荷移分光光度法测定脑脉康片中烟酸占替诺的含量

赵桂芝（辽宁医学院，辽宁锦州 121000）

烟酸占替诺是脑脉康制剂中的有效成分，是小动脉平滑肌外周血管扩张剂，适用于治疗脑血管障碍性疾病、冠心病、狭心症等。目前对于烟酸占替诺含量测定分析方法的文献报道很少，《中国药典》2010年版[1]中采用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定。笔者利用烟酸占替诺与红紫素之间的电荷转移反应，即两者在乙醇-水介质中发生荷移反应，形成稳定的1∶1型络合物，再采用分光光度法来测定其含量。此方法与HPLC法相比，反应条件简单、方便快捷，为烟酸占替诺的含量测定提供了新方法，且所得含量结果与文献[1]方法结果一致。

1 仪器与试药

7590型UV-VIS单光束自动扫描分光光度计（山东高密分析仪器厂）；752S紫外分光光度计（上海棱光技术有限公司）；HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）；FA1104N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

脑脉康（锦州黑龙药业有限公司，批号：20090526、20091029，规格：每片100 mg）；烟酸占替诺对照品（锦州制药二厂，批号：20071112，纯度：99.9%）；红紫素（固安恒业精细化工有限公司，批号：20050522）；本试验所用试剂均为分析纯。

2 方法[2]与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 1×10－3mol·L－1红紫素乙醇液：准确称取红紫素0.051 24 g，加入乙醇，充分溶解，定容于200 mL容量瓶中，备用。

2.1.2 1.0 g·L－1烟酸占替诺水溶液：准确称取烟酸占替诺对照品100 mg，加入纯水，充分溶解，定容于100 mL容量瓶中，备用。

2.2 反应原理

电荷转移反应发生在电子给予体和电子接受体之间，烟酸占替诺分子内电子富集，可作为电子给予体，而红紫素是一个很强的平面π电子受体，可作为电子接受体，二者可形成n-π型络合物，发生电荷的转移。应用摩尔比法和等摩尔连续变换法测得红紫素与烟酸占替诺反应生成的荷移络合物的组成比为1∶1。反应过程如图1：

图1 荷移反应式Fig 1 Equation of charge transfer reaction

2.3 检测方法

准确量取1.0 g·L－1烟酸占替诺适量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，加入红紫素乙醇液2.5 mL，用乙醇与水的混合液为溶剂，将反应液稀释至刻度（控制乙醇与水的体积比为8∶2），摇匀，在25℃的水浴中恒温10 min。取出后以流水冷却，以相应的试剂空白（体积比为8∶2的乙醇-水混合液）作参比，用1 cm比色皿在538 nm波长处测吸光度值，测定时间为反应开始后10～60 min内。

2.4 反应条件的选择

2.4.1 吸收光谱。以试剂空白作参比，取红紫素乙醇液与“2.3”项下荷移络合物在分光光度计上扫描，测得荷移络合物的λmax＝538 nm，红紫素的λmax＝485 nm，烟酸占替诺在可见光区没有吸收，故后续试验选定荷移络合物的测定波长为538 nm，详见图2。

图2 紫外吸收光谱图1.红紫素乙醇液；2.荷移络合物Fig 2 UV absorption spectrum1.purpurin alcohol solution；2.charge transfer complexes

2.4.2 反应时间的选择。按照“2.3”项下方法制备1组溶液，分别于反应不同时间（3、5、10、15、20、25、30、40、60、120 min）取反应液测定其吸光度值，结果分别为0.546、0.611、0.624、0.626、0.626、0.627、0.626、0.627、0.630、0.793。显示：反应液的吸光度值在反应开始后的10～60 min内稳定，因此在反应开始的10 min后即可进行吸光度值的测定，控制测定时间在10～60 min内。

2.4.3 反应温度的选择。按照“2.3”项下方法制备7份溶液，其余条件不变，分别将其放入不同温度（15、20、25、30、35、40、45℃）的恒温水浴中恒温10 min，反应完全后取出以流水冷却终止其反应，然后测定其吸光度值，结果分别为0.529、0.633、0.633、0.631、0.605、0.489、0.490。表明当反应温度在 20～30℃时，反应液的吸光度值最高。因此，确定反应的最佳温度为25℃。

