莫吉司坦中有关物质检测方法研究

黄 艳，胡广林

(1.海南医学院药学院，海南 海口 571101; 2.海南大学材料与化工学院，海南 海口 570228)

莫吉司坦(moguisteine)于2004年在意大利获准上市，是Roche公司开发的呼吸系统用药，用于治疗由感染、刺激、炎症、肿瘤引起的急慢性呼吸系统疾病所致的咳嗽，镇咳作用显著，且不具有成瘾性[1]。目前，莫吉司坦的有关物质测定方法国内未见文献报道。笔者建立了高效液相色谱法，用于检测莫吉司坦的有关物质，方法简便、准确、灵敏，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－6AD型高效液相色谱泵(日本岛津)，SPD－10Avp型紫外检测器(日本岛津)，2000型色谱工作站(浙大智能信息工程研究所);JASCOV－650型紫外－可见分光光度计(日本);Sartotius NE215S型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)。甲醇为色谱纯，水为高纯水;莫吉司坦(批号为 20100801，20100802，20100803，自制);莫吉司坦对照品(自制，经检测纯度为99.80%)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Luna C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 － 水(58 ∶42);检测波长:230 nm;流速:1.0 mL/min。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，结果见图1。理论板数按莫吉司坦主峰计算为2 343，莫吉司坦与相邻杂质峰的分离度为2.0。

2.2 溶液配制

取莫吉司坦对照品约25 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相约15 mL，超声使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品约25 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相约15 mL，超声使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液2 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

检测限确定:取上述对照品溶液，逐级稀释，分别取20 μL注入液相色谱仪，经分析，莫吉司坦的检测限为2.0 ng。

专属性试验:取莫吉司坦约25 mg，共6份，精密称定，分别置25 mL量瓶中，加流动相约15 mL，超声使溶解，按下列条件试验。放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀(未破坏);放冷，加1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL，室温下放置2 h，用1 mol/L盐酸溶液调节pH至中性，用流动相稀释至刻度，摇匀(强碱破坏);放冷，加1 mol/L盐酸溶液5 mL，室温下放置2 h，用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至中性，用流动相稀释至刻度，摇匀(强酸破坏);于沸水浴中放置1 h，取出，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀(高温破坏);在日光下放置2 h，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀(光破坏);放冷，加30%过氧化氢溶液3 mL，室温下放置2 h，用流动相稀释至刻度，摇匀(氧化破坏)。分别精密量取上述6种溶液各20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。

图2 专属性试验色谱图

精密度试验:精密吸取自身对照溶液，连续进样6次测定。结果峰面积的 RSD为1.62%(n=6)，表明本法的精密度良好。

重复性试验:取批号为20100802的样品6份，依法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液和自身对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定有关物质。结果最大杂质含量的 RSD为1.40%，总杂质的 RSD为1.98%，表明方法的重复性较好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20100802)溶液，分别在放置 0，2，4，6，8 h 后测定。结果主峰峰面积的 RSD 为 0.92%，总杂质峰面积的 RSD为1.54%，表明供试品溶液8 h内稳定性良好。

2.4 样品有关物质检测

取3个批次的供试品，照2.2项下方法制备溶液并照2.1项下色谱条件检测有关物质。结果见表1。

表1 样品有关物质测定结果

3 讨论

用流动相溶解制成每1 mL中含莫吉司坦约20 μg的对照品溶液，照分光光度法[2]，于200～400 nm波长范围内扫描，结果莫吉司坦在275 nm波长处有最大吸收峰，但吸收较弱;约在228 nm波长处还有一肩峰，故参考文献[3]选择230 nm的波长作为本品有关物质的检测波长。

在进行色谱条件优化试验中，发现甲醇－水(60∶40)为流动相时，主峰保留时间较适中且分离效果较好，但主峰稍有拖尾;曾考虑加入0.1%三乙胺改善主峰峰形，结果主成分严重被破坏，产生大量的有关物质;最终以甲醇－水(58∶42)为流动相时，主峰峰形得以改善。

专属性试验结果表明，在中性条件下高温或光照时莫吉司坦的有关物质稍有增加;在强碱、强酸或氧化剂存在的条件下莫吉司坦发生明显的降解，产生大量的有关物质;所产生的降解产物的峰与主峰均能达到完全分离，分离度符合规定。欲知其降解产物具体是什么物质，还有待进一步研究。

专属性试验结果还表明，本品的主要杂质峰均在主峰2倍保留时间内出峰，且在进行破坏性试验考察时，各破坏条件下的色谱图中主峰2倍保留时间后均无杂质峰出现，因此确定本品有关物质检查的保留时间为主峰保留时间的2倍。

本法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于莫吉司坦有关物质的检测。

[1]Angelis L.Moguisteine[J].Drugs of the Future，1991，16(7):618 － 619.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录23.

[3]D.Castoldi，A.Oggioni，M.I.Renoldi，et al.Assay of moguisteine metabolites in human plasma and urine conventional an chiral high－performance liquid chromatographic methods[J].Journal chromatoGraphy B，1994，655:243－252.