肥大细胞甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法

王玉文，宋宗义，赵云龙，刘建民

肥大细胞呈圆形或卵圆形，细胞核较小，位于细胞中央，胞质充满大小一致的异染性颗粒。其广泛分布于皮肤及内脏黏膜下的微血管周围，可分泌多种细胞因子，参与机体创伤修复、Ⅰ型超敏反应等生物学行为[1-2]。肥大细胞染色剂种类较多，其中甲苯胺蓝最为常用，肥大细胞的细胞核可以被甲苯胺蓝染成蓝色，细胞质内异染性颗粒被染成紫红色。在肥大细胞染色实验时，发现在配置好的甲苯胺蓝水溶液中加入过饱和的碳酸锂，极大提高了甲苯胺蓝的染色能力，缩短了染色时间。本科室选用两种甲苯胺蓝染色液进行对比，并对染色结果进行分析，收到良好效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料选取我院病理科存档的喉、肺组织活检标本各10例，标本均经10%中性福尔马林固定，脱水后包埋成组织蜡块，每个蜡块3 μm厚连续切片。

1.2 方法

1.2.1甲苯胺蓝硫酸混合染色法 A液(0.5%甲苯胺蓝染色液)：称取0.5 g甲苯胺蓝溶解于100 mL纯水中。B液(3%硫酸水溶液)：取适量浓硫酸按比例稀释成3%的水溶液。染色时取0.5 mL A液和20 μL B液混合成工作液(pH 1.90)，石蜡切片脱蜡复水，用工作液染色30 min，水洗晾干或冷风吹干，中性树胶封固[3]。

1.2.2甲苯胺蓝硼酸盐染色法 试剂购自Phygene公司，甲苯胺蓝染色液中含有1%硼酸钠(pH 3.10)。石蜡切片脱蜡复水后染色10 min，染色较深时可用醋酸分化液分化，水洗晾干或冷风吹干，中性树胶封固。

1.2.3甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法 A液(0.5%甲苯胺蓝染色液)：称取0.5 g甲苯胺蓝溶解于100 mL纯水中。B液(醋酸分化液)：取0.5 mL冰醋酸加入99.5 mL纯水中。染色时取20 mL A液加入过量的碳酸锂使染色液达到饱和状态，此为工作液。石蜡切片脱蜡复水后用工作液染色1～5 min后水洗，B液分化20～30 s，水洗晾干或冷风吹干，中性树胶封固。

甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色液pH 10.13，为了探讨碳酸锂在染色液中的作用，用氢氧化钠将A液pH调至10.13，配制为甲苯胺蓝碱性染色液，染色方法同上。

2 结果

本组对喉、肺组织活检标本各10例进行3种方法染色，结果显示：(1)甲苯胺蓝硫酸混合染色法中组织着色最浅，肥大细胞异染性颗粒被染成紫蓝色，与其它组织对比不够清晰。(2)甲苯胺蓝硼酸盐染色法将异染性颗粒染成紫红色。(3)甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法将异染性颗粒染成清晰的紫红色，与细胞核对比十分明显，最易观察。本组结果提示甲苯胺蓝饱和碳酸锂法染色效果最佳(表1、2，图1、2)。

3 讨论

甲苯胺蓝属于醌亚胺碱性染料，含有2个发色团：胺基、醌型苯环。此外，甲苯胺蓝还含有两个助色团，其促使染料电离成盐类，帮助染料与被染物质结合，使组织上色[4]。肥大细胞胞质中含有嗜碱性颗粒，颗粒内含有肝素、组胺和5-羟色胺，属于硫酸酯，具有异染性，可被甲苯胺蓝染成紫红色。

苏木精与甲苯胺蓝同为碱性核染料，在配制苏木精染色液时，乙酸的加入量对苏木精染色性有较大影响。乙酸加入量过多、pH较低时，染色液选择性增强，但是染色能力减弱。反之，乙酸加入量不足、pH较高时，染色液选择性减弱，染色能力增强，细胞核、质均上色，需要进行分化。

甲苯胺蓝染色液也有类似的现象，甲苯胺蓝硫酸混合染色法染色液pH约为1.90时，甲苯胺蓝染色能力较弱，染色时间需要30 min；但是甲苯胺蓝选择能力较强，细胞质几乎不着色，细胞核被染成蓝色，肥大细胞异染性颗粒被染成紫蓝色，染色结果与丁桂龄等[5]报道一致。甲苯胺蓝硼酸盐染色法染色液pH约为3.10时，甲苯胺蓝染色能力有所增强，染色时间缩短；但是选择能力有所降低，细胞质也会着色，细胞质着色较深时可以用醋酸分化。

甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法染色液pH最高(约为10.13)，此时甲苯胺蓝染色能力最强，但是选择能力较弱。切片染色1 min组织即可上色，但细胞质着色较重，需用醋酸分化。醋酸分化后，细胞质蓝色大部分被脱去，细胞核呈蓝色，肥大细胞内异染性颗粒呈紫红色，对比非常明显，利于观察鉴别。

表1 喉组织的3种不同甲苯胺蓝染色比较

表2 肺组织的3种不同甲苯胺蓝染色比较

①A①B①C②A②B②C

许多研究认为，酸性染液可增强肥大细胞胞质颗粒的异染性，染液配制时应选用酸性试剂[1,3]。酸性条件虽然可以增加染色液的选择性，但是pH过低会削弱染色液的染色能力，染色时间大大延长，切片对比效果不明显。

甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法为碱性染色液，与前两种酸性染色液有较大不同，却得到了较好的染色结果。通过氢氧化钠将甲苯胺蓝水溶液的pH值调高到甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色液相同的pH值，获得同样的染色效果，证明碳酸锂只是为甲苯胺蓝提供碱性的溶液条件，其并未参与染色反应。甲苯胺蓝在碱性条件下染色能力为何会大幅增强，作者推测：甲苯胺蓝分子含有2个助色团，碱性条件促进了助色团的电离，充分电离的助色团增强了甲苯胺蓝与组织的亲和力，使组织快速着色。

甲苯胺蓝硫酸混合染色法和甲苯胺蓝硼酸盐染色法是酸性染色液，这两种染色液更加注重染色液的选染性。甲苯胺蓝饱和碳酸锂染色法是碱性染色液，该染色液的染色能力更加突出，染色时间短，符合手术冷冻切片的染色要求，并且配制方法简单，值得推广应用。