炎复康栓的制备及其体外抑菌作用研究※

辛玲歌 张 旋 张媛媛

(陕西中医学院第二附属医院药剂科，陕西 咸阳 712000)

制剂与质量控制

炎复康栓的制备及其体外抑菌作用研究※

辛玲歌 张 旋 张媛媛

(陕西中医学院第二附属医院药剂科，陕西 咸阳 712000)

【摘 要】目的研究炎复康栓的制备，观察其对体外抑菌作用的影响。方法应用薄层色谱法(TLC)对处方中的黄连、苦参进行薄层色谱鉴别；应用平板打孔法和试管稀释法观察炎复康栓对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和抑菌圈。结果黄连、苦参薄层色谱特征斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰；炎复康栓对以上5种菌均具有较强的抑制作用。结论炎复康栓制备工艺可行，质量可控，并具有良好的抑菌作用，应用前景良好。

【关键词】生产和制备；微生物敏感性试验;中草药；药理学；黄连；苦参；白花蛇舌草

炎复康栓是我院在长期的临床实践过程中，结合中医理论，在辨证论治的基础上总结出来的有效方剂，主要由黄连、苦参、白花蛇舌草等中药组成，具有清热燥湿、活血化瘀、杀虫止痒的功效。是临床用于治疗女性生殖系统炎症(外阴炎、阴道炎、宫颈炎、盆腔炎)、直肠炎、结肠炎、包皮炎、阴囊湿疹的外用中药制剂[1-2]。

本品原剂型为洗液，是将诸药水提后适当浓缩，加入防腐剂后，灭菌，分装即得。虽在长期使用过程中疗效可靠，但具有久置后澄明度低、质量不稳定、患者使用不方便等缺点。中药栓剂是以中药饮片为基本原料，经现代化工艺“全成分”提取而成，与适宜的基质混合制成专供腔道给药的一种固体制剂。根据妇女宫颈阴道生理特征形体，决定将本产品改良制成栓剂，可克服原洗液的缺点，同时栓剂具有操作简单、携带方便、质量稳定、安全有效、药效持久的特点。为了加强对该品种的质量控制，我们进行了该制剂的制备工艺研究并对其进行了体外抑菌试验，为临床应用提供理论依据，结果如下。

1 材料与菌种

1.1 实验材料 盐酸小檗碱对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110713-200911)；苦参碱对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110805-200508)；洁尔阴洗液(成都恩威制药有限公司，国药准字Z10930008，批号：201202023)；营养肉汤培养基(上海时代生物科技有限公司，批号：20120121)，营养琼脂培养基(上海时代生物科技有限公司，批号：20120212)，沙氏培养基(上海研生生化试剂有限公司，批号：20120315)；甲醇、三氯甲烷、乙醇、碘化铋钾均由天津市科密欧化学试剂有限公司提供，氨试液由西安三浦精细化工厂提供，亚硝酸钠由山东海洋化工有限责任公司提供。

1.2 菌种 金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、绿脓杆菌[CMCC(B)10104]、白色念珠菌[CMCC(F) 98001]、乙型溶血性链球菌[CMCC(B)32210]、大肠埃希菌[CMCC(B)32210]均由陕西省咸阳市疾病预防控制中心细菌室提供。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 处方 黄连57.10 g，白花蛇舌草142.86 g，苦参28.57 g，牡丹皮14.29 g，丹参8.57 g，赤芍药8.57 g，半合成脂肪甘油酯适量。

2.1.2 制备方法 将黄连、白花蛇舌草、苦参、牡丹皮、丹参、赤芍药按处方量称取，粉碎成粗粉，用70%乙醇提取2次，第1次加12倍量，第2次加10倍量，每次提取1 h，滤过，合并滤液。滤液浓缩成稠膏，将稠膏进行真空干燥，粉碎，过100目筛，置洁净容器中，备用。另取半合成甘油酯，于65 ℃下熔融至约3/4，停止加热，继续搅拌，待温度下降至60 ℃加入浸膏粉，搅拌均匀后，注模前基质温度约为50 ℃，注入已均匀涂布好润滑油的栓模中(模具温度约为15 ℃)，冷却30 min后，刮去溢出部分，制成每粒重2.6 g的炎复康栓。总量为100粒，共260 g。

