多指标优选麸炒枳实的炮制工艺研究

马雪松 邹 兵 尹丽波 林桂梅*

（1 辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032；2 辽宁省鞍山市药品检验所，辽宁 鞍山 114006；3 辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600）

枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果[1]。枳实历代有多种炮制方法，麸炒枳实缓和峻烈之性，以散积消痞力胜[2]。临床多以麸炒枳实入药，减缓破气之功，故有必要对麸炒枳实工艺进行优化[3]。本试验以出膏率，辛弗林的含量及总黄酮含量为指标，优选麸炒枳实最佳炮制工艺。

1 仪器与材料

1.1 仪器

日本岛津LC-20AT液相色谱仪；岛津 LC-Solution工作站；METTLER AE240型十万分之一分析天平；FA1004B电子天平；KQ-250DB型超声波清洗器。

1.2 材料

枳实经鉴定为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果；辛弗林、柚皮苷、橙皮苷对照品均购自中国药品生物制品检定所；新橙皮苷购自上海源叶生物科技有限公司，纯度＞98%。色谱纯甲醇、乙腈，纯净水，其它为分析纯。

2 方法与结果

2.1 辛弗林含量测定

2.1.1 对照品溶液制备

取辛弗林对照品精密称定，置25mL量瓶中加甲醇溶解稀释至刻度，得0.1852 mg/mL的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备

精密称定枳实中粉1g置具塞锥形瓶中，加入甲醇100mL称定重量，超声30min后补重，滤过，精密量取续滤液50mL至蒸发皿中称干膏重。干膏溶解后定容于10mL量瓶中，用0.45μm滤过。

2.1.3 测定条件

色谱柱：Diamonsil C18（5μm，200mm×4.6mm）；流动相：甲醇-磷酸水溶液（0.18%磷酸，0.22%十二烷基硫酸钠）58∶42；柱温：40℃；流速：1mL/min；检测波长：275 nm；进样量：10μL。

2.1.4 方法学考察

2.1.4.1 线性范围考察

精密吸取辛弗林对照品溶液1、2、5、10、15、20μL，进样，得辛弗林线性回归方程，y＝699877x-21722，相关系数r＝0.9999。表明辛弗林进样量在0.1852～3.704 μg线性关系良好。

2.1.4.2 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液连续进样6次，RSD为1.3%，表明仪器精密度良好。

2.1.4.3 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液分别于0、1、2、4、8、24h进样分析，RSD为1.9%，表明稳定性良好。

2.1.4.4 重复性试验

取同一样品6份，分别进样10μL，测定辛弗林平均含量为0.3662%，RSD为1.6%。

2.1.4.5 加样回收率试验

加样回收率为98.88%，RSD为2.2%。

2.2 总黄酮含量测定

2.2.1 对照品溶液制备

精密称定柚皮苷对照品置10mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，得0.0315 mg/mL对照品溶液。新橙皮苷及橙皮苷对照品制备方法同上，得0.0471mg/mL新橙皮苷对照品及0.0567mg/mL橙皮苷对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备

精密吸取2.1.2项下制得溶液2mL于100mL量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，用0.45μm滤膜滤过。

2.2.3 测定条件

色谱柱：Diamonsil C18（5μm，200mm×4.6mm）；流动相：乙腈-水（磷酸调0.01%）20.5∶79.5；柱温：35℃；流速：0.6 mL/min；检测波长：283nm；进样量：10μL。

2.2.4 方法学考察

2.2.4.1 线性范围

分别精密吸取柚皮苷及新橙皮苷对照品1、5、10、20、50、100μL，进样得柚皮苷线性回归方程，y＝2E+06x-22564，相关系数r＝0.9993，新橙皮苷线性回归方程，y＝4E+06x+71311，相关系数r＝0.9999。表明线性均良好。

精密吸取橙皮苷对照品1、2、5、10、15、20μL，进样得线性回归方程，y＝2E+06x+30002，相关系数r＝0.9998。表明线性良好。

2.2.4.2 精密度试验

精密吸取供试品溶液，测定柚皮苷RSD为0.8%，橙皮苷RSD为2.4%，新橙皮苷峰RSD1.8 %，结果精密度良好。

2.2.4.3 稳定性试验

精密吸取试品溶液10μL，分别于0、1、2、4、8、24h进样分析，测定柚皮苷RSD为0.9%，橙皮苷RSD为1.8 %，新橙皮苷RSD为1.9 %，结果稳定性良好。

2.2.4.4 重复性试验

经测定样品中柚皮苷平均含量为9.51%，RSD为1.3%；橙皮苷平均含量1. 27%，RSD为1.4 %，新橙皮苷平均含量12.34 %，RSD为1.5%。重复性良好。

2.2.4.5 加样回收率试验

经测定柚皮苷加样回收率为99.13%，RSD为1.5%。橙皮苷加样回收率为99.82%，RSD为0.9%。新橙皮苷加样回收率为99.17%，RSD为1.8%。

3 麸炒工艺优选

3.1 试验设计

选取炒制时间（A）、炒制温度（B）、麸用量（C），三个因素，选用L9（3）4正交表，因素水平安排见表5，按2.1和2.2项下方法分别测定辛弗林、总黄酮含量以及出膏率，按加权平均法计算其综合评分，其中辛弗林的含量、总黄酮含量以及出膏率的权重分别为0.4，0.4和0.2。

表1 因素水平表

3.2 试验方法

将铁锅加热至所需温度，均匀撒入定量麦麸，待烟起，投入净枳实，适时出锅，计算指标的综合评分。正交试验测定数据和统计结果分别见表2、表3，方差分析结果见表4。

表2 L9（3）4正交试验结果

组别 1 2 3 4 5 6 7 8 9柚皮苷(%)9.21 7.91 9.03 8.44 10.49 8.80 8.51 9.11 9.23橙皮苷(%)1.10 1.26 1.10 0.84 0.87 1.01 1.04 2.46 1.10新橙皮苷(%)12.30 12.6011.97 13.16 13.86 14.38 13.81 13.2013.56总黄酮(%)22.61 21.7722.10 22.44 25.22 24.20 23.36 24.7623.88

3.3 试验结果及分析

因素C对综合评分结果有显著影响。极差分析认为各因素主次顺序是C＞A＞B。最佳工艺条件定为A2B2C3。即每100 g药材投麸20 g，于190-210 ℃炒制70～90s。

表3 麸炒枳实炮制正交试验因素水平分析

表4 方差分析表

4 讨 论

枳实中黄酮类含量约占20%，主要有橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷等[4]。本实验选柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷三种对照品作为黄酮指标，对麸炒枳实工艺进行优选。以辛弗林含量、总黄酮含量以及出膏率作为指标，对麸炒枳实的最佳炮制工艺进行优选，随着炒制时间的增加，出膏率、辛弗林及总黄酮含量也随之增减，当炒制时间为70～90s时，综合评分最优。认为炒制时间、麸用量和炒制温度均为枳实中有效成分影响因素，其中炒制温度有显著性影响。本实验确立最佳工艺为进一步探讨麸炒枳实炮制作用提供了参考。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2010:230.

[2]贾天柱.中药炮制学[M].上海:上海科学技术出版社,2008:128-129.

[3]郑虎占编著.中药饮片应用与标准化研究[M].北京:学苑出版社.2004:290.

[4]黄爱华,曹骋,曾元儿.药物分析杂志[J].HPLC法测定不同规格酸橙枳实中新橙皮苷和柚皮苷的含量,2009,29(9):1448.