三七及其制剂中有效成分分析方法的研究进展

刘兰萍，闵光宁

（兰州大学第一医院，甘肃 兰州 730000）

三七及其制剂中有效成分分析方法的研究进展

刘兰萍，闵光宁

（兰州大学第一医院，甘肃 兰州 730000）

本文就近十年如何利用现代分析仪器对三七及其制剂中有效成分分析方法进行概述。

三七；有效成分；分析方法

自20世纪20年代起，人们对三七的化学成分进行了大量研究，三七主要含有皂苷、黄酮、多糖、氨基酸等有效成分。目前，三七的药理活性成分研究主要集中在三七总皂苷（PNS）、三七多糖和氨基酸上。其中皂苷部分是三七发挥活血化瘀功效的物质基础，是三七的主要有效成分。三七总皂苷包括三七皂苷、黄酮苷、槲皮素、槲皮苷、β-谷甾醇和氨基酸等。三七所含皂苷与人参相似，为达玛烷系四环三萜类皂苷，水解后主要得到人参三醇和人参二醇。总皂苷含量可达8%～12%，主要为人参皂苷Rb1、Rg1、Rg2，并含少量 Ra、Rb2、Rd、Re等，另含三七皂苷 R1、R2

等。PNS在耐缺氧、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著优于人参总皂苷，且PNS和部分单体皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好活性[2]。近年来，通过对三七多糖的药理研究发现，三七多糖具有增强免疫功能等活性[3]。从三七中还分离出一种止血活性成分三七素（dencichine，β-N-草酰基L-α-β-二氨基丙酸）。由于三七常用在复方中，利用现代分析仪器，对三七及其制剂的有效成分进行分析，成为评价该类药品质量的重要方法。

1 光谱法

1.1 比色法

一般先用大孔吸附树脂纯化富集PNS，然后利用在冰醋酸溶液中PNS与香荚兰醛-高氯酸（或硫酸）进行呈色反应，以测定三七及其制剂中PNS含量，具体应用见表1。

表1 比色法测定三七总皂苷

黄桂宽等[10]还分别用香草醛-高氯酸法、苯酚-硫酸法、苯芴酮-CTMAB法测定了三七茎叶中的总皂苷、多糖和微量元素锗的含量。人参皂苷分子中的糖基能被浓硫酸氧化脱水成糠醛衍生物，以浓硫酸作参比液，可用紫外分光光度法测定PNS的含量[11]。

1.2 导数光谱法

导数光谱相比零阶光谱能提供更多的信息，提高谱带的分辨能力，这在定性分析中十分有用。叶基荣等[12]采用一阶导数光谱法，对中成药片仔癀进行分析研究，指出在300 nm波长处的特征负峰归属三七。

光谱法一般用于测定PNS的含量。三七的皂苷成分紫外吸收为末端吸收，与一些常用的有机溶剂的截止波长接近，影响测定，故利用皂苷的某些显色反应，产生颜色后在可见光区运用比色法测定PNS的含量。此法反应灵敏，简便易操作。一般采用单体皂苷或皂苷元作为对照品，再根据它们与总皂苷的换算系数求出总皂苷的含量。由于皂苷显色反应产生的颜色受溶液浓度、反应温度、反应时间等因素的影响，所以需注意反应条件的控制。此外，皂苷类成分的颜色反应专属性较差，且中草药及制剂中成分复杂，光谱法已难以满足中药分析日益严格的要求。

2 色谱法

2.1 高效液相色谱法（HPLC）

HPLC用于三七及其制剂中单一有效成分的定量测定，分析精准度高，结果准确。HPLC测定三七皂苷，有HPLC-UV法、HPLC-IR法、HPLCELSD法、HPLC-MS法，目前采用HPLC-UV法居多。由于人参皂苷和三七皂苷在紫外区的末端吸收，故只能用低波长检测，检测波长在200～210 nm。

邸峰等[13]采用HPLC-IR法测定了复方丹参片中三七皂苷R1的含量，色谱条件：C18柱（250 mm×4.6 mm）流动相为54%甲醇（磷酸调pH值4），1.0m l·min-1，并采用中性氧化铝柱净化样品，以适应检测器要求。蒸发光散射检测器（ELSD）是一种新型的通用检测器，它对无紫外吸收或为紫外末端吸收的物质有较好的响应，沙东旭等[14]采用HPLC-ELSD测定三七药材中人参皂苷R1、Rg1、Re和Rb1的含量，并取得了满意的效果。王颖等[15]采用LC/MS技术测定了三七药材、中间体及针剂成品的指纹图谱，并比较了三者的相关性，为其鉴别提供了全面、可靠的依据。

HPLC对于结构相似、组成复杂的试样具有很高的分离效能，可在一次进样中同时分离测定几种成分。由于人参皂苷Rg1和三七皂苷R1结构十分相似，两者的分离常成为三七中多种皂苷分析中首要解决的问题。人参皂苷是极性较强的化合物，氨基键合相为一种极性固定相，NH2柱对它们的分离效果优于C18柱。但NH2柱的稳定性、重复性及使用寿命均不如C18柱，若进行梯度洗脱，选用C18柱可获得较好的效果。

