不同炮制方法对延胡索有效成份影响研究

徐捷

延胡索为多年生草本植物，含有多种生物碱，具有活血化瘀、行气止痛的功能。对于治疗胸闷痹痛、跌打损伤、血瘀痛经有奇效［1］。其生物碱主要有延胡索甲素(d-corydaline)、延胡索乙素(d1-Tetrahydropalmatine)、延胡索丙素(protopine)，大多以生物碱盐结合态形式存在［2］。临床上多用炮制后的延胡索，《中国药典》2005版详细介绍了延胡索净制法、醋炙法和醋煮法三种方法［3］，结果证实，酒制延胡索能够增强活血化瘀的活性，醋制延胡索可以提高行血止痛的疗效［4］。本文以延胡索中主要有效成份延胡索乙素为研究对象，采用高效液相色谱法(HPLC)，探讨不同炮制方法对延胡索乙素的影响，旨在为优化炮制方法及制定饮片的质量标准提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 材料 延胡索来源于天津中新药业药材公司(批号：070912);参照品延胡索乙素(批号：20022007)从中国食品药品生物制品检验所获取;色谱醇选用甲醇;黄酒选用浙江绍兴黄酒;陈醋选用北京陈醋厂生产的;实验用水为自制双蒸水;其它试剂均为分析醇。色谱系统为美国Water-717，包括高效色谱分析仪、紫外检测器、色谱工作站;烘箱选用湖北黄石医疗器械厂(HDG78-1);电子天平选用美国梅特勒天平公司生产。

1.2 方法

1.2.1 样品的制备：根据中药炮制规范［5］，对延胡索进行醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制。①醋煮延胡索：取适量延胡索，用20%醋予以伴润，醋液被完全吸收后，加入自制双蒸水把药面淹没，先用武火煮沸，随后用文火煎煮，直至醋溶液被吸尽为止，干燥留置备用;②醋烘延胡索：取适量延胡索，加入20%醋使其浸润，待醋被延胡索吸尽后，取出置入烘箱内，温度调到120℃，将浸润后的延胡索烘烤45 min，然后取出晾干备用;③醋炙延胡索：取适量延胡索，加入20%醋使其浸润，待延胡索充分吸尽醋液后，以文火炒干备用;④酒炙延胡索：取适量延胡索，加入20%绍兴黄酒使其浸润，延胡索完全吸尽黄酒后，用文火将其炒干备用。

1.2.2 对照品溶液的制备：精确称量延胡索乙素对照品2.257 mg，置于10 ml量瓶中，加入甲醇至刻度线，配制延胡索对照溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备：精确称量醋煮、醋烘、醋炙、酒炙延胡索及生品延胡索各5 g，40目筛滤过，分别置于标准三角瓶中，加自制双蒸水100 ml，超声提取25 min，取上层清液;重复上述步骤1次，合并二次滤液;加入50 ml水到残渣里，待溶解后加入10 ml浓氨水，用乙醚萃取3次，提取萃取液，水浴55℃蒸干，取0.2 g浓缩物，用2 ml甲醇溶解，置入冰箱保存备用。

1.2.4 色谱条件：选择美国安杰伦公司色谱柱AgilentTC-C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相选择甲醇-0.1%磷酸溶液(甲醇∶0.1%磷酸溶液 =28∶72)pH值范围5.2～5.4，流速1.0 ml/min;色谱柱温为35℃，波长为280 nm;同时要求根据延胡索乙素峰计算出的塔板数理论值不低于3 000。此时测得延胡索乙素对照品色谱、延胡索样品色谱见图1、2。

图1 延胡索乙素对照品色谱

图2 延胡索样品色谱

2 结果

2.1 线性关系实验 分别吸取延胡索乙素对照品溶液0.19、0.28、0.37、0.46、0.55、0.64、0.73 ml，置入甲醇定容置 2 ml瓶中，配制成不同浓度的延胡素溶液，取上述溶液各20μl，做HPLC分析。以延胡索含量(μg)对应色谱峰面积进行回归分析，得回归方程为：Y=2.412×105X-6.14×104，相关系数γ=0.995，线性范围0.19～1.36μg呈现相关性。

