龙葵对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

刘颖姝，刘芳萍，李昌文，周 琼，李 睿，张秀英，赵玉林

(1.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030;2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001)

龙葵为茄科植物龙葵(Solanum nigrum)或少花龙葵(S.photeinocarpum Nakamura et Odashima)的干燥全草，分布于我国南北各省区，广东省各地均有出产，民间应用广泛［1］。作为传统中药的龙葵其药理作用主要有以下几个方面:抗肿瘤作用、抑菌和抗病毒作用、抗炎与抗休克作用、神经药理作用以及泌尿系统的药理作用［2］。而龙葵在治疗肝损伤方面却未见报道。最近一些研究证明，龙葵的提取物中包含有几种抗氧化剂:五倍子酸、原儿茶酸、儿茶酸、芦丁等。体外试验中已经证实这些成分都有较强的抗氧化活性［3］。这些抗氧化的成分可以使龙葵作为一种抗氧化的药物在氧化损伤引起的疾病中起到积极的作用。本试验研究了龙葵对CCl4所致急性肝损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 分析纯CCl4。市售精制花生油。龙葵全草，购自哈尔滨市三棵树中药材批发市场。水飞蓟素，德国马博士大药厂。丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、草氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。旋转蒸发仪，型号:R205，上海申胜生物技术有限公司。真空干燥箱，型号:DZF—6050，上海一恒科学仪器有限公司。紫外分光光度计，型号:756p，上海光谱仪器有限公司。

1.2 试验动物 昆明系小鼠，体重(20±2 g)，雄性，清洁级，购自哈药集团制药总厂试验动物中心，许可证号:SCXK(黑)2006-007。小鼠适应性饲养5～7 d，自由摄食和饮水，温度保持18～20℃，自由光照，相对湿度40% ～60%，定时通风换气。

1.3 龙葵提取物的准备 干龙葵800 g放在5000 mL水中浸泡30 min，然后100℃连续热提取40 min。滤过水提物后经旋转蒸发仪90℃水域浓缩直至成为乳状，随后放入真空干燥箱中烘干(温度为70℃)。最终获得185 g粉末(为初始重量的23.125%)。试验中的浓度都是基于干重的提取物。

1.4 动物分组 将60只小鼠随机分成六组，分别为:正常对照组、模型组、药物组(龙葵高、中、低)、阳性对照组(水飞蓟素)。水飞蓟素组给药浓度为0.2 g/kg［4］，龙葵高、中、低剂量组给药浓度分别为1.5、1.0、0.5 g/kg。试验过程中正常组和模型组给予生理盐水。灌胃剂量均为10 mL/kg［5］。试验期间所有小鼠标准饮食，自由饮水。第7 d给药后，禁食16 h后染毒。药物组和模型组用0.35%的CCl4油溶液，正常组用生理盐水，灌胃剂量均为10 mL/kg［5］。

1.5 检测指标 染毒24 h后眼球采血，血液3000 r/min，离心10 min，分离血清;剖检取肝脏，肉眼观察其病变后，手动做成匀浆。组织匀浆后用3000 r/min，离心15 min，取上清液。参照各个试剂盒的说明书，检测血清中的ALT、AST和组织中的MDA、SOD和 GSH-Px。

1.6 统计学处理 使用SPSS17.0统计软件进行生物学分析，结果用平均数±标准差表示，多组数据间比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示差异显著有统计学意义;P＜0.01表示差异极显著有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠肝重和肝体比的变化 各组小鼠肝重和肝体比的变化见表1。与正常对照组比较，模型组、龙葵各剂量组、阳性药物组小鼠肝重和肝体比无显著性差异(P＞0.05)。由此可见，药物和毒物的刺激不能引起小鼠脏器的严重损伤。

表1 小鼠肝重、肝体比的影响±s，n=10)

表1 小鼠肝重、肝体比的影响±s，n=10)

1.090 ±0.14 4.823 ±0.69模型组 0.992 ±0.34 4.571 ±0.34阳性对照组 1.075 ±0.07 4.886 ±0.28龙葵高剂量组 0.980 ±0.10 4.622 ±0.18龙葵中剂量组 1.097 ±0.08 4.728 ±0.27龙葵低剂量组/%正常组组别 肝重/g 肝体比1.067 ±0.13 4.659 ±0.30