2.2 超临界色谱法

超临界色谱法可用于皂苷元的测定，采用SB-Cyanopropy-50石英毛细管柱，柱温90℃，FID检测器，流动相为 CO2，分流进样，起始压力为 10.0 MPa，程升 1.01 MPa/min，至 35.5 MPa，以胆固醇为内标物，对三七及云南白药中的人参二醇和人参三醇进行含量测定，SFC-FID法具有很高的灵敏度，人参二醇检测限为3.97×10-12，人参三醇为 4.17×10-12。

2.3 气相色谱法（GC）

GC多用于测定三七中的挥发性成分。高锐红等[16]采用SE-54-30 m毛细管柱，柱温80～200℃，程序升温3℃/min；10%DEGS/CHRD填充柱，柱温180℃，分析了三七种仁油中脂肪酸的组成及其相对含量。胥聪等[17]运用GC-MS-DC联用和标准图谱，采用 SE-54石英毛细管柱，柱温80～200℃（3℃/min），柱前压力6 Pa/寸2，载气H e，气化室温度230℃，质谱电离方式EI，电子源温度170℃，倍增电压1 200 V，电离电压70 eV，发射电流0.25mA，扫描范围25～350，扫描速度1次／米，对三七花挥发油进行了分析，鉴定了37种成分，并测定了相对含量。

2.4 薄层色谱法（TLC）

TLC可用于三七及其制剂中药材的鉴别或单一有效成分的测定，其操作简便，分离效果好，结果准确。由于皂苷在正丁醇中具有较好的溶解性，故展开剂一般选用含水饱和的正丁醇的混合溶剂系统。常用硅胶G薄层板。一般用10%硫酸乙醇作为显色剂。

另外，章观德等[18]利用三七素与荧光胺试剂反应产生强烈的荧光，采用高效薄层层析，层析前衍生化，以乙醇－丙醇－水－浓氨水（2.5∶1.7∶0.8∶0.5）为展开剂，激发波长为395 nm，选择二号滤光片为发射滤光片，用直线扫描法测定了生药三七中三七素的含量。检测限为4 ng。TLC操作简单，仪器使用较广，已成为目前中药及其制剂中皂苷类分析的主要方法。随着薄层扫描仪的普及，薄层扫描法已成为薄层定量的首选。但TLC作为一种开放式的色谱体系，其色谱行为极易受外界因素的影响，其精度比起HPLC则有所不及。

2.5 胶束电动毛细管电泳法

毛细管电泳在复杂基质的运行成本和分离能力上具有一定的优势，比较适用于大批量药材的成分分析，利于对三七药材的质量控制。巴春丹等[19]测定三七药材中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量。

3 其他分析方法

（1）鲁歧等[20]将三七水提液，采用氨基酸分析仪对其进行含量测定。

（2）崔秀明等[21]采用苯酚-硫酸比色法测定了多糖含量。三七在不同的采收季节，三七多糖类成分的含量有明显差异，3～11月，三七多糖含量呈波浪型规律变化，1年中的4、8、11月含量高，3、7、9月含量低。不同规格的三七，多糖含量有一定差异，最高的是20头，为0.140%；最低的是160头，仅有0.040%；相差近4倍。产地不同，三七多糖含量会有明显的差异，最高的是砚山产为0.180%，与最低的广西靖西产（0.011%）相差16倍多。

4 讨论

三七及其制剂中有效成分的分析，主要以三七皂苷中的某一种或两种皂苷及三七多糖作为质量评价依据。

三七中皂苷成分较多，结构相似，进行分离时，以HPLC为首选。但由于三七皂苷的紫外吸收为末端吸收，而HPLC最常配用的是紫外检测器，这在很大程度上限制了对流动相的选择，不利于对三七皂苷成分的分离测定；且紫外吸收较弱，这也对检测的灵敏度造成一定的影响。同时分析多种皂苷成分时常用到梯度洗脱，但高效液相低波长检测在梯度洗脱时出现的基线漂移是分析工作中的一大难题。

在HLPC中，与之联用的检测器有蒸发光散射检测器、示差检测器（RI）及质谱（MS）、ELSD。前两者较多应用于人参及制剂中皂苷分析，但少见有在三七分析中的报道。RI灵敏度低，基线受温度影响大，并与梯度洗脱不相容；MS灵敏度高，且能提供分子量、糖苷配基等信息，这在药物代谢及药代动力学研究中有独特的优势，但设备昂贵，运行成本高，相比之下，作为常规质控手段，ELSD则以其高效、方便、可靠的特点，在三七皂苷分析中应用更广。目前，已有人用HPLC-ELSD法对多种中草药的皂苷成分进行分离分析，并收得了很好的效果，进一步推动了HPLC在皂苷分析中的应用。随着分析仪器技术的进步，对三七化学成分的测定研究将会深入开展。

5 结语

建立明确的指纹图谱，是保证中药质量的有效方法。对三七皂苷指纹图谱，要坚持两个基准：一是要以原料（根茎）本身成分含量比例为基准，来确定提取物中各组分含量比例，解决人参皂苷Rg1和Rb1二者比例倒置的问题；二是要确定代表性特征组分三七皂苷R1的核心基准地位，提高含量限量，并以其含量为基准来控制其余组分含量限量范围。

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R284．1

A

1671-1246（2012）09-0109-03三七又名田七、金不换、参三七，是云南特产中药材，来源于五加科人参属植物Panaxnotoginseng（Burk.）F.H.Chen的根茎，以干燥的根入药。主产于云南省文山州，具有散瘀止血、消肿定痛的功效[1]，是我国名贵的中药材，被誉为血症良药、伤科要药。