2.2 精密度试验 取同一供品溶液，每次20μl，重复进样5次，在同样的色谱条件进行延胡索乙素测定，将测定数值代入回归方程，RSD=0.18%，说明本次试验方法有良好的精密度。

2.3 稳定性试验 取同一供品溶液，采取0.2、4、6、8、10每隔2 h进样的方式，每次进样2 020μl，测定溶液中延胡索乙素含量，此时延胡索乙素峰面积RSD为1.875%，表明在10 h内供试品溶液稳定性能良好。

2.4 重复性试验 取同一批号样品，制备成5份供试品溶液，在相同的色谱条件下测定延胡索乙素的含量，测定结果RSD为1.74%，表明本试验方法重复性良好。

2.5 加样回收率试验 选取5份已知含量的样品，把1 ml的延胡索乙素对照品溶液(0.19 mg/ml)加入到5份样品中，按供试品溶液制备方法制备溶液，根据色谱含量测定方法测定其含量，并计算加样回收率。见表1。

表1 延胡索乙素加样回收率计算结果

2.6 样品含量测定 分别取延胡索生品、延胡索醋烘品、延胡索醋煮品、延胡索醋炙品、延胡索酒炙品试品溶液，在色谱分离条件下测定其峰面积，计算延胡索乙素含量。见表2。

表2 5种供试品中延胡索乙素含量测定结果n=3，mg/g

3 讨论

关于延胡索不同炮制方法对延胡索乙素影响的研究，文献报道很多，曹柳等［6］曾用醋炙、醋煮、酒炙的方法炮制延胡索，发现醋炙、酒炙二种炮制方法都比延胡索生品中延胡索乙素含量高，而醋煮炮制方法延胡索乙素比生品含量偏低;本文研究也证实，醋烘延胡索、醋炙延胡索、酒炙延胡索所测定的延胡索乙素比延胡索生品中高，而醋煮延胡索比延胡索生品延胡索乙素低。这可能是由于延胡索中生物碱大多表现为游离态的形式，而游离态生物碱难深于水，经过醋制或酒制后，形成生物碱盐而增加溶解度。王光宁等［7］通过试验也证实，经过醋制的延胡索乙素煎出率比生品延胡索高出20%左右。

传统的延胡索炮制方法有醋炒、醋蒸、醋煮、洒炙等，延胡索经醋炙、酒炙后，通改变延胡索的组织结构，有利于其有效成分的浸润、溶解、扩散与转化，提高延胡索乙素的溶出率［8］。醋煮炮制方法使延胡索中乙素下降的原因可能是由于与煮的时间过长，破坏了其生物碱结构。

延胡索是临床上常用的中药材，大多以炮制品入药，由于各地炮制方法存在差异，因此优化炮制方法就显得尤为重要，本文采用超声的方法提取不同炮制品中的延胡索乙素，方法操作简单，提取比较完全，稳定性良好，精密度高，适用于延胡索炮制品的质量控制。

1 肖崇原主编.中药化学.第1版.上海：上海科学技术出版社，1997.59.

2 沈志冲.元胡不同炮制方法对延胡索乙素含量的影响.现代预防医学，2011，38：4454-4458.

3 国家药典委员会编.中华人民工共和国药典.第1版.北京：化学工业出版社，2005.94.

4 窦志英，孙巍，田丽莉，等.HPLC法比较延胡索生品与不同炮制品中3 种有效成份的含量.中药材，2007，30：399-401.

5 浙江省食品药品监督管理局主编.浙江省中药炮制规范.第1版.杭州：浙江科技出版社，2005.48-49.

6 曹柳，窦志英，王萍，等.不同炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响.中国中医药信息杂志，2009，16：42-44.

7 王光宁，李勇.炮制延胡索对延胡索乙素和去氢紫碱含量的影响.食品与药品，2007，9：1-2.

8 冯自立，周建军，张涛，等.高效液相法测定陕西产延胡索中延胡索乙素、原阿片碱的含量.安徽农业科学，2009，37：9832-9840.