慢性乙型病毒性肝炎患者谷胱甘肽水平变化及临床意义

刘旭锦

随着对氧化损伤在慢性乙型病毒性肝炎中作用认识的明确，许多自由基清除剂应时而生，并已经用于临床，如还原型谷胱甘肽制剂。本实验通过检测慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者血清谷胱甘肽抗氧化系统的浓度，探讨相应制剂在CHB患者应用的合理性，同时评价临床患者应用还原型谷胱甘肽（古拉定）后肝功恢复情况，以指导、协助CHB的临床治疗。

1 资料和方法

1.1 研究对象 33例均为2011-12～2012-04在山东大学齐鲁医院肝病科住院和门诊治疗的CHB患者。符合2000年第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准[1]。所选患者均未患有其它系统疾病。年龄18～55岁，平均（37±9.2）岁。其中男18例，女15例。ALT异常者20例，占60.6%，平均水平为（172.7±100.3）U/L；ALT正常者13例占39.4%，平均水平 （29.7±8.7）U/L。HBeAg阳性者 23例占69.7%，HBeAg阴性者10例占 30.3%。血清HBV DNA阳性者22例占 66.7%，平均值（4±7.4）×106copy/ml。

随机选取2012-04住院CHB肝功异常患者30例，ALT 平均水平为（361.9±215.3）U/L，AST 平均水平为（160.8±104.5） U/L，分为 2 组，15 例/组，分别给予古拉定1.2 g/d静脉滴注联合甘利欣150 mg/d静脉滴注治疗，及单用甘利欣150 mg/d静脉滴注治疗，用药7 d后复测肝功转氨酶水平。

正常对照组（健康志愿者）6名，男、女各3名；年龄22～38岁，平均（29.7±5.8）岁。均为身体健康者，未患有其它系统疾病。正常对照组均进行乙肝五项定量、HBV DNA 定量、ALT、AST、BIL、白蛋白、球蛋白等血清学、病毒学、生化学检查。血清免疫学检查均证实无甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎病毒、巨细胞病毒感染证据，肝功能检查均为正常。

1.2 方法 血清谷胱甘肽（GSH）测定均采用化学比色法，测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所第一分所，具体步骤按说明书严格执行。患者及健康对照组肝功能、ALT、AST、HBeAg由山东大学齐鲁医院检验科生化室检测。HBV DNA由山东大学齐鲁医院基因室检测。

1.3 统计学方法 各组检测数据采用SPSS10.0统计分析软件处理，各组处理数据结果用均数±标准差（±s）表示，用t检验分析各组各指标的差异。用直线相关分析分析ALT、HBV DNA与各指标之间的关系。

2 结 果

CHB 患者组 GSH（275.79±77.92）mg/L；健康对照组GSH （330.71±50.15）mg/L。与健康对照组相比，CHB患者组GSH浓度均明显降低 （图1，P=0.015）。在CHB患者中，GSH浓度与ALT水平呈显著负相关（GSH-ALT r=-0.28，P=0.025，图2）。HBV DNA 阴性组 GSH （290.90±82.99） mg/L，HBV DNA阳性组 GSH（259.16±67.94）mg/L，组间无统计学差异（P=0.067）。

图1 两组GSH水平

图2 GHB患者的ALT与GSH的相关性分析

古拉定联合甘利欣治疗组患者治疗前ALT平均水平为（398.3±153.7） U/L，AST 平均水平为（208±86.0）U/L，治疗后 ALT 平均水平为（100.1±53.2）U/L，AST 平均水平为（70.8±32.7）U/L；用甘利欣治疗组患者治疗前ALT平均水平为（325.6±263.7）U/L，AST 平均水平为（134.5±115.0）U/L，治疗后 ALT 平均水平为 （178.2±154.4） U/L，AST 平均水平为（62.6±46.4）U/L；古拉定联合甘利欣治疗组患者肝功恢复水平优于甘利欣治疗组 （ALT P=0.002 AST P=0.033）。