2.4.4 试剂用量的选择。在其余反应条件不变的情况下，改变红紫素的用量，分别于100 mg·L－1的烟酸占替诺水溶液中加入不同摩尔浓度（1.0×10－4、2.0×10－4、3.0×10－4、4.0×10－4、5.0×10－4、6.0×10－4mol·L－1）的红紫素乙醇溶液，制备系列反应液，然后测定其吸光度值，结果分别为0.179、0.252、0.299、0.399、0.655、0.648。表明当红紫素的摩尔浓度为 5.0×10－4mol·L－1时，反应进行完全。当试剂用量超过此用量时，由于背景颜色的加深，吸光度值反而随着颜色的加深而略有降低。

2.4.5 溶剂的选择。分别用甲醇、乙醇、异丙醇、三氯甲烷、水与丙酮作溶剂，加入到反应体系中，制备系列反应液，然后测定吸光度值。结果显示，以乙醇与水混合液作溶剂，反应液的吸光度值高，且通过进一步的试验证明，混合液中乙醇与水的体积比为8∶2时，此反应体系的吸光度值最高，故选用乙醇与水体积比为8∶2的混合液作溶剂。因烟酸占替诺易溶于水，反应体系为水溶液的应调节酸碱度，但红紫素加入酸碱后即变色，所以整个反应体系尽管用水作溶剂，也无须调节酸碱度。

2.5 方法的重复性

按“2.3”项下方法制备6份平行溶液（浓度为100 mg·L－1），于试验确定的最佳条件下进行反应。结果，RSD＝0.98%（n＝6），表明方法的重复性良好。

2.6 比尔定律线性范围

按上述试验确定的条件进行反应，分别向一系列红紫素乙醇液中加入不同浓度（20、40、60、80、100、120、140、160、180、200 mg·L－1）的烟酸占替诺水溶液，测定其吸光度（y）值。结果，烟酸占替诺检测浓度（c）在20～140 mg·L－1范围内与吸光度呈线性关系，其回归方程为y＝2.101 1c+0.049 8（r＝0.998 9）。表观摩尔吸光系数为2.46×103L·mol－1·cm－1，桑德尔灵敏度为0.176 7 μg·cm－2，此数值表明此反应灵敏度较高。

2.7 干扰试验

在上述条件下，考察了药物制剂中常见辅料对烟酸占替诺测定的干扰情况。制备6份反应液，分别向反应液中加入相当于烟酸占替诺含量1 500倍量的萄葡糖、1 000倍量的蔗糖、1 000倍量的谷氨酸、1 000倍量的乳糖、50倍量的淀粉、20倍量的糊精等辅料，然后测定其吸光度值，结果显示各反应液吸光度值基本不变，说明上述常见药物辅料对主药测定不造成干扰。

2.8 回收率试验

按照检测方法，取已测得实际含量的适量样品6份置于5 mL比色管中，制备反应溶液，然后加入不同浓度烟酸占替诺水溶液，测定其吸光度值，计算回收率，详见表1。

表1 回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 样品含量测定

取脑脉康片10片，将其充分研细，精密称定，然后准确加入100 mL纯水溶解、定容、过滤，取滤液10 mL稀释至100 mL（浓度约为1.0 g·L－1）。取适量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，制备反应液，分别以本法和文献法[1]进行含量测定，结果2种方法含量结果一致，分别为101.9%和101.8%（批号20090526）、100.4%和101.2%（批号20091029）。

3 讨论

由于烟酸占替诺结构中具有含孤对电子的N原子，此结构的物质可与缺电子的醌式结构的物质发生电荷转移反应，使反应体系的光谱发生红移，颜色发生改变。根据这一特点，可利用缺电子的醌式结构物质与具有富含孤对电子的物质发生反应，用以测定富含孤对电子物质的含量。但应注意此反应体系中反应时间的控制与试剂的有效选择，因不同试剂可致反应的灵敏度有很大不同。

本法与文献[1，3]方法相比，具有成本低、操作简便、快速、灵敏、准确的特点，从而提供了一种快速测定烟酸占替诺含量的新方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：859.

[2]赵桂芝，李华侃.荷移分光光度法测定烟胺羟丙茶碱[J].药物分析杂志，2002，22（1）：32.

[3]王泽民，康 葵，冯 梅.当代结构药物全集[M].北京：北京科技出版社，1993：1 446.