急性白血病患者血清及脑脊液基质细胞衍生因子－1α的表达水平及意义

王树辉 (贵州省人民医院检验科，贵州 贵阳 550002)

基质细胞衍生因子1(SDF-1)具有细胞生长因子和趋化因子活性，通过细胞因子的网络系统在免疫和炎症反应、血管和神经发育、造血的调控、肿瘤的转归等多种生理、病理过程中发挥重要的作用〔1〕。多种血液系统恶性肿瘤的细胞株中存在SDF-1/CXCR4的过表达，而关于SDF-1的高表达是否可以作为急性白血病特别是中枢神经系统白血病(CNSL)相关标志物的研究还比较少。有研究表明，SDF-1与其受体CXCR4相互作用，可促进急性白血病细胞的趋化增殖及迁移，提高急性白血病细胞对化疗药物的耐受〔2，3〕。本实验通过检验急性白血病患者血清及脑脊液中SDF-1α的表达水平，拟从不同角度寻找可能有效的治疗急性白血病患者的策略，为临床用药提供可靠的理论基础。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 一般资料 纳入贵州省人民医院2010年3月至2012年6月诊断的急性白血病患者36例，其中男20例，女16例;年龄48～80岁，平均62岁。同时纳入同期普外科患者14例作为对照组，年龄46～78岁，平均60岁。

1.1.2 诊断标准 按照WHO髓系和淋巴肿瘤分类法(2001)MIMC分型的诊断标准和《血液病诊断及疗效标准》确诊〔4〕。其中急性淋巴细胞性白血病(ALL)10例(L1型1例，L2型3例，T-ALL型2例，B-ALL型5例);急性髓系白血病(AML)26例(M2型3例，M3型4例，M4型8例，M5型11例)，其中CNSL 19例，非中枢神经系统白血病(NCNSL)17例。

1.1.3 化疗方案 ALL患者采用VDLP或CODP方案诱导缓解;AML患者采用DA或MA方案诱导缓解，其中M3型采用全反式维A酸、亚砷酸诱导缓解治疗，CNSL患者采用甲氨蝶呤、阿糖胞苷、地塞米松常规鞘内化疗。经过标准化疗方案治疗2个疗程后有26例急性白血病患者完全缓解，其中ALL 6例，AML 20例;未缓解患者10例，其中ALL 4例，AML 6例;CNSL组患者5例脑脊液幼稚细胞转为阴性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 急性白血病患者分别在治疗前及标准化疗方案治疗2个疗程的第6天清晨采集空腹外周静脉血2 ml，20 min后2 500 r/min离心20 min，收集上清液后置于EP管中，于－70℃冰箱保存备用;同时无菌管收集患者脑脊液1 ml保存备用。对照组采集标本处理方法亦同上。

1.2.2 ELISA方法检测患者血液及脑脊液中SDF-1α的表达实验完全按照人SDF-1α ELISA试剂盒的操作步骤进行，最后用酶标仪450 nm波长下检测各孔的A值。然后根据标准品的A值及对应的浓度计算标准曲线的直线回归方程，再根据样品的A值利用回归方程计算出对应的样品浓度。

1.3 统计学分析 采用SPSS12.0软件分析计算，计量数据以±s表示，各均数比较采用t检验。

2 结果

2.1 治疗前后患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较 急性白血病组患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度均明显高于对照组，且ALL组患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度明显高于AML组，差异均有统计学意义(均P＜0.01)。化疗2个疗程后，不论是ALL患者还是AML患者，血清及脑脊液中SDF-1α浓度均明显低于治疗前，差异有统计学意义(均P＜0.01)。见表1。

表1 标准方案化疗2个疗程前后各组血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

表1 标准方案化疗2个疗程前后各组血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

与化疗前比较:1)P＜0.01;与对照组比较:2)P＜0.01;与AML组比较:3)P＜0.01

组别 n 血清 脑脊液ALL组 化疗前 10 2 690.35±202.172)3)3 032.88±326.792)3)化疗后 10 2 034.53±154.651) 2 258.91±206.841)AML组 化疗前 26 2 424.06±311.032) 2 784.20±426.012)化疗后 26 1 569.29±256.441) 1 934.37±306.631)对照组14 1 252.36±257.13 1 360.06±328.98

2.2 急性白血病患者化疗后未缓解与完全缓解患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较 治疗后未缓解组患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度明显高于完全缓解组患者，差异有统计学意义(均P＜0.01)。见表2。

2.3 化疗前及标准方案化疗2个疗程后CNSL组患者与NCNSL组患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较 无论是化疗前还是经标准方案化疗2个疗程后，CNSL组患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度明显高于NCNSL组患者，差异均有统计学意义(均P＜0.01)。见表3。

表2 急性白血病患者化疗后未缓解组与完全缓解组血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

表2 急性白血病患者化疗后未缓解组与完全缓解组血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

与完全缓解组比较:1)P＜0.01

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表3 化疗前及标准方案化疗2个疗程后CNSL及NCNSL患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

