红藤方对子宫内膜异位症患者血清基质金属蛋白水解酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1水平的影响※

黄彩梅 王勤洁 周 强 张 洁

(上海市普陀区妇婴保健院中医科，上海 200060)

子宫内膜异位症是一种常见和多发的妇科疾病，其发病率在育龄期为10% ～15%，且呈上升趋势［1］。研究发现，异位子宫内膜对卵巢等盆腔器官和腹膜的黏附、侵蚀和分化等类似肿瘤的生物学行为有关。异位的子宫内膜黏附于腹膜及其他结缔组织后进一步种植、生长需要腹膜的细胞外基质(ECM)的降解，而基质金属蛋白酶(MMPs)是降解ECM成分的重要酶类，金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)是MMPs的特异抑制剂［2］。研究表明，血清基质金属蛋白水解酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)是与ECM的生物学功能密切相关的蛋白质分子，其在子宫内膜中ECM的破坏和降解过程中具有十分重要的作用，促使子宫内膜异位症的形成［3］。本研究通过观察红藤方对子宫内膜异位症患者血清MMP-9、TIMP-1的影响，以探讨其可能的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2009-06—2012-12我院中医妇科门诊患者73例，随机分为2组。治疗组37例，年龄21～48岁，平均(31.6±6.8)岁;病程 3周 ～8年，平均(12.8±2.9)个月。对照组36例，年龄25～46岁，平均(32.9±6.3)岁;病程3周 ～10年，平均(15.2±4.5)个月。2组一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。同时选择正常组40例，年龄20～41岁，平均(29.5±5.1)岁。3组受检前3个月内均未接受甾体类激素治疗。

1.2 诊断标准 参照中国中西医结合学会妇产科专业委员会第三届学术会议修订的“子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征及女性不孕症的中西医结合诊疗标准”［4］。①渐进性痛经;②周期性的直肠刺激症状进行性加剧;③经期少腹、腰骶部不适，进行性加重;④后穹窿、子宫骶骨韧带或子宫峡部触痛性结节;⑤盆腔包块;⑥月经前后上述包块有明显大小之变化。凡有以上①、②、③ 之一和④、⑤、⑥之一，两点共同存在时即可确诊。

1.3 治疗方法

1.3.1 治疗组 予红藤方。药物组成:大血藤30 g，生蒲黄12 g，丹参12 g，牡蛎15 g。上方头煎加水300 mL，武火煮开后用文火煎30 min，取汁150 mL，二煎加水200 mL，煎30 min后取汁150 mL，二煎相混。日1剂，分早、晚2次服。经期停服，连服3个月为1个疗程。

1.3.2 对照组 第1次于月经第1 d开始口服孕三烯酮胶囊(北京紫竹药业有限公司，国药准字H19980020，规格2.5 mg/粒)1粒，3 d后服用第2次，以后每周相同时间服用，每周2粒，连续服用3个月为1个疗程。

1.3.3 正常组 无继发性痛经、性交痛及不孕，查体结果(包括体检、盆腔B超检查)均排除盆腔肿瘤和子宫内膜异位症的可能。进行抽血检验。

1.4 检测方法 治疗组、对照组治疗前后及正常组分别空腹抽取静脉血3～5 mL，离心收集血清，-20℃保存。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清MMP-9、TIMP-1，ELISA试剂盒由上海博迈生物科技有限公司提供，严格按说明书操作。

1.5 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计量资料用均数±标准差(±s)表示，采用t检验。

2 结果

各组治疗前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比较见表1。

表1 各组治疗前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比较±s

表1 各组治疗前后血清MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平比较±s

与正常组比较，*P＜0.05;与本组治疗前比较，△P＜0.05;与对照组治疗后比较，#P＜0.05

治疗组(n=37)治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 正常组(n=40)对照组(n=36)MMP-9(ng/mL) 345.20±121.16* 268.41±81.43＊△ 332.50±89.26* 303.19±80.48*203.99±48.13 TIMP-1(ng/mL) 277.66±85.55* 378.02±93.02 264.91±80.94* 278.69±67.89* 561.26±121.48 MMP-9/TIMP-1 1.36±0.63* 0.75±0.2＊△# 1.38±0.56* 1.17±0.45*0.39±0.14

由表1可见，治疗组、对照组治疗前血清MMP-9高于正常组(P＜0.05)，血清TIMP-1低于正常组(P＜0.05)，MMP-9/TIMP-1水平低于正常组(P＜0.05)。治疗组、对照组治疗后血清MMP-9均降低与正常组差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后对照组与正常组血清TIMP-1比较差异有统计学意义(P＜0.05)，而治疗组与正常组血清TIMP-1比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后治疗组、对照组血清MMP-9/TIMP-1与正常组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，但治疗后治疗组更接近于正常组，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。治疗组治疗前后MMP-9比较差异有统计学意义(P＜0.05)。治疗组治疗前后MMP-9/TIMP-1比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组治疗前后血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

