不同蛋白源饲料对革胡子鲶苗种部分健康指标的影响

2013-02-19季延滨程民杰孙学亮谢永庆陈成勋

饲料工业 2013年24期

■季延滨程民杰孙学亮谢永庆陈成勋

（天津农学院水产科学系，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384）

革胡子鲶（Clarias leather）俗称埃及塘虱，分类上隶属于硬骨鱼纲，辐鳍亚纲，鲤形总目（Cypri⁃nomorpha），鲶形目（Siluriformes），胡子鲶科（Clari⁃idae）[1]。革胡子鲶具有生长快、适应性强、易繁殖、耐低氧、产量大、营养价值高、肉质细嫩等优点。随着革胡子鲶在我国的全面推广，国内对其研究和报道日渐增多，主要报道有生物学特性[2]、饲料动植物蛋白比[3]、人工繁育[4]、苗种培育[5]等。但不同蛋白源对其非特异性免疫和抗氧化性能的研究报道甚少。本文通过对革胡子鲶各项健康指标的测定，分析各种蛋白源饲料对其影响，旨在为提高鱼类免疫力，增强抗病能力，生产出配方更加科学的人工配合饲料提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验用鱼

选取健康无病的革胡子鲶苗种[(84.5±2.4)g]共180尾。试验前所有苗种分组暂养在容积为75 L的塑料圆桶中，使其适应养殖环境。

1.2 试验饲料

本试验采用两种不同蛋白源的饲料，包括以鱼粉和肉粉为蛋白源的两种人工配合饲料以及冰鲜鱼肉（鲤鱼）做对照组。鱼粉和肉粉在两种人工配合饲料中各占50%，豆粕、玉米、次粉分别占15%、10%、20%，添加剂占5%。所有原料都经过粉碎机粉碎并通过40目筛绢过筛，按比例称重后均匀混合，制粒，晾晒后放在阴凉干燥处保存备用。两种饲料营养成分见表1。

表1 两种人工配合饲料的营养成分(%)

1.3 试验设计

试验共分为3组（鱼粉组、肉粉组和冰鲜鱼肉组），每组设3个重复，每个重复放鱼20尾试验用鱼，分别放养在6个白色75 L的塑料桶中。养殖时间为30 d，日投饵量按体重的3%。试验期间，每天捞取残饵，换水1～2次，每次换掉1/4～1/5。试验结束后，停食1 d，每组随机取出5尾试验用鱼，采用尾柄静脉采血法，抽取血液样本，随后对鱼体进行解剖，取出其肝脏、脾脏、头肾备用。称取组织样本200 mg左右，将其放入匀浆管，再用移液管吸取9倍于组织质量的生理盐水倒入匀浆管中，将匀浆管置于冰水中，匀浆器由低速到高速匀浆，使组织被充分研磨直至浆状且无明显较大碎块，将其倒入离心管，4 000 r/min离心15 min，取上清液备用。测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）活性及丙二醛（MDA）、总蛋白(以上试剂盒购于南京建成生物工程研究所)含量等指标。

1.4 数据处理

数据用SPSS13.0软件做方差分析，差异显著(P＜0.05)用Duncan's法作多重比较。表中数据用“平均值±标准误”表示。

2 结果

2.1 超氧化物歧化酶（SOD）活性（见表2）

表2 各组革胡子鲶血清、肝脏、脾脏和头肾SOD的活性

如表2所示，冰鲜鱼肉组的血清和肝脏SOD活性显著高于鱼粉组和肉粉组，而其头肾SOD活性和鱼粉组测定结果相比差异显著。同样，肉粉组与鱼粉组的头肾SOD活性差异显著。鱼粉组和肉粉组的血清和肝脏的SOD活性差异不显著，而三个组脾脏的SOD活性测定结果差异也不显著。

