乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测在乙型肝炎诊疗中的临床价值

李满库 王 莉 牟红香 辛 华 刘丽秋 胡晓欣 王 琳

(佳木斯大学附属第一医院检验科，黑龙江 佳木斯 154002)

目前，临床上主要以肝功能改善、乙型肝炎(乙肝)病毒e抗原(HBeAg)血清转阴和乙肝病毒(HBV)DNA转阴作为判断HBV复制与抗病毒疗效的监测指标。检测乙肝病毒抗原(HBVAg)血清标志物只能反映病毒入侵人体的信息，不能直接反映HBV在病患体内的复制情况，也不能作为患者是否具有传染性的直接证据;而定量检测HBV DNA含量是衡量HBV传染性最精确的指标，是确定HBV感染不同复制状态的有效检查手段。研究表明，HBV大蛋白(LP)的前S蛋白具有跨膜构象拓扑结构，与HBV的感染、复制及预后密切相关〔1，2〕。本文研究乙肝患者血清HBV LP、HBeAg和HBV DNA水平的相关性，探讨HBV LP与乙肝病毒复制的关系及其临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2010年1月至2011年1月在我院门诊和住院部诊治的乙肝患者305例，其中男165例，女140例，年龄15～65〔平均(37.8±21.6)〕岁。均符合2000年中华医学会修订的“病毒性肝炎防治方案”中的病毒性肝炎诊断标准，且无其他嗜肝病毒合并感染，所有患者采集血清标本离心吸取血清于－80℃冰箱保存备用。

1.2 方法 乙肝血清标志物HBeAg酶标试剂盒购自上海科华股份有限公司;HBV LP单克隆抗体酶标试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供。HBeAg、HBV LP检测采用ELISA法，采用针对构象型前S抗原的单克隆抗体，Cutoff值为0.105;HBV DNA定量检测采用实时荧光定量PCR方法，检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，采用美国ABI公司的7300自动实时荧光PCR分析仪。＞5×102拷贝/ml为HBV DNA阳性，严格按试剂说明书操作。酶标法采用北京普朗新技术有限公司的DNM-9606型酶标仪测定;HBV LP临界值=阴性对照孔OD均值×2.1(阴性对照孔OD平均值低于0.05者按0.05计算)。

1.3 统计学方法 应用SPSS11.0统计软件进行分析，计量资料用±s表示，计数资料用率表示。率的比较采用χ2检验，相关性检验采用线性相关分析。

2 结果

2.1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平的关系 178例HBV LP、HBV DNA同为阳性的血清标本中，HBV LP含量(OD值)和HBV DNA拷贝数对数值之间呈现良好的正相关关系，相关分析结果r=0.354。见表1。

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之间的关系(±s)

表1 血清HBV DNA水平和HBV LP水平之间的关系(±s)

1)13例血清标本HBV DNA均为阳性(＞5×102拷贝/ml)

HBV DNA拷贝数n HBV LP阳性例数(n)阳性率(%) OD 均值102 131)7 53.85 0.328±0.20 103 45 26 57.78 0.404±0.201 104 80 70 87.5 0.524±0.311 105 45 44 97.78 0.675±0.367 106 21 21 100.00 0.882±0.402 10710 10 100.00 1.096±0.523

2.2 HBV LP、HBV PNA、HBeAg阳性率 305例HBV感染者血清中HBV LP和HBV DNA的阳性率分别73.44%(224/305)和70.16%(214/305)，两者检出一致率为71.25%，两者间差异无统计学意义(P＞0.05)。HBeAg阳性156例，阳性率51.15%。

2.3 HBeAg不同模式中HBV LP和HBV DNA的阳性检出率HBe Ag阳性156例中，HBV LP和HBV DNA阳性检出率分别是90.38%(141例)和86.54%(135例);HBeAg阴性149例中HBV LP和HBV DNA阳性检出率分别是55.70%(83例)和53.02%(79例)，两者间差异均无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 HBV DNA阳性血清中HBV LP和HbeAg阳性率比较在214例HBV DNA阳性血清中，HBV LP的阳性率是83.18%(178/214)，明显高于HBeAg的阳性率〔49.06%(105/214)〕差异有统计学意义(χ2=66.23，P ＜0.01)。