子宫内膜异位症是常见的妇科疾病之一，其发病机制不清，最为推崇的是经血逆流、内膜种植学说及机体免疫应答系统异常理论。大量实验证实，逆流到腹腔的子宫内膜可以在腹腔内种植、生长。经血逆流在生育期妇女非常普遍，发生率可高达90%，而子宫内膜异位症的患病率仅占20% 左右［5］。子宫内膜异位症的发生一般需要经历3个关键步骤，即内膜细胞的黏附、侵袭和局部血管形成。

异位内膜的进展和生长中关键的一步是ECM的降解破坏。许多酶类可以降解破坏ECM中的大分子蛋白，但MMPs的这种能力最强，是最重要的一种。其中MMP-9作用底物为基膜的主成分Ⅳ型胶原，因而它在子宫内膜异位症发生、发展中起重要作用，这种作用在子宫内膜异位症的研究中已经得到证实。大量研究表明，MMP-9蛋白表达与子宫内膜异位症有关系，异位内膜的MMP-9表达明显高于在位内膜，且MMP-9在子宫内膜异位症的发病进程中可能起重要作用，它促进了异位组织细胞外基质的降解和血管的生成，这也是子宫内膜异位症疾病进展的关键所在［6-7］。研究显示，MMPs存在于子宫内膜异位症的病灶中，可能使初生的异位病灶侵入腹膜和其他结缔组织中，其中MMP-9作用最强，被认为是子宫内膜异位症浸润、转移的重要细胞因子之一［6］。

近年大量研究发现，体内天然存在的TIMPs可抑制MMPs活性。TIMP-1是近年来发现的MMPs的天然抑制剂，是体内细胞分泌的一种蛋白酶抑制剂，能与MMP-9形成1∶1复合体。TIMP-1能抑制有活性或无活性的MMP-9，可产生抑制新生血管形成作用［8］。Lou YH等［9］运用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测子宫内膜异位症组异位症内膜35例、内异症组在位内膜22例及正常组在位内膜28例，结果显示与正常组相比TIMP-1在子宫内膜组织中均有显著下降。因此，推测TIMP-1在子宫内膜组织中的下降，特别是正常内膜组织中的下降是导致内异症有强烈侵袭性的重要原因。Gilabert等［10］研究也证明子宫内膜异位症患者腹腔液中TIMP-1表达明显下降。研究还发现MMPs和其抑制物之间的平衡非常重要，MMPs、TIMPs不仅是调节细胞外基质的酶类，而且对细胞、血管和组织具有复杂的调节作用，MMPs/TIMPs比值是维持机体内环境稳定和细胞外基质完整性的关键因素。近来研究表明，MMPs和TIMPs在育龄期妇女子宫内膜周期性的生长、分化和崩溃过程中有重要的作用，也参与了子宫内膜异位症的病理过程［11-12］。有研究显示，维持腹腔内环境的稳定并非单纯依赖MMPs，而是依赖MMPs/TIMPs比值的稳定，子宫内膜异位症患者即使无MMPs表达升高，但已出现MMPs/TIMPs比例失调，导致ECM降解、基底膜消失，新生血管生成，促使异位病灶生成、发展。

因此，众多研究表明子宫内膜异位症患者异位组织中MMP-9高表达，TIMP-1水平偏低，MMP-9/TIMP-1比值失调。

中医古代文献中无“子宫内膜异位症”病名，根据其临床表现，可归属于中医学痛经、月经过多、癥瘕、不孕等范畴。瘀血内阻已经成为本病公认的发病机制。1990年中国中西医结合学会妇产科专业委员会第三届学术会议将子宫内膜异位症中医诊断标准修订为血瘀证。主要证型有:气滞血瘀证、寒凝血瘀证、痰湿血瘀证、热郁血瘀证、肾虚血瘀证等［13］，治疗应以活血化瘀为纲，兼顾补肾、疏肝、健脾等法。大量临床资料表明，应用该治法疗效显著［14-16］。

红藤方以大血藤为君药，其性味苦平，归大肠经，长于清热解毒，消痈止痛，又有活血散瘀止痛的作用;丹参、生蒲黄为臣药，丹参性味苦微寒，无毒，活血化瘀，凉血消癥，生蒲黄味甘，性平，活血祛瘀;牡蛎为佐药，牡蛎性味咸平，微寒，无毒，化痰软坚，清热除湿。全方可清热活血，化瘀止痛，消除盆腔粘连［17］。研究表明，说明红藤方是临床用于治疗子宫内膜异位症的有效方剂［18］。动物研究证实，红藤方能显著抑制大鼠在位及异位内膜组织中MMP-2和MMP-9的活性，从而降低了异位内膜的种植、侵袭能力，进一步阐明了红藤方活血化瘀药物能够通过抑制异位内膜中MMPs的表达来控制子宫内膜异位症的发生、发展［19］。

