高效液相色谱法测定五加参颗粒中紫丁香苷含量

彭 敏，谭 洁

(1.湖南省湘西土家族苗族自治州药品检验所，湖南 吉首 416000;2.南华大学药学与生命科学学院，湖南 衡阳 421000)

刺五加为五加科植物刺五加的干燥根及根茎或茎，具有益气健脾、补肾安神的功效，常用于脾肾阳虚、体虚乏力、失眠多梦等症的治疗[1]。刺五加根中含有绿原酸、紫丁香苷、异嗪皮啶葡萄糖苷和去羟栀子苷[2]，其中紫丁香苷为主要成分之一。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法，以紫丁香苷作为测定指标建立了五加参颗粒的含量测定方法，以期为进一步完善其质量控制标准提供依据，现报道如下。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱仪(美国 Agilent公司);G1315B，G1315C XL型检测器;XS205DU型电子天平(瑞士梅特勒－托利多公司);MJ－600型超声波清洗仪(无锡市美洁超声设备有限公司)。紫丁香苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111574－200201，供含量测定用，含量为 95.6%);五加参颗粒(批号分别为 090401，090402，090601，090602，090603，规格为12.25 g/块，哈药集团中药二厂);甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.3%甲酸溶液(体积比12∶88);检测波长:265 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于4 000。

2.2 溶液制备

称取五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的紫丁香苷对照品约10 mg(实称10.26 mg)，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀[2]，即得每1 mL含0.205 2 mg的对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含0.020 5 mg的对照品溶液。取样品1包内容物，研细，取约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方取缺刺五加的阴性样品5 g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取2.2项下3种溶液各10 μL，按上述色谱条件进样，记录色谱图，见图1。可见，在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，说明样品中其他成分对紫丁香苷的测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液(0.205 2 g/L)0.5，1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 mL，分别置 25 mL 量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别吸取上述溶液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值。以进样量 (μg)为横坐标、峰面积积分值 Y为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 Y=0.000 000 476 X+0.001 086 384 5，r=0.999 9(n=6)。结果表明，紫丁香苷进样量在0.041 04～0.451 4 μg范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样5次。结果紫丁香苷峰面积的 RSD为0.4%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，1，3，6，10 h时进样，测定峰面积。结果紫丁香苷峰面积的 RSD为0.6%(n=5)，表明供试品溶液在配制后10 h内稳定性良好。

重现性试验:按拟订的含量测定方法，取同一批样品6份，依法测定。结果紫丁香苷的平均含量为0.300 6 mg/g，RSD为1.1%(n=6)，表明方法重现性较好。

加样回收试验:取已知含量的样品6份，分别加入紫丁香苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 紫丁香苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

按拟订的含量测定方法测定5批样品，以外标法计算含量。结果批号为 090401，090402，090601，090602，090603 的样品中紫丁香苷的含量分别为 0.300 2，0.305 7，0.308 5，0.304 7，0.297 9 mg/g(n=2)。

3 讨论

在供试品溶液的制备过程中，对加热回流法、超声提取法，提取溶剂70%乙醇、乙醚、甲醇分别进行了比较，结果以甲醇超声提取30 min的效果最理想。对流动相组成及比例进行了反复试验，结果以乙腈－0.3%甲酸溶液(体积比12∶88)为流动相，分离效果较好。本方法操作简便，结果准确，重现性好，可用于五加参颗粒的质量控制。

[1]WS3－B－2474－97，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第十三册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:801.