壮药猫豆质量标准研究

韦松基* 薛亚馨 王小新 韦 威

（广西中医学院，广西 南宁 530001）

猫豆为豆科植物龙爪黎豆Mucuna pruriens （L.）DC.var.utilis（Wall.ex Wight）Bak.ex Burck[Stizolobium cochinchinensis （Lour.）Tang et Wang]的种子，在我国南方地区有丰富的资源，其主要成分为左旋多巴[1]。研究表明，左旋多巴是治疗帕金森病的主要用药[2]。猫豆为广西地方习用药材，尚未收载于药材标准。此次拟收载于《广西壮药质量标准（第二卷）》，本文通过实验考察了猫豆中左旋多巴的显微鉴别，薄层鉴别，含量测定及一些理化指标检验，制定出了猫豆的质量标准，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

CH20生物显微镜（日本奥林巴斯公司）；日本岛津LC-10AT型高效液相色谱仪、岛津SPD-10Avp紫外检测器、威玛龙色谱工作站、进样针：Hamilton 25μl进样针、SB2200-T型超声仪、GB11240-89型电热恒温水浴锅、Metler AM100型电子分析天平、Sartorius BT125D电子天平、Millipore simplicity-185超纯水器（美国密理博公司）。

1.2 试药

左旋多巴对照品（中国药品生物制剂品检定所提供，批号0170-9302，供含量测定）；乙腈（天津市四友生物医学技术有限公司；色谱纯）、甲醇（天津康巢科技开发有限公司；色谱纯）、冰醋酸（成都科龙化工试剂厂；分析纯）、磷酸（西陇化工股份有限公司；色谱纯）；薄层层析硅胶（化学纯，青岛海洋化工有限公司，批号0100616）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 药材性状

本品为扁椭圆形或肾形，长约1.4cm，宽约1cm，厚约6mm。表面灰白色，微皱缩，略具光泽，边缘有白色种脐，长约6mm，宽约1.5mm，种脐上有类自色膜片状种阜残留。质坚硬。种皮薄而脆。气微，味淡，嚼之有豆腥气。

2.2 粉末鉴别

粉末白色。淀粉粒大量存在，多为单粒，直径28～134μm，贝壳形或椭圆形，脐点点状，层纹明显；脐点处常可见不规则裂缝。表皮细胞栅栏状，排列紧密，长110～285μm，直径15～35μm；顶面观蜂窝状，细胞为5～7边形，壁极厚。支持细胞哑铃形或骨状，常形成缢缩，长60～235μm，直径25～80μm；顶面观类圆形不规则状，壁厚，胞腔明显。子叶细胞多见，细胞多边形，含有大量糊粉粒及油滴；常可见散在的糊粉粒与油滴。

2.3 水分、总灰分、酸不溶灰分及浸出物的测定

2.3.1 测定方法

水分测定参照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H第一法测定；总灰分及酸不溶灰分参照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ K测定；浸出物参照《中国药典》2010年版一部附录Ⅹ A测定，分别以水、乙醇、稀乙醇为溶剂，采用冷浸法及热浸法测定本品浸出物的含量。

2.3.2 测定结果

10批猫豆药材的水分、总灰分、酸不溶灰分及浸出物的测定结果的平均值分别：水分12.51%，总灰分2.89%，酸不溶灰分0.18%；水热浸出物34.13%，乙醇冷浸出物7.52%，乙醇热浸出物9.08%，稀乙醇冷浸出物17.84%，稀乙醇热浸出物21.37%。综合考虑各因素的影响，建议猫豆水分不得过14.5%，总灰分不得过3.6%，酸不溶灰分不得超过0.3%，浸出物以水为溶剂，热浸法测定，浸出物不得少于25%。

2.4 猫豆中左旋多巴的薄层鉴别

取本品粉末2g，于 0.1mol/L HCl溶液中冷浸 12h，不时振摇，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取对照药材2g同法制成对照药材溶液。取左旋多巴对照品2.52mg，加0.1mol/L盐酸制成每1mL含0.6mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各2µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）为展开剂，预平衡15min，展开，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

