元仁胶囊的质量标准研究

千 珂 王 荣 张伟东 唐志书 顾 宜 王晓娟

1.陕西中医学院药学院，陕西 咸阳 712046；2.第四军医大学第三附属医院药剂科，陕西 西安 710032

元仁胶囊由元胡、酸枣仁等中药组成，具有宁心安神、益肝养血的功效，用于心肝血虚引起的焦虑、失眠、抑郁症状。元胡主要的活性成分为延胡索乙素及其他生物碱，具有镇痛、镇静、催眠及安定作用。国内外研究表明，延胡索乙素在高架十字迷宫模型上具有抗焦虑的作用，可能与GABA受体的苯二氮结合位点有关。延胡索乙素能够通过抑制杏仁体释放多巴胺来抑制南印防己毒素诱导的大鼠自主运动（包括水平运动、垂直运动以及运动距离）和旋转次数增加，也能减少大鼠在冰水中的自主运动频率。提高抗应激能力。延胡索总碱除了有一定的镇静作用，还能提高小鼠的抗疲劳能力及耐缺氧能力，从而提高了机体的抗应激能力[1-2]。对应激状态下心肌缺血坏死具有保护作用。制剂中的另一组分酸枣仁提取物或含其复方药物具有抗抑郁抗焦虑、改善应激的作用，影响焦虑大鼠行为学、血浆神经肽Y和单胺类神经递质[3-4]。酸枣仁提取物组分复杂，各组分含量较低，因此对酸枣仁有效组分/指标成分的选择及测定都较为困难。延胡索乙素在制剂中含量高，因此采用高效液相色谱法对样品中延胡索乙素进行了质量控制研究，经考察方法简便、准确、重现性好，现报道如下。

1 仪器与试药

LC2010A HT高效液相色谱仪（日本岛津）；BT125D十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯）；DL-180超声仪（浙江省向山县石蒲海天电子仪器厂）；Diamonsil C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；甲醇为色谱纯；纯净水；其他试剂均为分析纯。

酸枣仁皂苷A对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110734-200510），延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110726-200610）；元仁胶囊（院内自制）。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别酸枣仁皂苷A

取本品内容物1 g，加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点与同一硅胶-G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。薄层图谱清晰，并且阴性无干扰。

2.2 含量测定

元胡主要含有效成分延胡索乙素，参照文献含量测定方法[5]，采用高效液相色谱法测定本品中延胡索乙素的含量。

2.2.1 色谱条件 Diamonsil C18分析柱 （4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调 pH 值至 6.0）（55∶45）；柱温：室温；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于2000。见图1。阴性对照溶液在与延胡索乙素对照品色谱图相同位置无干扰峰，表明样品中其他成分对延胡索乙素的测定无干扰。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素对照品适量，加50 mL甲醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 称取样品，约相当于延胡索乙素5 mg，精密称重，置50 mL量瓶中，加80%甲醇20 mL，超声30 min，并用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，测定，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取处方量的除延胡索提取物以外的各组分，按元仁胶囊制备工艺制成阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

图1 HPLC色谱图

2.2.5 线性关系考察 精密称取减压干燥至恒重的延胡索乙素对照品5.02 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。

以峰面积平均值（Y）对进样量（X）进行回归的标准曲线方程：Y=904386X+2997.2，r=0.9999。以峰面积对进样量作图，得标准曲线图。结果表明延胡索乙素在0.2～2.0 μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度考察 取“2.2.2”项下同一供试品溶液，连续进样6次依测定法进行测定，记录延胡索乙素色谱峰面积，结果RSD为0.54%。

2.2.7 重复性实验 取样品（批号：20080614）5份，分别精密称取（约相当于延胡索乙素5 mg），照本品含量测定方法进行测定。见表2。结果表明，本方法重复性良好。