3 讨论

HBV S基因编码合成的HBV外膜蛋白由3种蛋白组成，包括主蛋白(HBsAg)，中蛋白(HBsAg和PreS2)和大蛋白即LHBs(HBsAg、PreS1，和PreS2)。HBV LP在病毒进入时作为受体蛋白起作用;在病毒组装时，则基质类似蛋白，同时还行使调节功能。Bruns等〔3〕通过发现鸭易感病毒血清的感染性不仅依赖于具有感染性的病毒颗粒(Dand颗粒)的多少，而且还依赖于缺乏核酸的亚病毒颗粒的数量;亚病毒颗粒在HBV感染过程中，能显著增强细胞内的病毒复制和基因表达，而这种增强作用是由HBV LP前S区反式激活作用触发的。慢性HBV感染患者体内HBV LP持续过量表达，转录反式激活病毒的启动元件与病毒复制密切相关，因此检测HBV LP对于反映病毒持续复制、预后有重要的临床意义。

HBV DNA定量检测是直接对HBV的遗传物质DNA进行基因扩增，是病毒复制存在的最早期、最灵敏、最可靠的指标。但由于DNA的检测条件特殊，对于不具备HBV DNA检测条件的基层医院无法开展，而HBV LP的检测不需要特殊的设备，适合各级医院开展。

本文中 HBV LP的阳性率与孙颖等〔4〕报道的阳性率(79.4%)相近，ELISA检测HBV LP浓度与HBV DNA含量(拷贝数对数)具有良好的正相关性，表明乙肝患者体内HBV LP与病毒复制密切相关，提示检测HBV LP能准确反映患者体内病毒复制情况，可以作为判断HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后的重要参考指标，具有较好的临床应用价值;但HBV LP能否完全或基本替代HBV DNA的检测，则有待进一步的探讨。

HBeAg是HBV感染与复制重要的血清学指标，反映机体的免疫状态〔5〕。HBsAg转阴是急性乙肝有效治疗的监测指标，但由于HBV基因前C区或CP区发生变异可以导致其合成障碍，而HBV仍然活跃复制，故在较多的HBeAg阴性慢性乙肝患者中仍然呈现HBV DAN检测阳性的结果〔6〕，进而其转阴并不能排除病毒复制和传染性。本研究HBV LP检出率高于HBV DNA的检出率，与乐爱平等〔7〕的研究一致。说明HBV LP的检测能提早诊断出HBeAg阴性慢性乙肝患者体内HBV复制情况，有利于及时治疗，从而有效避免肝硬化、肝癌的发生。

1 Chai N，Gudima S，Chang J，et al.Immunoadhesins containing pre-S domains of hepatitis B virus large envelope protein are secreted and inhibit virus infection〔J〕.J Virol，2007;81(10):4912-8.

2 Patient R，Hourioux C，Sizaret PY，et al.Hepatitis B virus subviral envelope particle morphogenesis and intracellular trafficking〔J〕.J Virol，2007;81(8):3842-51.

3 Bruns M，Miska S，Chassot S，et al.Enhancement of hepatitis B virus infection by noninfectious subviral particles〔J〕.J Virol，1998;72(2):1462-8.

4 孙 颖，辛绍杰，雷 厉，等.乙肝病毒外膜大蛋白检测对判定HBV DNA复制的意义〔J〕.世界华人消化杂志，2006;14(3):354-7.

5 Yamada T，Iwabuki H，Kanno T，et al.Physicochemical and immunological characterization of hepatitis B virus envelope particles exclusively consessting of the entire L(pre S1+pre-S2+S)protein〔J〕.Vaccine，2001;19(23-4):3154-63.

6 Hamasaki K，Nakata K，Nagayama Y，et al.Changes in the prevalence of HBeAg-negative mutant hepatitis B virus during the course of chronic hepatitis B〔J〕.Hepatology，1994;20(1):8-14.

7 乐爱平，鞠北华，胡庆宏.HBV preS1-Ag、HBV PreS2-Ag、HBV-DNA、HBV M的相关性分析及其意义〔J〕.临床肝胆病杂志，2003;19:344-6.