观察结果表明，治疗组、对照组治疗前MMP-9、MMP-9/TIMP-1均高于正常组(P＜0.05)，TIMP-1均低于正常组(P＜0.05);治疗组治疗后 MMP-9、MMP-9/TIMP-1均低于本组治疗前(P＜0.05);治疗组治疗后MMP-9/TIMP-1低于对照组治疗后(P＜0.05)。说明红藤方是通过提高患者血清 TIMP-1水平，降低血清MMP-9的作用，改变了MMP-9/TIMP-1比值，从而抑制了异位内膜的生长，这可能是红藤方治疗子宫内膜异位症的作用机制之一，其深入的机制有待进一步研究。

［1］ 冷金花，张羽.腹腔镜在子宫内膜异位症中的应用现状及局限性［J］.中国实用妇科与产科杂志，2010，26(1):6-8.

［2］ Mizumoto H，Saito T，Ashihara K，et al.Expression of matrix metalloproteinases in ovarian endometriomas:immunohistochemical study and enzyme immunoassay［J］.Life Sci，2002，71(3):259-273.

［3］ Paraskeva PA，Ridgway PF，Olsen S，et al.A surgically induced hypoxic environment causes changes in the metastatic behaviour of tumours in vitro［J］.Clin Exp Metastasis，2006，23(2):149-157.

［4］ 中国中西医结合学会妇产科专业委员会第三届学术会议.子宫内膜异位症、妊娠高血压综合征及女性不孕症的中西医结合诊疗标准［J］.中西医结合杂志，1991，11(6):376-379.

［5］ Anger DL，Foster WG.The link between environmental toxicant exposure and endometriosis［J］.Front Biosci，2008，13:1578-1593.

［6］ Chung HW，Wen Y，Chun SH，et al.Matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-3 mRNA expression in ectopic and eutopic endometrium in women with endometriosis:a rationale for endometriotic invasiveness［J］.Fertil Steril，2001，75(1):152-159.

［7］ Ria R，Loverro G，Vacca A，et al.Angiogenesis extent and expression of matrix metalloproteinase-2 and-9 agree with progression of ovarian endometriomas［J］.Eur J Clin Invest，2002，32(3):199-206.

［8］ 严俊，戴志远.基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1与子宫内膜异位症的相关性研究［J］.中国现代医药杂志，2008，10(11):7-9.

［9］ Lou YH，Guo XH，Jiang H，et al.Expression of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in human and nude mouse ectopic endometrium and the effect of estrogen and progestin on their expression［J］.Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao，2010，30(4):750-754.

［10］ Gilabert-Estellés J，Ramón LA，Espaa F，et al.Expression of angiogenic factors in endometriosis:relationship to fibrinolytic and metalloproteinase systems［J］.Hum Reprod，2007，22(8):2120-2127.

［11］ Mizumoto H，Saito T，Ashihara K，et al.Expression of matrix metalloproteinases in ovarian endometriomas:immunohistochemical study and enzyme immunoassay［J］.Life Sci，2002，71(3):259-273.

［12］ Pilka R，Hrachovec P.Matrix metalloproteinases and menstruation［J］.Ceska Gynekol，2003，68(1):36-40.

［13］ 刘敏如，谭万信.中医妇产科学［M］.北京:人民卫生出版社，2001:341-346.

［14］ 王珍，罗爱鄂.抵挡汤加味治疗子宫内膜异位症80例［J］.广西中医药，2009，32(1):19-20.

［15］ 刘冠春.活血化瘀法治疗子宫内膜异位症48例临床观察［J］.现代中医药，2005，25(5):37.

［16］ 郑爱华.活血化瘀法治疗子宫内膜异位症50例［J］.河北中医，2004，26(3):192.

［17］ 杨峰，李凤梅.红藤方治疗子宫内膜异位症82例临床观察［J］.山东中医杂志，2006，25(12):824-825.

［18］ 束兰娣，宋知理，戴德英.红藤合剂治疗子宫内膜异位症80例疗效观察［J］.中医杂志，1999，40(9):547～548.

［19］ 张婷婷，刘津翚，束兰娣，等.红藤方对子宫内膜异位症大鼠MMP-9和MMP-2蛋白表达的干预作用［J］.上海中医药大学学报，2005，19(4):48-51.