3 讨 论

氧自由基参与机体的细胞分化生长、免疫及机体的防御功能（如白细胞杀菌、杀死肿瘤细胞等），发挥重要作用[2-4]，同时参与了很多疾病的发生，包括动脉粥样硬化、癌症、自身免疫性疾病等。研究证实，CHB的发病机制中也有氧化损伤的参与。既往研究指标多为丙二醛、黄嘌呤氧化酶等，通过相应指标的变化，推测氧化损伤的状态，而临床中，多应用还原型谷胱甘肽药物治疗，本试验直接测定CHB患者的GSH水平，明确还原型谷胱甘肽应用的合理性，及监测应用古拉定患者肝功恢复情况。

GSH是目前研究最多的抗氧化酶之一，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它的辅助因子受氧化损伤，最近还证明GSH也参与使维生素E恢复到还原状态的作用，GSH水平的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要指标。

氧化损伤是氧自由基产生过多，和（或）抗氧化酶产生不足或过多耗竭，因此GSH水平也反映出机体的氧化还原状态。通过测量血清中的GSH含量，即可间接地反映出肝脏中的氧化损伤状态和炎症损伤状态。

在本文中，CHB患者组的GSH显著低于健康对照组，尤其ALT异常的患者。Demirdag等[5]对80例CHB的研究中发现CHB患者组氧化损伤产物丙二醛较健康对照组显著增高，且与ALT相关，与本文结果基本相符。

在研究中，GSH水平与HBV DNA无关，分析其由于GSH主要与肝组织炎症损伤有关，而肝组织的炎症损伤与患者自身的病毒载量关系不大。Ruhl等[6]于2003年报道的一个有13 605名入组的大规模试验中指出未感染病毒性肝炎，仅抗氧化酶下降即可加速或导致肝脏的损伤，也与本文结果相符。在已有的文献中，关于氧化损伤和HBV DNA相关性的研究较少，且结果不尽相同，不仅如此，CHB患者的氧化损伤相关酶的结果也不相同，如Saeki等[7]认为CHB患者的过氧化氢酶较健康对照组升高，而Demirdag等[8]认为CHB患者的过氧化氢酶较健康对照组降低，推测可能与参与试验的CHB患者的HBV基因型不同有关，氧化损伤和HBV DNA的关系还需进一步研究。

Melhem等[9]的研究提示，抗氧化损伤制剂和抗病毒药物联合应用，可以提高慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗的总体反应率。对于CHB患者，在抗病毒治疗的基础上适当辅以抗氧化治疗是否能够增加抗病毒治疗效果，尚需进一步研究。

本文结果反映出CHB患者GSH过度消耗，存在氧化损伤现象，ALT水平可间接反应机体氧化损伤状态。通过本实验看出，CHB患者应用还原型谷胱甘肽药物治疗有据可依，在实际临床应用中，还原型谷胱甘肽可促进肝功恢复。

[1]中华人民共和国卫生部.病毒性肝炎防治方案[J].中华传染病杂志，2001，19（1）：56-62.

[2]Chopra S,Wallace H.Induction of spermidine/spermine N1-acetyl transferase in human cancer cells in response to increased production of reactive oxygen species[J].Biochem Pharmacol,1998,55(1):1119-23.

[3]Czene S,Tiback M,Harms-Ringdahl M.pH dependant DNA cleavage in permeabilised human fibroblasts[J].Biochem J,1997,323(3):337-41.

[4]Wojtaszek P.Oxidative burst:an early plant response to pathogen infection[J].Biochem J,1997,322(6):681-92.

[5]Demirdag K,Yilmaz S,Ozdarendeli A,et al.Levels of plasma malondialdehyde and erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients with chronic hepatitis B[J].Clin Chem Lab Med,2000,38（12）:1277-81.

[6]Ruhl CE,Everhart JE.Relation of elevated serum alanine aminotransferase activity with iron and antioxidant levels in the United States[J].Hepatogastroenterology,2003,50（51）:766-70.

[7]Saeki T,Ichiba M,Tanabe N,et al.Expression of oxidative stress-related molecules in circulating leukocytes and urine in patients with chronic viral hepatitis[J].Free Radic Res,2003,37（7）:781-5.

[8]Demirdag K,Yilmaz S,Ozdarendeli A,et al.Levels of plasma malondialdehyde and erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients with chronic hepatitis B[J].Clin Chem Lab Med,2000,38（12）:1277-81.

[9]Melhem A,Stern M,Shibolet O,et al.Treatment of chronic hepatitis C virus infection via antioxidants:results of a phase.clinical trial[J].J Clin Gastroenterol,2005,39(7):737-742.