2.1.3 质量评价

2.1.3.1 性状 本品为棕色至棕褐色阴道栓剂。

2.1.3.2 薄层鉴别

2.1.3.2.1 黄连的鉴别[3-4]取3批本品(批号为20120702、20120710、20120715)各2粒，加水10 mL，水浴加热使溶解，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇10 mL使溶解，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5 μL，对照品溶液1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(12∶6∶3∶3∶0.6)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。结果见封3，图1。

2.1.3.2.2 苦参的鉴别[3，5]取3批本品(批号为20120702、20120710、20120715)各2粒，加水20 mL，水浴加热使溶解，过滤，滤液加氨试液1 mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，分取三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各4 μL，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂，展开，展距8 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)10 ℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点。结果见封3，图2。

2.1.3.3 检查 ①重量差异：应符合规定；②融变时限：除另有规定外，照融变时限检查法[3]检查，应符合规定；③其他：应符合栓剂项下有关各项规定[3]。

2.1.4 体外抑菌实验研究

2.1.4.1 菌悬液的制备 从新鲜菌种斜面醮取少量菌苔，白色念珠菌接种于沙氏培养基，于26 ℃培养24 h，其余菌种接种于营养肉汤培养基，于37 ℃ 培养24 h。培养后作为原菌液，用0.9%灭菌氯化钠注射液稀释至10-5，白色念珠菌稀释至10-6。

2.1.4.2 平板打孔法(琼脂扩散法)[6-8]取稀释菌液0.1 mL于平板表面，用“L”棒涂匀，待菌液完全均匀覆盖后静置1 min再吸出菌液，用内径6 mm无菌打孔器打孔；取药物原液(1.0 g/mL)或洁尔阴洗液100 μL用微量加样器依次向孔内加入；置电热恒温培养箱中，白色念珠菌26 ℃、其余各菌37 ℃分别培养24 h。观察抑菌圈的有无及大小，并用游标卡尺准确测量抑菌圈直径(mm)，实验重复3次，以3次平均值作为抑菌圈。

2.1.4.3 试管稀释法(最低抑菌浓度测定)[9-10]每一菌株取干净试管10支，无菌操作下，其中白色念珠菌加入沙氏液体培养基1.0 mL，其余各菌分别加入营养肉汤液体培养基1.0 mL；第1管加入药物原液或洁尔阴洗液1.0 mL，混匀后吸取1.0 mL 置下一试管中，依次逐管稀释至第9管，第10管不加药液作为空白管。除最后一管外，其余各试管均加入细菌或霉菌稀释液0.1 mL，置恒温培养箱中，白色念珠菌28 ℃、其余各菌37 ℃培养24 h。与空白管比较，试管内液体培养基澄清表示无菌生长；混浊，表示有细菌生长。以完全无菌生长的最高药物稀释度为药物对该菌株的最低抑菌浓度(MIC)，将已观察到的MIC测定中未长菌的各管取出，分别吸取0.1 mL用接种环转种于血琼脂平皿和霉菌培养基平皿的相应位置，于37 ℃培养24 h，以杀死99.9%实验菌菌体的药物最高稀释度为最低杀菌浓度(MBC)。

2.2 结 果

2.2.1 平板抑菌圈实验 见表1。

表1 平板抑菌圈实验 mm，±s

与洁尔阴洗液比较，*P<0.05

由表1可见，炎复康栓浓度为1.0 g/mL，对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠埃希菌均有不同程度的抑制作用；与洁尔阴洗液比较，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌的抑菌作用强(P<0.05)。

2.2.2 炎复康栓抑菌杀菌实验 见表2。

表2 炎复康栓抑菌杀菌实验 mg/mL

与洁尔阴洗液比较，*P<0.05

由表2可见，炎复康栓对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、白色念球菌的抑菌、杀菌作用明显优于洁尔阴洗液(P<0.05)。

3 讨 论

阴道炎属中医学阴痒范畴，其发病主要责之于肝、脾二脏功能失调，致湿热内生，随经下注，或蕴瘀生虫，直中阴中，故治疗关键是健脾、除湿、杀虫、止痒。炎复康栓是由我院院内制剂炎复康洗液发展而来，具有清热利湿、活血化瘀、杀虫止痒的功效。方中以清热燥湿的黄连和苦参为君药，以清热解毒、利湿通淋的白花蛇舌草为臣药，佐以牡丹皮、丹参、赤芍药活血化瘀，凉血止痛。

