布渣叶水煎液对非酒精性脂肪肝大鼠血脂及炎症反应影响研究

胡向阳，李 安，林春淑，杨 璇

（中山大学附属第五医院中西医结合科，广东 珠海 519000）

布渣叶水煎液对非酒精性脂肪肝大鼠血脂及炎症反应影响研究

胡向阳，李 安，林春淑，杨 璇

（中山大学附属第五医院中西医结合科，广东 珠海 519000）

目的：观察布渣叶水煎液对非酒精性脂肪肝大鼠血脂、炎症反应的影响。方法：采用高脂饮食法制备大鼠模型，将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、非诺贝特组、布渣叶水煎液组，分别灌服生理盐水、非诺贝特溶液、布渣叶水煎液。结果：布渣叶水煎液可降低非酒精性脂肪肝大鼠血清和肝组织TC、TG及肝指数，降低肝组织TNF-α、MCP-1和NF-κB等炎症因子的表达。结论：布渣叶水煎液对非酒精性脂肪肝大鼠血脂、炎症反应具有改善作用。

布渣叶；大鼠；非酒精性脂肪肝；血脂；炎症反应

非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是指无过量饮酒史，以肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和脂肪性肝硬化4个病理过程［1］。NAFLD通常被认为是良性病变，但是研究显示其是许多慢性肝脏疾病的早期阶段，17%的NAFLD在5～ 10年内发展为非酒精性脂肪性肝炎，10 ～ 15年内肝硬化的发生率为15%～25%，NAFLD已被公认为是隐匿性肝硬化的常见病因［2］。目前，对于NAFLD的治疗多处于探索阶段，尚无特效药物，寻求防治NAFLD的有效药物是当前研究的特点。中医认为，NAFLD的发病多因嗜食肥甘厚味，体丰痰盛，或情志失调，或起居失常，脾失健运，肝失疏泄，致使痰浊瘀毒郁结于肝脏。布渣叶，又名破布叶、山茶叶、烂布渣等，为椴树科破布叶属植物破布叶（Microcos paniculata Linn）的干燥叶，主要分布于我国广东、广西、海南等地。本品味甘、淡，性微寒，无毒，民间常采布渣叶晒干泡水当茶饮，其是“广东凉茶”、“十味溪黄草颗粒”、“王老吉”等的主要组成药物之一，有清热消滞、利湿退黄之功效，用于治疗感冒，湿热食滞，湿热黄疸等疾病［3］。药理研究表明，布渣叶中可能含有黄酮类、生物碱、有机酸、氨基酸、蒽醌等成分，具有解热、退黄及促消化等作用［4，5］。笔者观察了布渣叶水煎液对NAFLD大鼠炎症反应的影响，报道如下。

1 材料与方法

实验动物：Wistar大鼠，SPF级，雄性，体质量（140±20）g，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号粤检证字2011C539，室温适应性饲养1周后用于本实验。

实验药物：非诺贝特胶囊（力平之），法国利博福尼制药公司（Laboratoires Fournier S.A.）生产，注册证号H20100602，1粒200mg，产品批次18246，临用前以生理盐水溶解浓度为40mg/mL。布渣叶饮片由广东省中医院提供，布渣叶3.0kg，以1g生药加水5mL，冷水浸泡30min后，开始武火煎煮，煮沸后用文火慢煎20min，趁热过滤。煎煮第2遍,按1g生药加水4mL，煎法同上，合并滤液。60℃恒温下旋转蒸发浓缩，浓缩为含生药6g/ mL的水煎液，置4℃冰箱保存备用。

试剂与仪器：高脂饲料（0.2%胆酸钠、2%胆固醇、10%食用油、87.8%基础饲料），胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶（广州天马精细化工厂）。胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）（南京建成生物试剂公司）。肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-a，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）试剂盒（武汉博士德生物技术有限公司）。LDZ5-2型离心机（北京医用离心机厂），DY89-I型电动玻璃匀浆机（宁波新芝），AU600型全自动生化分析仪（日本OLYMPUS株式会社）。