2.2 病理剖检变化 大体观察发现，阳性药物组与正常对照组小鼠肝脏表面光滑、有弹性、色泽红润。模型组肝脏颜色略黄无光泽，质地较脆且表面有弥漫粟粒状小点。龙葵组随着给剂量的增大病变逐渐减轻，且最大剂量时接近正常水平。

2.3 龙葵对小鼠生化指标的影响 各组小鼠血清中ALT、AST及肝组织中SOD、MDA、GSH-Px变化见表2。通过统计学分析可以看出，与模型组相比较，正常组、阳性对照组、龙葵高剂量组都显示差异极显著(P＜0.01);与正常组相比，龙葵高剂量组、阳性药物组均无显著性差异(P＞0.05);龙葵高剂 量组与阳性药物组之间也无显著性差异(P＞0.05)。

表2 各组小鼠血清ALT、AST及肝组织SOD、MDA、GSH-Px变化 (

3 讨论

本试验选用的龙葵全草为用途广泛的药用植物，来源容易，并且与阳性药物水飞蓟素(文献报道水飞蓟素对各种肝脏疾病都有很好的疗效［6-7］)相比较疗效相当。试验结果说明了龙葵除了前人总结的常用的药理作用以外，在抗氧化损伤方面也同样具有很好的保护作用，发现了龙葵新的药用价值。

本试验用0.35%的CCl4按10 mL/kg的剂量给小鼠灌胃，成功复制了周琼建立的急性肝损伤模型［5］。CCl4是一种强烈的能够引起肝细胞坏死的化合物，一直被研究者用来诱发各种肝损伤模型以阐明化合物肝毒性机制或肝损伤保护机制［8］。CCl4所致的肝损伤促进了氧自由基的产生，导致线粒体及肝细胞的脂质过氧化损伤。这种损伤破坏了细胞膜结构，使肝细胞变性坏死，细胞内转氨酶、自由基渗入血液而活性升高，故血清中ALT、AST仍被认为是肝损伤的敏感指标，其升高在一定程度上说明了肝脏受损的程度［9］。

本试验结果显示，CCl4模型组小鼠肝脏呈现明显病变，血清ALT、AST均显著升高，表明肝细胞已严重损伤，模型复制成功，此结果与童其［9］报道的一致。同时肝功能氧化指标的变化也显示出肝细胞严重受损的趋势。药物治疗高剂量组小鼠肝脏眼观与正常组无明显差异，血清ALT、AST明显降低，肝功能氧化指标也接近正常水平。此结果与詹可顺等［10］研究的白芍总苷对小鼠化学性肝损伤的保护作用及机制结果一致。±s，n=10)

综上所述，本试验所选用的龙葵提取物对试验性CCl4所致小鼠急性肝损伤有很好的保护作用，且最佳药物浓度为150 mg/kg。其保护机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化，有效地保护细胞的膜结构和减少细胞凋亡有关。

［1］ 梅全喜.广东地产药材研究［M］.广东科技出版社，2011:247-250.

［2］卢汝梅，谭新武，周媛媛.龙葵的研究进展［J］.时珍国医国药，2009，20(7):1821.

［3］Lin H M，Tseng H C，Wang C J，et al.Induction of autophagy and apoptosis by the extract of Solanum nigrum Linn in HepG2 cells［J］J Agric Food Chem，2007，(55):3620-3628.

［4］李佐军.水飞蓟素对CCl4和/或酒精所致小鼠肝纤维化的保护作用及机制初探［D］.中南大学，2008.

［5］ 周 琼.小鼠急性肝损伤模型的建立及GSTA1分析［D］.东北农业大学，2012.

［6］Murphy F，Issa R，Zhou X，et al.Inhibition of apoptosis of activated hepatic stellate cells by TIMP-1 is mediated via effects on MMP inhibition:Implications for resversibility of liver fibrosis［J］.J Biol Chem，2002，277(3):11069-11076.

［7］Jia J D，Yin S S.The progress in diagnosis and treatment of liver fibrosis［J］.J Clin hitemMed，2002，19:244-246.

［8］汪 涛，姜 华，陆国才，等.四氯化碳肝脏毒性机制的研究进展［J］.毒理学杂志，2007，21(4):339.

［9］童 其，闰向东，高 珊，等.四氯化碳急性肝损伤敏感指标的研究［J］.中国食品卫生杂志，2000，12(6):10-11.

［10］詹可顺，王 华，魏 伟.白芍总苷对小鼠化学性肝损伤的保护作用及机制［J］.安徽医科大学学报，2006，41(6):664-666.