紫外分光光度法测定蒙药复方协日嘎－4中总酚酸含量＊

杨 婷，马 强，董 玉

(内蒙古医学院药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

蒙药协日嘎处方来源于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》中协日嘎四味汤散，是由姜黄、黄柏、栀子、蒺藜4味药组方，具有利尿、清泻湿热功能，主要用于小便闭止、尿频、尿急、尿中带血、膀胱刺痛，是蒙医治疗膀胱热证的首选方剂[1]。协日嘎中含有姜黄，其主要生物活性成分为姜黄素类化合物和挥发油[2－3]。姜黄挥发油除具有广谱抗菌消炎作用外，还有调血脂、抗凝、抗氧化、利胆、抗癌、抗艾滋病病毒等作用[4]。笔者建立了测定协日嘎中总酚酸含量的紫外分光光度法，以控制其内在质量，现报道如下。

1 仪器与试药

TU－1901型紫外可见分光光度计(北京);Sartorius－BS224S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统公司);KQ－250DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。蒙药姜黄、黄柏、栀子、蒺藜饮片由内蒙古天力药业有限责任公司提供，产地内蒙，经内蒙古医学院药学院庞秀生教授鉴定为蒙药姜黄、黄柏、栀子、蒺藜;姜黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110823－201004);其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

精密称取姜黄素对照品适量，加无水甲醇制备成质量浓度为0.059 2 g/L的对照品溶液。取复方协日嘎－4粗粉约10 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加10倍量70%乙醇，加热回流2 h，趁热用棉花过滤，浓缩至小体积，置50 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，吸取5 mL，置25 mL量瓶中，并稀释至刻度，再吸取2 mL，置25 mL量瓶中，以50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 测定波长选择

分别吸取姜黄素对照品溶液和供试品溶液适量，分别置25 mL量瓶中，加无水乙醇至5 mL，加0.3%十二烷基硫酸钠2.0 mL及0.6% 三氯化铁 －0.9% 铁氰化钾(1 ∶0.9)混合溶液 1.0 mL，混匀，在暗处放置5 min，加0.1 mol/L盐酸溶液至刻度，在暗处放置20 min，以相应试剂为空白，在400～800 nm波长范围内进行扫描。结果供试品溶液和对照品溶液均在720 nm波长处有最大吸收，故确定720 nm为测定波长。吸收光谱见图1。

图1 紫外吸收光谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取姜黄素对照品溶液(质量浓度为23.68 μg/mL)0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL，置 25 mL 量瓶中，加无水乙醇至5 mL，加0.3%十二烷基硫酸钠2.0 mL及0.6% 三氯化铁 －0.9% 铁氰化钾(1 ∶0.9)混合溶液 1.0 mL，混匀，在暗处放置5 min，加0.1 mol/L盐酸溶液至刻度，在暗处放置20 min，以显色剂为空白，在720 nm波长处测定吸光度。以姜黄素对照品取样量为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 Y=8.177 5X+0.127 7，r=0.999 2(n=7)。结果表明，姜黄素进样量在11.84～82.88 μg范围内与吸光度呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液1 mL，按拟订的方法连续测定6次。结果吸光度的 RSD=0.22%(n=6)，表明该方法精密度良好。

稳定性试验:精密量取同一供试品溶液1 mL，按拟订的方法操作，分别于配制溶液后 0，15，30，45，60，75 min 时测定。结果吸光度的 RSD=2.68%(n=6)，表明供试品溶液在90 min内稳定。

重复性试验:取样品6份，每份约10 g，精密称定，按2.1项下方法制备供试品溶液，按拟订的方法测定吸光度，计算含量。结果的 RSD=1.92%(n=6)，表明该方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品粉末约5 g，精密称定，6份，按2.1项下方法制备供试品溶液，精密吸取1 mL，精密加入经五氧化二磷减压干燥至恒重的姜黄素对照品适量，照拟订的方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中姜黄素的质量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取不同批次的样品，按2.1项下方法制备供试品溶液，按拟订的方法测定吸光度，计算含量。结果见表2。

表2 不同批次样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

选取姜黄素为对照品，是因姜黄中含有姜黄素[5]，多有报道且含量较高，可作为含量测定指标性成分[6]。并且，姜黄素本身具有多种药理活性[7]，可代表姜黄中的总酚酸。

复方协日嘎－4含有酚类成分，以姜黄素为对照，采用紫外分光光度法进行比色测定，在400～800 nm波长范围进行光谱扫描。最终样品和供试品在波长720 nm处均有最大吸收，且显色剂与未显色样品在该波长下均无干扰，故选择720 nm波长作为测定波长。

曾有人以亚硝酸钠－硝酸铝配位显色法显色[8]，但该方法专属性较差;用紫外分光光度法测定，pH会对测定有显著影响。本试验采用三氯化铁－铁氰化钾显色法[9]。比较上述显色方法，用三氯化铁－铁氰化钾显色后，对照品溶液、供试品溶液的λmax基本一致，而且重现性好，故采用三氯化铁－铁氰化钾显色－比色法对总酚酸进行测定。该反应显色后需放置暗处，见光后操作。随着时间的增加，450 nm波长处的吸收值增大，故450 nm处为干扰峰。

姜黄中含有酚酸类成分，并从中提取、分离、鉴定了姜黄素。姜黄主要生物活性成分为姜黄素类化合物和挥发油[3]。本试验首次以姜黄素为对照品，对协日嘎－4中总酚酸进行了含量测定。该方法灵敏、简便、快速、准确可靠，为合理、有效开发、利用复方协日嘎－4药材奠定了基础。

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[7]韩 婷，宓鹤鸣.姜黄的化学成分及药理活性研究进展[J].解放军药学学报，2001，17(2):95－97.

[8]陈焕娜，刘 洋，赵晓霞，等.分光光度法测定丹参总酚含量方法的研究[J].亚太传统医药，2010，6(8):19－22.

[9]马 强，董 玉，那生桑，等.冬葵果中总酚酸的含量测定[J].时珍国医国药，2010，21(10):2 583－2 584.