动物分组：Wistar大鼠48只，按数字随机分组法分为正常对照组、模型对照组、非诺贝特组、布渣叶水煎液组。

动物模型制备：分别给予各模型组大鼠高脂饮食（3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81.3%基础饲料），正常对照组给予普通饲料，连续8周。从第9周开始给予药物治疗，布渣叶水煎液组灌服剂量为150g/（kg·d），非诺贝特组灌服剂量为1000m g/（kg·d），正常对照组和模型对照组给予等体积的生理盐水，连续至第12周。

指标检测：从造模开始，第12周末当晚大鼠禁食不禁水12h，腹腔注射麻醉，打开腹腔，采用真空采血管腹主动脉取血，血样4℃静置2h后，3000rmp离心10min，分离血清，采用酶比色法在全自动生化分析仪测定血清TC、TG含量。游离并提取肝脏，4℃生理盐水冲洗，去除薄膜，称肝湿重，用以计算肝指数［肝指数（%）=肝湿质量/体质量×100%］。冰盘上剪取一小块肝叶，剪碎，移入玻璃匀浆器，加入预冷的生理盐水，研磨制备10%肝组织匀浆，3500r/min离心10min，取上清液，采用GPO-PAP酶法测定肝组织中TC、TG含量；采用ELISA检测肝组织匀浆TNF-α、MCP-1和NF-κB的表达。

统计学处理：采用SPSS14.0系统软件包，计量资料以（±s ）表示、采用t检验和单因素方差分析，计数资料采用χ2检验，组间比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

各组大鼠血清和肝组织TC、TG及肝指数变化见表1。

表1 各组大鼠血清和肝组织TC、TG及肝指数比较 （±s）

表1 各组大鼠血清和肝组织TC、TG及肝指数比较 （±s）

注：与正常对照组比较，**P＜0.01，*P＜0.05；与模型对照组比较，△△P＜0.01，△P＜0.05；与非诺贝特组比较，#P＜0.05。

各组大鼠肝组织TNF-α、MCP-1和NF-κB的表达见表2。

表2 各组大鼠肝组织TNF-α、MCP-1和NF-KB表达比较 （±s）

表2 各组大鼠肝组织TNF-α、MCP-1和NF-KB表达比较 （±s）

注：与正常对照组比较，**P＜0.01，*P＜0.05；与模型对照组比较，△△P＜0.01，△P＜0.05；与非诺贝特组比较，#P＜0.05。

3 讨 论

肝细胞损伤是由多种因素介导的复杂的病理学过程，损伤的结果是肝细胞可能发生凋亡或者坏死。就其发病机制来看，高脂血症和胰岛素抵抗是NAFLD的始动因素，其引发的一系列代谢紊乱是NAFLD形成的重要条件。正常肝脏内脂质含量占肝湿质量的2-4%，当肝内脂质含量超过肝湿质量的5%就成为脂肪肝。研究表明，脂肪肝患者血中TG和TC明显高于非脂肪肝患者［6］。因此，降低血脂、清除肝脏内聚集的脂质是治疗NAFLD的重要方法之一。非诺贝特是目前临床上常用的调脂药，其为氯贝丁酸衍生物类血脂调节药，其通过抑制极低密度脂蛋白（LDL-C）和TG的生成，降低血液LDL-C、TC和TG［7］。布渣叶水煎液给药治疗4周后，可以降低大鼠NAFLD大鼠血清TC、TG；同时降低肝组织TC、TG含量和肝指数。实验结果表明，布渣叶水煎液可以显著降低NAFLD大鼠体内的脂质含量，并可改善肝脏脂肪变性的程度，提示其对NAFLD具有较好的脂质调节作用。

