毛细管气相色谱法测定克痢痧胶囊中丁香酚含量

2012-08-06卢智玲刘华栋

中国药业 2012年4期

卢智玲，刘华栋

(1.浙江省杭州市药品检验所，浙江杭州 310017; 2.杭州民生药业有限公司，浙江杭州 310011)

克痢痧胶囊现收载于2010年版《中国药典(一部)》，由白芷、苍术、丁香、荜茇、石菖蒲、细辛、鹅不食草、猪牙皂等12味药材组方，具有解毒辟邪、理气止泻的功效，用于止泻和痧气(中暑)。经处方分析，丁香中的丁香酚为其药效成分，具有镇痛、抗菌、抗炎等药理作用[1]。而2010年版《中国药典(一部)》的标准虽较之前的国家药品标准(WS3－B－3053－98－2008)有所提高，增加了丁香酚的气相定性鉴别，但仍缺乏定量分析方法，不能有效控制该组分。因此，参考2010年版《中国药典(一部)》丁香药材及相关文献[2]方法，建立用于测定丁香酚含量的气相色谱法(外标法)，以提高并完善标准，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 6890N型气相色谱仪，氢火焰离子化检测器(FID);XS105型电子天平(Mettler toledo);KQ－600DV型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。丁香酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110725－200711，纯度为99.3%);克痢痧胶囊(浙江南洋药业有限公司，批号分别为20100111，20100509，20100802);缺丁香阴性对照样品依照处方工艺自制;正己烷为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:HP innowax石英毛细管柱(30 mm×0.32 mm，0.25 μm);柱温:程序升温，初始温度为100℃，以10℃ /min速率升至200℃，保持5 min;进样口温度:250℃;检测器温度:250℃;FID检测器;载气:氮气，气体流量为1.2 mL/min;分流进样，分流比为5∶1;进样体积为1 μL。在此色谱条件下，丁香酚与相邻色谱峰均能达到基线分离，见图1。

图1 气相色谱图

2.2 溶液制备

称取丁香酚对照品27.20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本品内容物，研细，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷15 mL，称定质量，超声处理15 min，放冷，再称定质量，用正己烷补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:按处方工艺制备阴性空白样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液，依法进样。结果表明，阴性对照品溶液在与丁香酚相同保留时间处无干扰，表明方法专属性良好。结果见图1。

线性关系考察与最低检出限确定:称取丁香酚对照品60.50mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度。分别精密吸取 0.3，0.5，1，2，3，4，5 mL，置 10 mL 量瓶中，加正己烷稀释至刻度，得系列质量浓度的对照品溶液。依法进样测定，以峰面积(Y)与进样量(X)作线性回归，回归方程为 Y=2 246.408 X+3.347 7，r=0.999 9(n=7)。结果表明，丁香酚进样量在 0.072 6 ～1.21 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。将对照品溶液逐步进行稀释，以色谱峰高是基线噪声高度的3倍作为标准，计算检出限，结果丁香酚的最低检出限为5 ng。

精密度试验:精密吸取同一丁香酚对照品溶液1 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果峰面积的 RSD为0.79%(n=6)。

稳定性试验:精密吸取同一供试品(批号为20100802)溶液，分别于 0，1，2，4，6 h 时进样，测定峰面积。结果的 RSD 为 1.67%(n=5)，表明供试品溶液在配制后6 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品(批号为20100802)，按2.2项下依法制备供试品溶液6份并测定含量。结果丁香酚的平均含量为6.128 5 mg/g，RSD 为 1.44%(n=6)，表明该方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20100802)约0.30 g，精密称定，精密加入质量浓度为2.42 g/L的丁香酚对照品溶液 0.6，0.8，0.9 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液，测定含量，并将样品已知量、加入量及测得量均按进样体积1 μL换算成相应的μg数，计算回收率。结果见表1。