2.2 过氧化氢酶（CAT）活性（见表3）

表3 各组革胡子鲶血清、肝脏、脾脏和头肾CAT的活性

如表3所示，鱼粉组和肉粉组的各组织和血清CAT活性差异不显著，而二者与冰鲜鱼肉相比，血清和肝脏的CAT活性测定结果差异显著，其他结果比较差异均不显著。

2.3 丙二醛（MDA）含量（见表4）

如表4所示，冰鲜鱼肉组的血清和各组织MDA含量与另外两组相比，测定结果均差异显著。肉粉组与鱼粉组和冰鲜鱼肉组头肾中的MDA含量各组间差异均显著。鱼粉组和肉粉组的血清、肝脏和脾脏的MDA含量测定结果差异均不显著。

表4 各组革胡子鲶血清、肝脏、脾脏和头肾MDA的含量

2.4 碱性磷酸酶（AKP）活性（见表5）

如表5所示，冰鲜鱼肉组与鱼粉组的AKP活性测定结果相比较，血清和肝脏的结果差异均显著，脾脏和头肾则不显著。肉粉组的肝脏和脾脏的AKP活性与鱼粉组相比，差异显著，而其血清和头肾中的AKP活性和冰鲜鱼肉组的测定结果比较，差异显著。

2.5 酸性磷酸酶（ACP）活性（见表6）

表5 各组革胡子鲶血清、肝脏、脾脏和头肾AKP的活性

表6 各组革胡子鲶血清、肝脏、脾脏和头肾ACP的活性

如表6所示，冰鲜鱼肉的血清ACP活性与肉粉组相比，差异显著；而鱼粉组则与冰鲜鱼肉组和肉粉组差异不显著。肝脏、脾脏和头肾的ACP活性，3个组之间差异均不显著。

3 讨论

3.1 不同蛋白源饲料对革胡子鲶SOD活性的影响

超氧化物歧化酶（SOD）存在于几乎所有的动物、植物以及微生物体内，催化超氧阴离子自由基（·O2-）发生歧化反应,清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤，是抗氧化酶系统的组成部分，成为衡量机体健康及免疫调节能力大小的重要指标之一。SOD在生物体内的水平高低是自由基损害细胞程度的直观指标，目前众多研究表明，鱼类SOD活性与各种环境因子有关，当水体内氨氮浓度升高时，鱼类体内产生大量·O2-、H2O2等有害物质，SOD活性会随即上升[6]。而为了提高鱼类机体免疫力和抗病力，向饲料中添加中草药等添加剂可有效提升SOD活性[7]。在饲料中添加高剂量维生素E（400、600 mg/kg饲料）会升高罗氏沼虾肝脏的SOD活性[8]。本试验比较投喂不同蛋白源饲料后，对革胡子鲶的健康影响。结果显示，投喂冰鲜鱼肉的革胡子鲶幼鱼的血清和肝脏SOD活性明显高于另外两组，这可能是由于冰鲜鱼肉中含有丰富的维生素、脂类等营养物质和活性物质，而且冰鲜鱼肉本身营养组成更接近革胡子鲶，对革胡子鲶的生长和提高免疫活力有很大帮助，在不良环境中，SOD的活性会大大增加，清除体内浓度过高的超氧阴离子自由基，保持体内自由基的代谢平衡，提高机体免疫能力，降低疾病发生的可能。