表1 延胡索乙素线性考察结果

表2 重复性考察结果

2.2.8 方法稳定性考察 取同一对照品溶液，分别于0、2、4、8、12 h参照本品含量测定方法进样，测定延胡索乙素的峰面积，平均峰面积为902792，RSD为0.99%（n=5）。结果表明，本品溶液中延胡索乙素在12 h内稳定。见表3。

表3 稳定性试验结果

2.2.9 回收率试验 分别精密称取已知含量的样品 （批号：20080614）适量（约相当于延胡索乙素2 mg）9份，分别精密加入减压干燥至恒重的延胡索乙素对照品适量，使其含量分别为4、6、8 mg。照本品含量测定方法进行测定，并计算回收率，结果显示本方法准确度良好。见表4。

2.2.10 样品含量的测定 取样品3批，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法操作，以“2.2.1”项下色谱条件测定，每批样品测定3次取平均值，按外标法计算每粒中延胡索乙素的含量。见表5。本品每粒含延胡索乙素（C21H25NO4）不少于25.0 mg。

3 讨论

3.1 TLC展开剂

本实验中酸枣仁鉴别中所采用的TLC展开剂分别参见《中国药典》2010年版酸枣仁及枣仁安神胶囊鉴别项下的相关条件[5]。

表4 回收率实验结果

表5 三批样品的含量测定结果（n=3）

3.2 供试品溶液制备方法的优选

文献收载的测定中成药（丸剂、片剂或颗粒剂）中延胡索乙素时，采用的溶剂有含氨甲醇、6%醋酸和乙醚等[6-7]；提取方法常采用回流或超声的方法。笔者在本研究中考察了不同溶剂、不同提取方法以及不同提取时间对延胡索乙素的提取情况，发现胶囊辅料和成药中其他成分对延胡索乙素的提取有较大的影响。

3.2.1 提取溶剂的优选 笔者考察了甲醇、80%甲醇和50%甲醇3种溶剂，经超声相同时间后，测定延胡索乙素峰面积，依次为1087342、1076452和875932，表明以甲醇或80%甲醇作为提取溶剂均较好，但甲醇提取溶剂较80%甲醇提取溶剂色谱图中杂质峰峰面积更大，因此选择80%甲醇为提取溶剂。

3.2.2 提取方法的优选 笔者曾以80%甲醇为溶剂，考察采用直接超声提取法和水浴回流提取法对延胡索乙素的提取的影响。实验结果表明：加入80%甲醇后不论是加热还是超声都可以提取完全，峰面积基本相同。但超声操作起来简便，快速，因此选择超声提取。实验考察了超声20、30、40、50 min的提取效果，结果表明延胡索乙素在30 min内基本提取完全。

3.3 流动相的优选

有文献报道测定延胡索乙素使用流动相甲醇-水（70∶30）或甲醇-乙腈-0.1%氨水（磷酸调pH至9.0）[7-8]，前者峰形不对称，后者pH较高，影响柱寿命。因此参照《中国药典》2010年版一部“延胡索”项下所用流动相为“甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调 pH 值至 6.0）（55∶45）”，并对水相和有机相的比例进行适当调整，考察其对样品分离度的影响，结果在有机相从40%增加至70%，延胡索乙素可与相邻峰分开。0.1%磷酸加入0.2%三乙胺调节pH值至6.0，pH值适中，三乙胺对延胡索乙素峰形有明显改善作用。最终确定流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调 pH 值至 6.0）（55∶45）。

3.4 检测波长的选择

用二极管阵列紫外检测器，在200～400 nm对延胡索乙素对照品峰进行紫外扫描，测得延胡索乙素的最大紫外吸收波长为230、280 nm，230 nm检测灵敏度较高，但干扰较大，参考《中国药典》2010年版一部，确定测定波长为280 nm。笔者在本实验中根据元仁胶囊的特点，对供试品溶液的制备方法进行了改进，方法简便易行，对其他中成药的样品处理有一定的借鉴作用。

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