裂环异落叶松脂酚二葡萄糖苷对睾酮诱导的小鼠前列腺增生的抑制作用

李高文 张 玲 万 勇 于纪棉 (宁波卫生职业技术学院药理教研室，浙江 宁波 3500)

目前认为良性前列腺增生症(BPH)主要是由于体内雄/雌激素失调，前列腺细胞增殖动力学改变而引起〔1〕。裂环异落叶松脂酚二葡萄糖苷(SDG)为植物雌激素，具有雌激素样和抗雌激素样双重活性〔2〕。SDG具有抑制大鼠前列腺增生的作用，其具体机制与SDG提高机体抗氧化能力、清除自由基等有关〔3〕，而其对前列腺增生小鼠体内的雄、雌激素水平是否有影响未见报道。本文以丙酸睾酮诱发小鼠BPH模型，观察了SDG对小鼠前列腺指数、血清前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP)、前列腺组织中睾酮(T)和雌二醇(E2)水平的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 ICR雄性小鼠60只，体重18～20 g，普通级，购自温州医学院实验动物中心〔实验动物许可证号:sysxk(浙)2005-006〕，各组动物自由取食、饮水，测试10 h前禁水禁食。

1.2 试剂与器材 SDG(含量≥90%)由北京大学药学院杨东辉教授提供，用双蒸水溶解。丙酸睾酮注射液(上海通用药业股份有限公司生产，批号070102);癃闭舒胶囊(石家庄科迪药业有限公司，批准文号:国药准字Z10960007);PAP测试盒购自南京建成生物工程研究所;T和E2测定试剂盒均购自北京北方生物技术研究所。电子天平(BS110S，北京赛多斯仪器公司);可见分光光度计(722N，上海精密科学仪器有限公司);光学显微镜(Leica DFC280);离心机(LDZ5-2，北京医用离心机厂生产);轮转式切片机(KD202C，浙江金华科迪仪器设备有限公司);550型酶标仪(美国Bio-Rad公司)。

1.3 动物模型制作及给药方法 动物模型制备参考文献〔4〕进行，将小鼠随机分为正常对照组、模型组、SDG 40、80、160 mg/kg剂量组和30 mg/kg癃闭舒组;癃闭舒组给药剂量按照文献〔4〕折算成小鼠用剂量。除正常对照组外，其余小鼠每日按5 mg/kg皮下注射丙酸睾酮造模，同时灌胃给予SDG或癃闭舒胶囊混悬液1次，连续21 d。最后一次给药24 h后，将各组动物称重后处死，摘取前列腺称湿重，计算前列腺指数，前列腺指数=前列腺湿重(mg)/小鼠体重(g)。

1.4 前列腺病理学检查 10%甲醛溶液固定前列腺组织，经脱水、透明、石蜡包埋后切片，HE染色，在光镜下观察小鼠前列腺组织结构变化，照相。

1.5 血清PAP测定 断头取血，室温放置20 min后离心，1 000 r/min，10 min，分离血清，－20℃冻存，严格按照试剂盒使用说明操作。

1.6 前列腺组织中T及E2含量测定 取部分新鲜前列腺组织匀浆，采用酶联免疫吸附法测定T和E2水平，酶标仪下读数，严格按照试剂盒说明操作。

1.7 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包，数据以表示。单因素方差分析，组间差异采用t检验。

2 结果

2.1 SDG对小鼠前列腺湿重、指数以及血清PAP含量的影响如表1所示，模型组与正常对照组小鼠相比，小鼠前列腺湿重、指数和血清PAP含量均显著增加(P＜0.01)，SDG 80和160 mg/kg组以及癃闭舒组不同程度地逆转上述变化，且有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。

2.2 SDG对小鼠前列腺组织T及E2水平的影响 由表2可见，与正常对照组相比，模型组大鼠前列腺组织中 T(P＜0.001)和E2(P＜0.001)水平显著升高，使大鼠前列腺组织在外源性雄激素作用下出现增生。与模型组比较，80 mg/kg和160 mg/kg剂量的SDG组及癃闭舒组均可显著降低模型大鼠前列腺中 T(P＜0.05或 P＜0.01)和 E2(P＜0.01或 P＜0.001)水平。

2.3 SDG对小鼠前列腺组织病理学改变的影响 见图1，镜下见正常对照组腺体排列清楚，腺腔无扩张，腺上皮单层柱状，可见少许基底细胞及明显基膜，腺体间可见较明显的间质。模型组腺体排列密集，部分腺腔扩张、变大，部分区域呈假复层，腺上皮变厚呈乳头状突向腔内，给药后腺上皮细胞不同程度减小，复层和乳头状增生不明显。

图1 SDG对小鼠前列腺组织病理学改变的影响(HE，×40)

表1 SDG对小鼠前列腺湿重、指数以及血清PAP含量的影响(n=10，)

表1 SDG对小鼠前列腺湿重、指数以及血清PAP含量的影响(n=10，)

