HPLC法测定胆酸止咳片中胆酸的含量

2012-11-01李成网

亚太传统医药 2012年1期

张洁，白娟，李成网

（安徽省医学科学研究院，安徽合肥 230061）

胆酸止咳片是一种由粗胆酸、陈皮、甘草等中药组成的传统中药制剂，临床使用已有多年的历史，具有止咳化痰之功效，用于治感冒引起的咳嗽，疗效显著。关于胆酸的含量测定报道较少［1-3］，且多是用比色法，操作复杂，误差较大。现采用HPLC法测定胆酸含量，简便、快速、重现性好，可作为胆酸止咳片的定量分析方法，报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600高效液相色谱仪；UV996紫外检测器；AD-2型百万分之一电子天平；BP210S型万分之一电子天平；AS3120型超声波清洗器；胆酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100078-200414）；甲醇（色谱纯）；水（重蒸水）；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

采用反向高效液相法测定本品中的胆酸含量［4，5］。色谱柱：Shim Pack CLC ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水-磷酸（38：62：0.1）；检测波长：208nm；柱温：25℃；流速：1.0mL×min-1；进样量：20μL。在此条件下进行样品分析，供试品溶液中的胆酸与其他杂质峰分离良好，保留时间在25min左右，分离度大于1.5。

2.2 线性范围考察

精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成4.105mg／mL的对照品溶液，分别精密吸取1.25、2.50、5.00、7.50mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。依法测定，峰面积积分值分别为：84466、166931、343615、506738、691137。以胆酸峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，得回归方程为 Y＝168277X-4080.6，r＝0.9998。结果表明，胆酸浓度在0.513～4.105mg／mL范围内与峰面积之间呈良好线性关系。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，研细，取约0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率300W，频率50Hz）30min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 干扰试验

取处方中除粗胆酸外的全部药味，按成品工艺及供试品溶液的制备方法制备空白对照品溶液，按正文拟定方法进行测定，结果表明：在胆酸保留时间处，无其他成分干扰。见图1。

图1 胆酸HPLC图谱

2.5 仪器精密度考察

精密吸取同一份供试品溶液（批号：091201），重复进样，结果峰面积积分值依次为：351280、354819、355865、353464、350060，RSD为0.68%。结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察

取同一份供试品溶液（批号091201），分别在制备后0、2、4、6、8h后依法测定胆酸的峰面积，结果峰面积积分值依次为：362473、361279、363010、355794、348026，RSD 为1.77%。结果表明：供试品溶液在8h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同批样品（批号091201），依法平行制备5份供试品溶液，分别进行测定，计算胆酸的含量，结果测得含量分别为61.13mg／片、59.63mg／片、60.37mg／片、59.00mg／片、60.68 mg／片，平均含量为60.16mg／片，RSD为1.41%。结果表明：该方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验

采用加样回收方法，精密称取重现性样品6份，每份0.25g，精密称定，分别置50mL量瓶中，分别精密加入一定量的胆酸对照品，再加甲醇适量（约40mL），超声处理30min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率测定结果

结果表明：正文拟定方法具有良好的回收率。

2.9 样品的测定

取三批样品，分别依法测定，计算胆酸的含量，结果胆酸含量分别为60.16mg／片、57.53mg／片、53.39mg／片。

3 讨论

3.1 测定波长的选择

精密称取胆酸对照品102.63mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（每1mL含胆酸4.105mg），用岛津UV-240可见紫外分光光度计在300～190nm波长范围进行光谱扫描［1］，结果在200nm 和208nm处有最大吸收，由于在200nm处溶剂干扰大，故选择208nm为测定波长。