图1 猫豆药材薄层色谱图（T：30 ℃，RH：51%）

2.5 猫豆中左旋多巴的含量测定

2.5.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1mol/L冰醋酸溶液-甲醇（95：5）为流动相；检测波长：280nm。理论板数按左旋多巴峰计算应不低于5000。HPLC色谱图见图2。

2.5.2 对照品溶液制备

精密称取左旋多巴对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶解制成每1mL约含0.51mg的溶液，即得。

图2 猫豆药材HPLC图

2.5.3 供试品溶液的制备

将本品药材粉碎，过二号筛，称取过二号筛的药材约2g，精密称定，置50mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液振摇后冷浸24h，定容至刻度，滤过，取续滤液2.5mL置于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.5.4 标准曲线的制备

分别精密吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，用0.1mol/L盐酸溶液定容至10mL，摇匀，制成浓度为25.4、50.8、76.2、101.6、127.0、152.4μg/mL的一系列对照品溶液，然后依法操作，分别进样20μL，记录峰面积。以对照品进样浓度（X）为横坐标，吸收峰峰面积积分值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=9844.65X-10872.13，r=0.9997（n=6）。结果表明左旋多巴进样浓度在25.4～152.4μg/mL范围内与其峰面积积分值之间呈良好线性关系。

2.5.5 精密度实验

精密吸取对照品试液20µL，连续进样6次，测得芒果苷峰面积分值，RSD为0.61%，表明仪器精密度良好。

2.5.6 稳定性实验

取对照品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样，测得左旋多巴峰面积，RSD为0.72%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.5.7 重复性实验

取左旋多巴对照品溶液，连续进样6次，每次20µl，测定左旋多巴含量，6次测定的RSD为1.88%，表明重现性良好。

2.5.8 加样回收实验

采用加样回收法，取同一批号样品9份，每份约0.2g，精密称定，再分别精密加入左旋多巴对照品，制备供试品溶液，测定并计算左旋多巴的含量，结果见表1，回收率符合要求。

2.5.9 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按外标法计算供试品中左旋多巴的含量。测定结果见表2。

考虑到不同产地的药材中左旋多巴含量不一，以及在平时放置、实验过程中操作等引起的损失，故将猫豆中左旋多巴含量的限度适当降低，将本品的含量限度确定为：本品按干燥品计算，含左旋多巴不得低于4.05%

表1 左旋多巴加样回收率试验结果（n=9）

表2 猫豆中左旋多巴的含量测定

3 小结与讨论

在进行猫豆中左旋多巴的薄层鉴别时，试过环己烷-三氯甲烷-无水乙醇（7∶3∶1）、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）、正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）展开系统，并考查过1μL、2μL、3μL、5μL的点样量。结果以正丁醇-冰醋酸-水（2∶1∶1）为展开系统，硅胶G薄层板，点样量为2μL，预平衡15min，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，所得薄层色谱斑点清晰，分离较好，易判断结果。

根据左旋多巴其可溶于稀酸的性质，以0.1mol/L盐酸为溶液，其紫外最大吸收峰为280nm（0.1mol/L盐酸为溶剂），故以此作为HPLC测定波长。

本实验中测得猫豆含左旋多巴相对较高，而左旋多巴为治疗帕金森病的主要用药，通过制定猫豆的质量标准，规范猫豆的生产、使用，更有效、充分利用资源，为猫豆药材质量标准的制定提供科学的实验依据并奠定临床应用基础。

[1]蔡军,朱兆仪,刘永灌.黑皮类型狗爪豆的化学成分研究[J].植物学报-英文版,1990,32(7):574.

[2]陈其龙,徐美华,董文心.帕金森病治疗药物的临床应用进展[J].世界临床药物,2011,32(6):324-328.