注射用硫酸链霉素细菌内毒素检查限值的研究

刘雪莉，袁坤，张敏（.河北省药品检验所，石家庄0500；.石家庄市中医院，石家庄05005）

注射用硫酸链霉素是一种对结核分支杆菌有强大抗菌作用的氨基糖苷类抗生素，《国家药品标准化学药说明书内容汇编》[1]对本品明确要求：“成人治疗细菌性心内膜炎，每12小时1 g，与青霉素合用；小儿治疗结核病，按体重20 mg·kg－1，一日1次，与其他抗结核药合用”，其细菌内毒素理论限值计算按成人计：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/（1 000 mg·h－1/60 kg）＝0.3 EU·mg－1，按小儿计：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/20 mg·kg－1·h－1＝0.25 EU·mg－1。但考虑到无论是成人还是小儿用法中都提及该药与其他药品的联合使用，故本品细菌内毒素检查限值应远小于理论限值。“化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则”[2]要求细菌内毒素检查设定限值“可适当严格，至计算值的1/3至1/2，以保证安全用药”。2010年版《中国药典》规定每1 mg链霉素中含内毒素的量应小于0.25 EU[2]，选取了理论限值，笔者认为该规定未考虑临床使用中的联合用药，限值设定未“适当严格”，不能保证用药安全。2000年版《日本抗生物质医药品基准解说》规定每1 mg链霉素中含内毒素的量应小于0.10 EU[3]，介于计算值的1/3至1/2，可保证用药安全。本试验参考有关文献[4]，对注射用硫酸链霉素进行了细菌内毒素检查限值提高至0.10 EU的可行性研究。

1 材料

注射用硫酸链霉素（编号①：华北制药股份有限公司，批号：1001101；编号②：瑞阳制药有限公司，批号：10022101；编号③：山东鲁抗医药股份有限公司，批号：091107；编号④：深圳华药南方制药有限公司，批号：N080407；编号⑤：大连美罗大药厂，批号：65081016；编号⑥：辽宁倍奇药业有限公司，批号：090214；“验证检查”所抽检的另外37批：华北制药股份有限公司（批号：080102、081001、0901101、0905102、0910103、0911107、1002103、1004101），瑞阳制药有限公司（批号：08110601、08122601、08122701、09080201、09090301、09090601、10020801、10030401），山东鲁抗医药股份有限公司（批号：080116、080602、081205、090903、091207、100104、100301、100313），深圳华药南方制药有限公司（批号：N080719、N081012、N090803、N090806、N091114、N091203、N100101、N100103），大连美罗大药厂（批号：6509308、65080723、65090704、65090801、65091101），所有药品规格均为每支1 g）；鲎试剂（TAL1，湛江博康海洋生物有限公司，批号：1007080，规格：每支0.1 mL，灵敏度（λ）＝0.25 EU·mL－1；TAL2，湛江安度斯生物有限公司，批号：1008231，规格：每支0.1 mL，λ＝0.25 EU·mL－1）；细菌内毒素工作标准品（CSE，中国食品药品检定研究院，批号：150601-201069，规格：每支120 EU）；细菌内毒素检查用水（BET水，湛江博康海洋生物有限公司，批号：1005040，规格：每瓶50 mL）。

2 方法与结果

2.1 TAL灵敏度复核试验

按2010年版《中国药典》（二部）附录细菌内毒素检查法[2]进行试验，所用TAL灵敏度均在0.5λ～2.0λ范围内，符合规定，结果见表1（注：以下各表中“+”表示TAL安瓿从恒温箱中轻轻取出，缓缓倒转180°，所形成凝胶不变形，不滑脱；“-”表示未形成凝胶或凝胶不坚实，变形并滑脱）

表1 TAL灵敏度复核试验结果Tab 1 Test for confirmation of TALsensitivity

2.2 供试品有效稀释浓度计算

参考2000年版《日本抗生物质医药品基准解说》[3]，注射用硫酸链霉素细菌内毒素检查限值为0.10 EU·mg－1，则最低有效浓度为λ/L＝0.25 EU·mL－1/0.10 EU·mg－1＝2.5 mg·mL－1。

2.3 供试品干扰预试验

将3个厂家3批注射用硫酸链霉素（编号①、②、③）按下表浓度稀释成供试品管（NPC：只含相应浓度的供试品），供试品阳性对照管（PPC：含有相应浓度的供试品与2λ浓度的CSE）。取TAL1、TAL2，分别与上述NPC和PPC进行反应，每个浓度平行做2支，另分别做阴性对照管（NC：只加入BET水）与阳性对照管（PC：加入2λ浓度的CSE）各2支，于（37±1）℃保温（60±2）min。结果表明，注射用硫酸链霉素20 mg·mL－1浓度对TAL1、TAL2均有干扰作用，10 mg·mL－1及其以下浓度对2个厂家TAL均无干扰作用，详见表2。

2.4 供试品干扰确证试验

根据预试验，将编号①、②、③3批供试品稀释为20、5 mg·mL－12个浓度进行干扰确证试验，结果见表3。

表3 干扰确证试验结果Tab 3 Results of interference test

表3结果表明，3批供试品浓度为20 mg·mL－1时，对TAL2均表现为干扰作用；3批供试品浓度为5 mg·mL－1时，Et均在0.5Es～2Es之间，对TAL无干扰作用。

2.5 样品细菌内毒素检查

分别取6个厂家不同批号样品6批（供试品编号①至⑥），将其稀释至2.5 mg·mL－1（即最低有效稀释浓度），以灵敏度0.25 EU·mL－1的TAL1，按2010年版《中国药典》（二部）附录细菌内毒素检查法，以检查限值为0.10 EU·mg－1进行检测，结果6批样品均符合规定，详见表4。

表4 样品细菌内毒素检查结果Tab 4 Results of bacterial endotoxins test for samples

2.6 验证检查

由于不同原料及生产工艺对产品细菌内毒素质量控制存在影响，为进一步确认提高后的标准是否使得各厂家生产的大部分产品都符合规定，笔者抽查检验了全国的5个厂家生产的其他37批样品，按提高后的标准“每1 mg链霉素中含内毒素的量应小于0.10 EU”进行检查，结果样品均合格。

3 讨论

以上试验表明，注射用硫酸链霉素细菌内毒素检查标准提高至2000年版《日本抗生物质医药品基准解说》规定的“每1 mg链霉素中含内毒素的量应小于0.10 EU”[3]是可行的。

沿用《中国药典》的表述习惯，注射用硫酸链霉素细菌内毒素检查限值可提高为：取本品，依法检查（《中国药典》2010年版二部附录ⅪE），每1 mg链霉素中含内毒素的量应小于0.10 EU。

提高后的细菌内毒素检查限值与国际标准接轨，能够更好地控制药品质量，为2015年版《中国药典》对本品细菌内毒素的规定提供了有力的研究资料。

[1]统一药品说明书及批准文号专项工作小组.国家药品标准化学药说明书内容汇编[S].第6册.2002：6-161.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：999、附录99、附录213.

[3]日本抗生物质学术协议会.日本抗生物质医药品基准解说[S].2000年版.东京：时报株式会社，2000：Ⅱ-17.

[4]中国药品生物制品检定所，中国药品检验总所.中国药品检验标准操作规范[S].北京：中国医药科技出版社，2010：310.