TNF-α是一种具有广泛生物学功能的多肽类细胞因子，其在炎症和免疫反应中的启动和维持中起着重要作用，肝脏是TNF-α作用的主要靶器官之一，由肝实质细胞和肝内Kupffer细胞分泌，可以诱导肝细胞凋亡，也可以导致肝细胞坏死，是造成肝细胞损作的主要因子，TNF-α通过增强自由基的产生和脂质过氧化等方面促进脂肪性肝炎的发生［8］。NF-κB是一种广泛存在于真核生物细胞浆中，激活后进入细胞核与相应靶基因结合的核转录因子，能够介导各类炎性介质表达，引发炎症反应等，NF-κB作为一种重要的前炎症介质基因的早期转录调控子，调控的基因可以编码急性反应蛋白和各种炎症细胞因子，促使TNF-α的基因表达、释放增加［9］。MCP-1是一种趋化因子，主要趋化和活化单核/巨噬细胞分泌促炎症性细胞因子如IFN-γ、TNF-α等引起的炎症反应，具有前炎症因子作用和促纤维化作用，能增强肝脏脂肪病变［10］。实验研究发现，NAFLD模型组大鼠组织TNF-α、NF-κB和MCP-1显著升高，经给予布渣叶水煎液治疗，可以降低炎症反应因子的表达。

布渣叶水煎液对NAFLD模型大鼠具有明显改善作用，其机制与降低血脂和降低肝细胞炎症反应等有关，其作用或调控机制需要进一步理论挖掘及实验研究。

［1］王琼，孙建光．中医药防治非酒精性脂肪肝的实验研究进展［J］．广西中医学院学报，2011，14（3）：58-60．

［2］Radu C,Grigorescu M,Crisan D,et al．Prevalence and associated risk factors of non-alcoholic fatty liver disease in hospitalized patients［J］．Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases,2008，17：255-260．

［3］广东省食品药品监督管理局．广东省中药材标准（第一册）［M］，广州：广东科学技术出版社，2004：66．

［4］曾聪彦，梅全喜，高玉桥，等．布渣叶水提物解热退黄作用的实验研究［J］．中国药房，2010，21（11）：973-974．

［5］李坤平，潘天玲，高崇凯，等．大孔吸附树脂富集纯化布渣叶总黄酮的研究［J］．中药材，2009，32（4）：601-603．

［6］徐正婕，范建高．非酒精性脂肪性肝病的综合治疗［J］．世界临床医药，2010．31（9）：513-515．

［7］Belfort R，Berria R，Comen J，et a1．Fenofibrate reduces systemic infammation markers independent of its efects on lipid and glucose metabolism in patients with the metabolic syndrome［J］．Clin Endocrinol Metab，2010，95（2）：829-836．

［8］Vielhauer V，Mayadas TN．Functions of TNF anti its receptors in renal disease：distinct roles in inflammatory tissue injury and immune regulalion[J]．Semin Nephrol，2007，27（3）：286-308．

［9］Vallabhapurapu S,Karin M．Regulation and fuction of NF-κB transcription factors in the immune system［J］．Annu Rev Immunol,2009，27（1）：693-733．

［10］Satiroglu O,Uyde HA,Demir A,et al．Association between plasmamonocyte chemoattractant protein-1 levels and the extent of atherosclerotic peripheral artery disease［J］．Tohoku J Exp Med,2011，224（4）：301-306．

Objective：To observe the effect of Microcos paniculata Decoction on blood lipid and inflammation of nonalcoholic fatty liver rats．Method：The rat model was established by high fat diet．48 male wistar rats were divided into 4 groups，the normal control group，the model control group，Fenoterol group and Microcos paniculata Decoction group in random．The last 3 groups were gavaged with normal saline，Fenoterol solution and Microcos paniculata Decoction respectivly．Result：Microcos paniculata Decoction could decrease TC，TG and liver index in blood serum and liver tissue of nonalcoholic fatty liver rats and reduce the expression of inflammatory factors，such as TNF-α，MCP-1，NF-κB，and so on．Conclusion：Microcos paniculata Decoction could improve blood lipid and inflammation of nonalcoholic fatty liver rats．

Microcos paniculata；rat；nonalcoholic fatty liver；blood lipid；inflammation

R256.497.55

B

1004-2814(2013)08-624-03

2013-03-21