芎采用原粉入药，实验中参考药典川芎中阿魏酸的含量测定方法[3]，对供试品溶液的制备方法中所用溶剂（甲醇、70%甲醇）、提取时间（20min、30min、40min）、提取方法（回流、超声）进行了考察，结果回流法优于超声法，提取30min基本提取完全[4]。本品由于含有大量蜂蜜，实验中加入了硅藻土，主要目的为降低黏性，易于溶剂浸润、渗透提取。

3.2 文献对都梁滴丸（白芷、川芎提取后入药）采用HPLC同时测定了阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素的含量[5]，后续研究中对于都梁丸也可以尝试同时测定阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素等多种成分，以进一步提高本品质量标准。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：1325.

[2]曹红，邢俊波，陈玉敏，等.都梁丸质量标准的研究[J].解放军药学学报 2012，28（5）：417-419.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：41.

[4]RP-HPLC法测定天麻头痛片中阿魏酸含量[J].中国医药导刊，2011，13（2）：330-331.

[5]席海为，马强，李强，等.HPLC法同时测定都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（16）：81-85.

（编辑：熊金富）