炎复康栓是在炎复康洗液的基础上开发的，通过将洗液改变剂型制成栓剂，克服原洗液久置后澄明度低、质量不稳定、患者使用不方便等缺点，但是栓剂在制备过程中制备工艺对栓剂的质量影响较大。药物加入顺序、基质加热的温度及栓剂冷却时间直接影响栓剂的硬度和融变时限。在水浴上融化基质，拿出，加入药粉，快速搅匀，倒入栓剂模型，由于药粉不溶于基质，温度过高则会延长冷却时间，药物就会沉淀，使栓剂药物含量不匀，影响栓剂的质量；而温度太低时，半饱和脂肪酸酯又会凝固，都不利于制备制剂，所以温度的控制很重要。

我们对炎复康栓中每味药进行筛选，结果选用薄层色谱法对黄连、苦参进行定性鉴别，结果显示供试品与对照品相应的位置上有相同的斑点，阴性对照品无干扰，方法具有专一性。本品应建立定量分析方法，测定主药含量，更好地控制药品质量，但由于条件所限，定量分析方法有待于进一步的探讨和研究。

已知引起宫颈炎、阴道炎的病原体除淋球菌、支原体、衣原体、滴虫、念珠菌等外，尚有金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、白色念珠菌等病原微生物[11-12]。本研究结果表明，炎复康栓对以上5种病原微生物的生长具有抑制作用，其作用高于洁尔阴洗液，说明炎复康栓具有良好的抑菌和杀菌作用，其作用机制还有待于进一步研究。

[1] 刘初春，辛玲歌.炎复康洗液的制备与临床应用[J].西北药学杂志，2005，20(5)：226-227.

[2] 辛玲歌，张媛媛，刘初春.炎复康洗液药理作用的实验研究[J].陕西中医，2011，32(11)：1555-1556.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录34，附录72，附录15.

[4] 李凌军，孙敬昌，李运伦.清热降压胶囊质量标准研究[J].山东中医药大学学报，2011，35(4)：363-365.

[5] 刘光斌，任洁.舒阴洗液质量标准研究[J].中华中医药学刊，2010，28(11)：2438-2439.

[6] 张卓然.医学微生物实验学[M].2版.北京：科学出版社，2003：26，57，216.

[7] 陈更新，邓海霞，陈志强，等.前列清颗粒的体内、体外抑菌作用的实验研究[J].新中医，2012，44(7)：166-168.

[8] 徐叔云，陈修，卞如濂.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2002：1612.

[9] 唐亮，刘翠艳，韩春杨，等.中药研究常用三种体外抑菌方法的比较[J].中国中医药科技，2011，18(5)：419-420.

[10] 段如麟，陈解民.妇产科症状鉴别诊断学[M].北京：人民军医出版社，1995：76-96.

[11] 郑怀美.现代妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，1993：247-268.

[12] 徐爱良，卢芳国，文宁，等.中药净坤液体外抗菌作用的研究[J].中国中医药信息杂志，2005，12(6)：28-29.

PreparationofYanfukangsuppositoryanditsanti-bacterialeffectsinvitro

XINLingge，ZHANGXuan，ZHANGYuanyuan.

PharmacyDepartment，TheSecondAffiliatedHospitalofShaanxiUniversityofChineseMedicine，Shanxi，Xianyang712000

【Abstract】ObjectiveTo prepare Yanfukang Suppository and to investigate its the anti-bacterial effects in vitro.MethodsCoptis and Flavescens in prescription were identified by TLC.The method of agar diffusion plate method and tube double dilution were used to determine the minimum inhibitory concentration(MIC)，minimum bactericidal concentrations(MBC) and the bacteriostatic annulus of Yanfukang on these bacteria like staphylococcus aureus，Escherichia coli，pseudomonas aeruginosa，hemolytic streptococcus and candida albicans.ResultsCoptis and Flavescens in prescription could be detected by TLC.The result indicated that Yanfukang Suppository had strong antibacterial action on these five kinds of bacteria.ConclusionThe Yanfukang Suppository can be prepared by a simple process; the quality can be controlled and it has favorable antibacterial activities.The prospect is fine to make use of it.

【Key words】Production and preparation; Antimicrobial susceptibility test; Chinese herbal medicine; Pharmacology; Berberine; Sophora; Diffusa

辛玲歌(1966—)，女，主任药师，学士。研究方向：中药制剂及临床药学。

【中图分类号】R943.4；R282.71；R287

A

1002-2619(2013)12-1865-03

※ 项目来源：陕西省教育厅2012年科学研究项目计划(一)(编号：12JK0721)

2012-12-20)