与正常对照组比较:1)P＜0.01;与模型组比:2)P＜0.05，3)P＜0.01

组别 剂量(mg/kg)前列腺湿重(mg)前列腺指数(mg/g)PAP(U/L)正常对照组22.9±4.4 0.69±0.14 1.21±0.72模型组 31.4±5.01) 0.98±0.161)3.65±1.971)SDG组 40 30.5±4.9 0.86±0.16 2.54±0.69 80 25.3±4.23) 0.77±0.143)1.49±1.543)160 24.9±4.53) 0.76±0.133)1.44±0.863)癃闭舒组 30 26.8±2.42) 0.76±0.053)1.43±1.653)

表2 SDG对小鼠前列腺中T和E2水平的影响(n=10，)

表2 SDG对小鼠前列腺中T和E2水平的影响(n=10，)

与正常对照组比较:1)P＜0.001;与模型组比较:2)P＜0.05，3)P＜0.01，4)P ＜0.001

组别 剂量(mg/kg) T(ng/ml) E2(pg/ml)正常对照组0.12±0.02 0.58±0.04模型组 1.52±0.261) 0.98±0.031)SDG组 40 1.45±0.2 0.89±0.07 80 1.11±0.12) 0.75±0.032)160 0.79±0.13) 0.52±0.044)癃闭舒组 0.16 0.68±0.044) 0.54±0.044)

3 讨论

贾彬等〔5〕发现，外源性睾酮可以显著增加小鼠前列腺指数，本实验也发现SDG能显著降低小鼠体内主要雄激素之一的睾酮含量，而PAP的合成和分泌也依赖雄激素的存在。此外，研究发现体内E2水平与前列腺体积呈正相关，即E2水平越高，前列腺体积越大〔6〕。

目前关于BPH的病因中，性激素平衡失调的内分泌学说受到公认〔1〕，因此抗雄激素药和雌激素拟似药广泛应用于BPH的治疗。近年来流行病学调查和实验研究表明植物雌激素对BPH有防治作用〔7〕，然而在动物实验中发现，雌激素的浓度与前列腺基质细胞生长呈倒U形关系，即在一定浓度范围，雌激素刺激基质细胞增殖，否则表现为抑制作用〔8〕。相应地有研究者也认为高浓度雌激素具有促进前列腺增生的作用〔9，10〕。段晓慧等〔11〕调查了38例老年BPH患者血清性相关激素的变化，发现这些患者体内E2水平呈高水平状态，经药物治疗后体内E2水平下降，本实验与其有相似结果。而SDG作为一种植物雌激素，没有发挥其潜在的雌激素样作用，这可能与小鼠体内较高的雌激素环境有关，还可能通过对下丘脑-垂体-性腺轴产生负反馈抑制，降低雌激素的浓度。总之，本实验显示SDG可能通过降低T和E2水平，调节紊乱的雌、雄激素水平，达到拮抗小鼠前列腺增生的作用。而其改善BPH的途径是否涉及其他机制及其临床效果还有待进一步研究。

1 谷欣权，马庆杰，孔祥波.前列腺增生症的现代治疗进展〔J〕.中国老年学杂志，2001;21(6):475-7.

2 Wang LQ.Mammalian phytoestrogens:enterodiol and enterolactone〔J〕.J Chromatography B，2002;777(1-2):289-309.

3 沈 楠，任 旷，王艳春，等.亚麻籽木脂素对大鼠前列腺增生的抑制作用及其机制〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2011;2(37):288-91.

4 徐叔云.药理实验方法学〔M〕.第3版.北京:人民卫生出版社，2002:1553.

5 贾 彬，黎 玮，剧亚崇，等.雄激素对小鼠前列腺细胞增殖凋亡及相关增殖因子的影响〔J〕.中国老年学杂志，2008;28(12):1079-80.

6 杜传策，宋乐明，胡 敏，等.前列腺体积与血清雌二醇和睾酮浓度及其比例关系的研究〔J〕.中国全科医学，2011;14(1B):159-63.

7 Brossner C，Petritsch K，Fink K，et al.Phytoestrogen tissue levels in benign prostatic hyperplasia and prostate cancer and their association with prostatic diseases〔J〕.Urology，2004;64(4):707-11.

8 Vom Saal FS，Timms BG，Montano MM，et al.Prostate enlargement in mice due to fetal exposure to low doses of estradiol or diethylstilbestrol and opposite effects at high doses〔J〕.Proc Natl Acad Sci，1997;94(5):2056-61.

9 吴建辉，裴晓丹，曹 霖.雌二醇对丙酸睾酮诱导去势大鼠前列腺增生的影响〔J〕.中国药理学与毒理学杂志，2005;19(5):363-7.

10 朱 刚，王建业.雌激素致前列腺增生作用〔J〕.中华泌尿外科杂志，1998;19(7):444-6.

11 段晓慧，潘晓明，肖永新，等.老年前列腺增生症血清性相关激素(FSH、LH、E2、T、PRL、P、T/E2)变化观察〔J〕. 中国性科学，2009;18(1):10-3.