可同时测定蛇胆川贝液中贝母素甲与贝母素乙含量的方法

范 蕾，王伟影

(浙江省丽水市食品药品检验所，浙江 丽水 323000)

蛇胆川贝液是由蛇胆汁、平贝母、杏仁水组成的复方制剂，具有祛风止咳、除痰散结的功效。方中的平贝母为百合科多年生草本植物平贝母 Fritiliariae ussuriensis Maxim.的干燥鳞茎，性味苦、甘，微寒，归肺、心经，具有清热润肺、化痰止咳功效。甾体生物碱是平贝母功效的物质基础，对其含量测定的方法有比色法、滴定法等，但存在终点不易辨认、灵敏度低等不足;而薄层色谱法、柱前衍生化法[1]等也有干扰因素多、样品处理烦琐的局限;又因甾体生物碱没有紫外吸收，无法使用紫外检测器测量[2]。本试验采用高效液相色谱－蒸发光散射检测器法，选取平贝母中贝母素甲和贝母素乙两个指标，同时进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，自动进样器，蒸发光散射检测器，Agilent色谱工作站。贝母素甲(批号为110750－200305)、贝母素乙(批号为110751－200303)均来自中国药品生物制品检定所;蛇胆川贝液(武汉鑫瑞药业有限公司，批号分别为20100501，20100302，20101003);乙腈、甲醇为色谱纯(Merck公司)，二乙胺为分析纯(杭州高精精细化工有限公司)，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent SB C18柱(150 mm ×4.6 mm， 5 μm);流动相:乙腈－水－ 二乙胺(70∶30∶0.03);流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;漂移管温度:85℃;载气(氮气)流速:2.5 L/min。蒸发光散射检测器。

2.2 溶液制备

取贝母素甲、贝母素乙对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为0.75，0.89 g/L的混合溶液，作为贮备液。精密量取贮备液制成每1 mL含贝母素甲60μg、含贝母素乙70μg的混合溶液，作为对照品溶液。精密取样品25 mL，置分液漏斗中，加氨水2 mL，用氯仿提取4次，20 mL/次，提取液蒸干，残渣用甲醇溶解稀释至10 mL，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。取处方中除平贝母外中药饮片自制空白样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取 2.2项下 3种溶液，按 2.1项下色谱条件进行分析，运行时间12 min。在此条件下，样品中贝母素甲、贝母素乙均分离良好，空白对照无干扰。见图1。

线性关系考察:取2.2项下对照品溶液，依次进样 1，2，5，10，15，30，40 μL，按2.1项下色谱条件进行测定，以lgA为纵坐标、lgC为横坐标绘制曲线，回归方程贝母素甲为 Y=0.7541 X－19.7760(r=0.9997)，贝母素乙为 Y=0.6875 X－19.3512(r=0.9996)。结果表明，贝母素甲进样量在 0.06～2.406μg 、贝母素乙进样量在 0.071 ～2.812μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取对照品贮备液，制成质量浓度分别为贝母素甲187μg/mL，贝母素乙89μg/mL的混合溶液。按2.1项下色谱条件连续进样5次。结果贝母素甲与贝母素乙的 RSD分别为0.38%和0.71%。

重复性试验:取同一批(批号为20100501)样品，平行取样5份，依法测定。结果贝母素甲及贝母素乙的含量平均值分别为0.053 g/L 和 0.061 g/L，RSD 分别为 0.55%和 0.83%。

稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为20100501)，分别在0，5，10，20，24 h时进样。结果贝母素甲与贝母素乙峰面积的 RSD分别为0.55%和0.29%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:取样品(批号为20100501，含贝母素甲为0.053 g/L、贝母素乙为0.061 g/L)6份，分别精密加入对照品溶液3 mL(相当于贝母素甲对照品561μg、贝母素乙对照品267μg)、4mL(相当于贝母素甲对照品748μg、贝母素乙对照品356μg)、5 mL(相当于贝母素甲对照品 935μg、贝母素乙对照品445μg)，再按2.2项下供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果见表1。

表1 贝母素甲与贝母素乙加样回收试验结果(n=6)

2.5 样品含量测定

根据上述方法，测定了3批样品中贝母素甲与贝母素乙的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

试验中，参照2005年版《中国药典(一部)》中浙贝母含量测定项的流动相乙腈－水－二乙胺(70∶30∶0.3)[3]进行试验，贝母素甲和贝母素乙两峰分离完全，供试品溶液中两峰均分离、无干扰，故选择此流动相。

贝母素甲与贝母素乙均为生物碱类物质，根据生物碱在碱性条件下易溶于有机溶剂的特点，在样品提取时选用氨水将样品调至碱性，使生物碱游离出来，再用氯仿提取，制得供试品溶液。

蒸发光散射检测器是一种新型质量型检测器，对于不易挥发的化合物，有无紫外吸收均可检测。该检测器的这一特点完全适用于贝母类生物碱的检测，而且还克服了其他检测方法灵敏度低、操作烦琐、干扰因素多等缺点。2005年版《中国药典(一部)》中没有规定平贝母的含量测定项[3]。本试验将高效液相色谱－蒸发光散射检测器法应用于蛇胆川贝液中平贝母所含贝母素甲与贝母素乙的测定，为产品质量控制提供了试验依据，也为平贝母及含有平贝母的制剂中贝母素甲与贝母素乙的同时测定与研究提供了一种便捷、有效的手段。

[1]王振月，侯素云，王志林，等.不同产地不同物候期平贝母的贝母素乙含量测定研究[J].中药材，2006，29(11):1135.

[2]李 萍，曾令杰，李松林.无紫外吸收的贝母总生物碱定量分析方法研究[J].中国药学杂志，2002，37(8):614.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:人民卫生出版社，2005:65，205.