正交试验法筛选白虎定喘口服液提取工艺研究

2016-12-17赵增成黄中利林树乾

山东农业科学 2016年11期

赵增成+黄中利+林树乾

摘要：为了优化白虎定喘口服液的煎煮工艺，以干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量为评价指标，以中药浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为影响因素，采用正交试验对其提取工艺进行多指标综合筛选。结果显示，煎煮次数对3个指标有显著影响，其他因素影响均不显著；优化的工艺条件为加15倍量水、浸泡0.5 h、每次煎煮0.5 h、煎煮3次。优选出的提取工艺稳定可行，有效成分提取率高，能保证制剂质量。

关键词：正交试验；提取工艺；干膏；绿原酸；黄芩苷

中图分类号：S853.7 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2016）11-0140-04

Abstract In order to optimize the decoction process of Baihu Dingchuan oral liquid， the extraction process were comprehensively screened by orthogonal test with dry paste volume， contents of chlorogenic acid and baicalin as the evaluation indexes and herbal medicine immersion time， amount of water， decocting time and decocting times as the influence factors. The results showed that decocting times had significant effects on the 3 indicators， and the influences of other factors were not significant. The optimized conditions were adding 15-fold of water， soaking for 0.5 hour， decocting for 3 times and 0.5 hour each time. The optimized extraction process was stable and feasible with high active ingredient extraction rate， and it could guarantee the quality of preparation.

Keywords Orthogonal test； Extraction process； Dry paste； Chlorogenic acid； Baicalin

白虎定喘口服液是由山东省农业科学院家禽研究所研制的新兽药，主要由石膏、金银花、黄芩、知母等组成，功效为清泻肺热、化痰平喘，主治鸡传染性支气管炎等外感邪热入肺所致的发热、痰多、咳喘之症。中药的煎煮工艺对制剂的质量和疗效具有重要影响[1，2]，为了确保制剂质量，更好地发挥临床疗效，采用正交试验法对其提取工艺进行了筛选研究，选定加水量、中药浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数4个因素，对产品中干膏量、绿原酸含量和黄芩苷含量进行综合评价，确定白虎定喘口服液的最佳提取工艺参数。

1 材料与方法

1.1 仪器

岛津高效液相色谱仪、AB265-S型双量程十万分之一电子天平、KQ5200DB型超声仪。

1.2 药品与试剂

绿原酸对照品（批号110753-201314）、黄芩苷对照品（批号110715-201318），购于中国食品药品检定研究院。白虎定喘口服液由山东昊泰科技药业有限公司试制。乙腈为色谱纯试剂，甲醇、磷酸均为分析纯试剂。

1.3 试验设计

选取加水量（A）、中药浸泡时间（B）、煎煮时间（C）、煎煮次数（D）4个因素，进行4因素3水平筛选试验（表1）。选用正交表L9（34）进行正交试验设计（表2）。

1.4 测定方法

按处方称取相同的中药饮片，按照以上试验方案要求进行煎煮提取，提取液最后均浓缩至1 g/mL。

取中药浓缩液50 mL，置水浴上蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速称定干膏重量。

取中药浓缩液，以绿原酸、黄芩苷做为指标成分，进行含量测定。具体测定方法按《白虎定喘口服液质量标准草案》进行。

1.5 黄芩苷含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）为流动相；检测波长为280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：精密量取本品2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，超声20 min，混匀，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。

1.6 绿原酸含量测定

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）为流动相；检测波长为327 nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1 000。

对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

供试品溶液的制备：精密量取本品2 mL，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，超声20 min，摇匀，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。

1.7 统计方法

以干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量作为评价指标，采用极差法进行最佳因素排序，并得出最优组合。采用方差分析，得出各因素对各指标的显著影响程度，确定最佳工艺条件。

1.8 工艺验证

按照确定的最佳工艺条件，进行中药提取，测定干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量，进行工艺验证。

2 结果与分析

2.1 正交试验结果

正交试验的直观分析结果见表3，方差分析结果见表4。

根据极差（R）大小排序，影响制剂中干膏量的因素为D>A>B>C，即煎煮次数>加水量>浸泡时间>煎煮时间，最优条件为A3B1C2D3；影响制剂中绿原酸含量的因素为D>C>B>A，即煎煮次数>煎煮时间>浸泡时间>加水量，最佳条件为A3B1C2D3；影响制剂中黄芩苷含量的因素为D>C>A>B，即煎煮次数>煎煮时间>加水量>浸泡时间，最佳条件为A3B3C2D3。

方差分析结果表明，D因素（煎煮次数）对干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量均影响显著（P<0.05），A因素（加水量）、B因素（浸泡时间）、C因素（煎煮时间）对干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量三项指标影响均不显著（P>0.05）。

综合分析以上结论，本试验设计的4个因素中，只有煎煮次数对3个指标有显著影响，其他因素影响均不显著，考虑实际生产中时间和能源的节省，将提取条件确定为A3B1C1D3，即加15倍量水、浸泡0.5 h、煎煮0.5 h、煎煮3次。

2.2 工艺验证结果

按以上确定的A3B1C1D3工艺条件进行验证试验，结果干膏量为16.1632 g，绿原酸含量为1.1740 mg/mL，黄芩苷含量为12.4725 mg/mL，3项指标均达到满意要求。

3 讨论与结论

中兽药制备工艺是新兽药研究中的一项重要研究内容，目的就是对提取工艺条件进行科学筛选，使制备工艺做到科学、合理、先进、可行，使研制的新药达到安全、有效、可控和稳定[3，4]。煎煮为中药传统提取方法，工艺简单，往往对其重视不够。如果仅按照传统煎煮经验进行，工艺研究不充分，工艺参数不明确，随意性大，对产品的质量稳定性将造成很大影响[5，6]。加强对中药新药工艺过程的控制，可以提高对中药的质量控制水平，保证在稳定的工艺条件下生产出符合标准、质量稳定的产品。正交设计以其“均匀分散、整齐可比、计算简便”的突出优点而应用于中药制剂的提取工艺等研究中[7-9]。中药水提工艺一般涉及加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数4个最重要的因素[10]。本研究采用正交试验法，对以上4个因素进行了考察筛选，综合各指标和经济效益确定出最佳提取工艺参数为：总加水量为15倍生药量，浸泡时间为0.5 h，共煎煮3次，每次煮沸0.5 h。

本品处方中，黄芩苦寒，归肺、胃、大肠、胆四经，具清热燥湿、泻火解毒之功，尤长于清肺热。金银花味甘性寒，入肺胃心脾四经，清热解毒、凉散风热，清热之中有轻微宣散之功，可助黄芩宣散肺热。黄芩的主要活性成分为黄芩苷[11，12]，金银花的主要活性成分为绿原酸[13，14]，二者均是重要的生物活性物质，因此将黄芩苷、绿原酸确定为考核指标。验证试验结果表明，优化的工艺条件可满足本品中干膏量、绿原酸含量、黄芩苷含量的质量要求。

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