幽门螺杆菌检测胃黏膜活检的几种染色方法比较

蔡正凤

(青海省交通医院病理科，青海西宁810008)

幽门螺杆菌检测胃黏膜活检的几种染色方法比较

蔡正凤

(青海省交通医院病理科，青海西宁810008)

幽门螺杆菌；染色；甲苯胺蓝；胃黏膜；脱蜡

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是一种革兰阴性杆菌，人群中Hp的感染率较高，幽门螺杆菌的感染与多种疾病有关，尤其是消化系统疾病，如与慢性活动性胃炎，消化性溃疡的发生，发展及复发相关，近几年来甚至认为Hp与胃癌相关[1]。清除Hp有利于胃黏膜炎症程度的减轻，因此，检测Hp的感染对诊断、治疗及药物疗效分析显得尤为重要。但检测方法较多，每种方法各有优缺点，由于条件和技术的要求，限制了某些方法的应用[2]。在长期的工作经验中摸索出甲苯胺蓝染色效果较好，并与HE染色，W-S银染等染色方法进行了比较，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集我科2012年6月至12月半年中胃镜活检确诊为慢性活动性胃炎和胃溃疡的蜡块50例，每例切片4张分别进行HE染色、Warthin starry(W-S)银染、碱性品红、甲苯胺蓝染色。

1.2 试剂W-S银染液，碱性品红，哈瑞(Harris)苏木精-伊红染液，甲苯胺蓝染液。

1.3 染色方法W-S银染色，碱性品红染色按说明书进行，HE常规染色；甲苯胺蓝染色方法：(1)石蜡切片常规脱蜡至水；(2)滴加1%甲苯胺蓝染液染色5～8min(染液配制：1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水中，滴加媒染剂2ml，置于60℃温箱2h，然后移置室温备用)；(3)自来水洗1～2min；(4)95%乙醇急速分化；(5)无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察Hp的显示情况。

2 结果

W-S银染色Hp呈黑色，背景为棕黄色，在50例慢性活动性胃炎和胃溃疡的胃黏膜活检蜡块中的阳性检出率为84%(42/50);碱性品红染色Hp与背景均呈鲜红色，阳性检出率为78%(39/50);HE染色Hp呈浅灰色，阳性检出率72%(36/50);甲苯胺蓝染色Hp呈浅蓝色或蓝色，阳性检出率92%(46/50);甲苯胺蓝染色胃黏膜活检组织的Hp的显微镜下组织图像见图1A～D,镜下显示Hp呈浅蓝色菌体形态清晰(图1A)，Hp形状杆状或短弧状(图1B)，位于胃小凹或胃小凹的分泌物中(图1C)，亦可位于腺腔内单个散在，片状或团块状分布(图1D)。

图1 胃黏膜活检组织及HP染色结果

3 讨论

经典的W-S银染色法，Hp呈黑色，但染液配制复杂，需要一定的温度，染色时间长，常出现银颗粒沉淀物，影响观察。碱性品红染色菌体和背景均呈鲜红色，镜检时容易导致视力疲劳。HE染色时，Hp着色较浅较淡，不仅观察困难而且经常容易漏诊。HE染色是组织切片最经常和广泛应用的染色方法[3]，但其手续众多，过程复杂，而甲苯胺蓝染色具有如下优点，染色步骤少，操作简便，时间短，染液配制简单，所需药品少，染液可反复使用，长期保存，成本低廉，Hp着色稳定鲜明，菌体形态清晰，在显微镜下易于观察。是一种经济实用的染色方法，符合Hp感染的诊断标准[4]。

甲苯胺蓝是属醌亚胺噻嗪类的一种碱性染料，对Hp有一定的亲和力，经媒染作用后，对Hp染色强度增加，稳定且鲜明，甲苯胺蓝在醇中溶解度比水中低，用醇进行分化易于控制适度[5]，由于甲苯胺蓝对Hp有较强的亲和力，故可采用稍过染，深分化的退行性染色法，这样胃黏膜活检组织褪色较多，Hp褪色较少，从而加大了Hp与背景的色差，使Hp更易于组织碎片、污染菌及其他杂菌鉴别。Hp的组织染色方法有多种，但均不够理想或操作繁琐，或染液使用率低成本较高，或染色效果不佳，本人在多年的工作当中不断摸索，发现甲苯胺蓝是一种染色效果好，操作简便，成本低廉的染色方法，值得推广，对Hp的临床诊断及研究有一定的应用价值[6]。

[1]梁后杰,刘为纹.幽门螺杆菌与胃癌关系的研究发展[J].中国实用内科杂志,1994,14(7):436-437.

[2]刘天舒,王吉耀,陈世耀,等.幽门螺杆菌相关性胃部疾病的病理变迁[J].中华消化杂志,2001,21(1):15-17.

[3]王伯沄,李玉松,黄高昇,等.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社, 2000:128-129.

[4]中华医学会消化病学分会.幽门螺杆菌若干问题的共识意见[J].中华消化杂志,2000,20(2)：117-118.

[5]凌启波.实用病理特殊染色和组化技术[M].广州:广州高等教育出版社,1989:43-45.

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R361+.2，R466

B

1674-1129(2013)03-0290-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.03.040