3.2 不同蛋白源饲料对革胡子鲶CAT的影响

过氧化氢酶（CAT）是一种酶类清除剂，它可将细胞代谢产生的毒性物质H2O2迅速催化分解为H2O和O2，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，防止羟自由基的形成，是生物防御体系的关键酶之一。F.I.Achuba研究发现，石油烃类物质可以诱导脂质过氧化，而机体会增加CAT和SOD的活性以保护鱼类免受石油烃类物质所引发的自由基毒性的伤害[9]。在CAT和SOD的共同作用下使机体保持自由基的代谢平衡，其中SOD可催化·O2-生成H2O2，从而清除·O2-，而CAT能催化H2O2分解成水和氧气[10]。通过试验得知，投喂冰鲜鱼肉的革胡子鲶幼鱼血清和肝脏的CAT活性显著高于鱼粉组和肉粉组，而脾脏和头肾的CAT活性，三组差异均不显著。由于冰鲜鱼肉和鱼粉、肉粉为蛋白源的人工配合饲料相比，提高了SOD的活性，SOD催化·O2-生成H2O2,从而清除了·O2-，使得H2O2的含量增多，为保护机体免受过氧化氢的侵害，CAT的活性明显增大。

3.3 不同蛋白源饲料对革胡子鲶MDA含量的影响

丙二醛（MDA）是脂质过氧化作用的最终分解产物，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性，其含量标志着机体的活性氧自由基和脂质过氧化水平。自由基是生物体内具有高度活性的物质，能参与多种化学反应，一旦自由基含量增加，则会引发脂质过氧化，形成MDA等新的氧化自由基，对鱼体造成损伤[11]。通过检测MDA的含量可间接反映出细胞受损伤的程度。彭士明等研究了饲料中添加维生素E可显著降低黑鲷幼鱼肝脏中MDA的含量[12]。从试验测定结果看，冰鲜鱼肉组的血清、肝脏和脾脏中的MDA含量均显著少于鱼粉组和肉粉组，由于冰鲜鱼肉中可能含有革胡子鲶所需要的必需氨基酸和多种抗氧化活性物质，且这些营养物质的活性高于鱼粉和肉粉制成的人工配合饲料，所以冰鲜鱼肉更能显著抑制MDA的产生，并且可有效地防止生物膜的脂质发生过氧化作用，避免其生物活性丧失，从而减少脂质过氧化作用的最后产物MDA的含量，阻止其与蛋白质的巯基反应，蛋白质和酶将保持他们的生物活性，从而进行正常的代谢活动。另外，SOD、CAT活性的增强，形成了联合作用，清除机体内的活性氧自由基和脂质氧化代谢产物，使得MDA的含量大大降低，并提高了鱼体的免疫能力。

3.4 不同蛋白源饲料对革胡子鲶AKP的影响

碱性磷酸酶（AKP）是一种磷酸单酯水解酶，在机体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，有助于吸收脂类、葡萄糖、钙和无机磷。在免疫方面，它是溶酶体酶的重要组成部分，当异物被吞入细胞后与溶酶体酶融合，最终被包括AKP、ACP在内的各种水解酶分解，从而在免疫反应中发挥重要作用。有研究表明，许多理化因子能通过调控碱性磷酸酶活性而调节动物的新陈代谢，在饲料中添加维生素C，可使机体中AKP、ACP活性显著增高，促进新陈代谢并提高免疫力[13]。本试验则验证不同蛋白源的饲料也会影响AKP的活性。试验结果表明，冰鲜鱼肉组的血清中AKP活性显著高于其他两组，而肝脏的AKP活性却显著低于鱼粉组。鱼粉组脾脏的AKP含量与冰鲜鱼肉组差异不显著，但显著高于肉粉组。可能是鱼粉的蛋白组成以及含量与冰鲜鱼肉相似，且符合革胡子鲶的需要，所以鱼粉组的AKP活性要高于肉粉组，与冰鲜鱼肉组接近。

3.5 不同蛋白源饲料对革胡子鲶ACP的影响

酸性磷酸酶（ACP）广泛分布于生物界，同AKP一样是一种磷酸酯酶，存在于溶酶体内，也见于溶酶体外的内质网和胞浆基质内，除了参与磷酸酯的代谢外，还参与代谢调节、能量转换及信号传导等重要生命活动。本试验结果显示，冰鲜鱼肉组的血清ACP活性显著高于肉粉组，与鱼粉组差异不显著；其他组织的ACP活性，三组的测定结果接近，差异不显著。