表3 化疗前及标准方案化疗2个疗程后CNSL及NCNSL患者血清及脑脊液中SDF-1α浓度比较(ng/L，±s)

与CNSL组比较:1)P＜0.01;与化疗前比较:2)P＜0.01

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3 讨论

SDF-1具有多种特殊化学作用，定位于10号染色体长臂，它的特异性受体CXCR4为G蛋白耦联的七次跨膜受体，定位于人第4号染色体，可在正常造血干/祖细胞、其他多种组织细胞以及包括血液系统肿瘤在内的多种肿瘤细胞上表达。SDF-1/CXCR4表达情况与白血病的发生、发展有着直接的关系。SDF-1/CXCR4表达水平增高使白血病细胞增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，从而促进了白血病的进一步发生、发展〔5〕，因而检测SDF-1/CXCR4表达状况为评估判断急性白血病病人预后及辅助监测病情提供了帮助。CXCR4的配体主要表达于淋巴结、肺、肝及骨髓中，新近研究表明，CXCR4是目前ALL患者细胞表面表达最强的因子受体之一，其配体SDF-1对其有极强的诱导趋化作用，表达SDF-1的骨髓成纤维细胞(BMF)层可趋化B-ALL细胞选择性停留，且趋化能力与CXCR4的表达呈正相关，但是该作用可被β1整合素抑制剂和抗CXCR4抗体抑制〔6，7〕。由此证实SDF-1是B-ALL细胞的强力趋化因子，对其有双向调节作用，参与了ALL细胞在淋巴结和骨髓等器官的浸润过程。多种血液系统恶性肿瘤的细胞株中存在SDF-1/CXCR4的过表达，而关于SDF-1的高表达是否可以作为急性白血病特别是CNSL相关标志物的研究还比较少。曾东风等〔8〕用ELISA法检测了急性白血病患者外周血中SDF-1的含量，结果明显高于正常对照组，尤以ALL为甚，而且发现外周血中SDF-1的表达水平与急性白血病患者的病情变化有一定的相关性。本实验发现急性白血病患者在化疗前及化疗2个疗程后血清及脑脊液中SDF-1α呈高浓度表达，而且在不同类型急性白血病患者之间存在差异。

在今后急性白血病患者的临床治疗上，一个重要方向应是应用新的方法或药物巩固与强化治疗方案，以便更多病例延长缓解期，当然这也可能需要应用更强烈的化疗、更高剂量的放疗，以及生长因子注射、干细胞移植等组织工程技术支持〔9〕。本实验结果显示，ALL及AML治疗效果相当，但AML治疗前的血清及脑脊液SDF-1α水平明显高于ALL，两组年龄差异是否相关还有待于进一步研究。因此，SDF-1α可以作为白血病治疗的新的基因靶点，抑制其在白血病细胞的表达，将在逆转白血病细胞耐药、增加白血病细胞对化疗药物敏感性方面起重要作用。

1 Voermans C，van Heese WP，de Jong I，et al.Migratory behavior of leukemic cells from acute myeloid leukemia patients〔J〕.Eukemia，2002;16(4):649-50.

2 Guang LG，Boskey AL，Zhu W.Regulatory role of stromal cell-derived factor-1 in bone morphogenetic protein-2-induced chondrogenic differentiation in vitro〔J〕.Int J Biochem Cell Biol，2012;44(11):1825-33.

3 Kalinkovich A，Tavor S，Avigdor A.Functional CXCR4-expressing microparticles and SDF-1 correlate with circulating acute myelogenous leukemia cells〔J〕.Cancer Res，2006;66(2):11013-20.

4 张 曦，王占聚，崔为发，等.急性白血病患者血清及脑脊液中SDF-1α的检测及其临床意义〔J〕.当代医学，2011;17(08):48-9.

5 Tavor S，Petit I.Can inhibition of the SDF-1/CXCR4 axis eradicate acute leukemia〔J〕?Semin Cancer Biol，2010;20(3):178-85.

6 Parameswaran R，Yu M，Lim M，et al.Combination of drug therapy in acute lymphoblastic leukemia with a CXCR4 antagonist〔J〕.Leukemia，2011;25(8):1314-23.

7 Spiegel A，Kollet O，Peled A，et al.Unique SDF-l-induced activation of human precursor-B ALL cells as a result of altered CXCR4 expression and signaling〔J〕.Blood，2004;103(8):2900-7.

8 曾东风，孔佩艳，陈幸华，等.SDF-l及其受体CXCR4在急性白血病与淋巴瘤表达的初步研究〔J〕.中国实验血液学杂志，2005;13(1):274-7.

9 许莲蓉，冯江芳，胥显民，等.健康人外周血树突状细胞的体外诱导及其功能分析〔J〕.白血病·淋巴瘤，2011;20(8):482-5.