复方肌苷口服液中肌苷含量的两种测定方法比较

陈叶琴，唐风雷，于忠兴

(江苏省常州市第三医院药剂科，江苏 常州 213001)

肌苷为辅酶类药物，能参与体内能量代谢及蛋白质的合成，具有提高各种酶(特别是辅酶A)的活性及改善机体代谢作用，用于各种肝脏疾病、心脏病、白细胞减少症、血小板减少症、中心视网膜炎、视神经萎缩等。复方肌苷口服液为我院自制制剂，肌苷含量测定的方法采用的是《江苏省药品标准》[1]中的紫外分光光度法(UV法)，而中国药典[2]中肌苷制剂含量测定采用的是高效液相色谱(HPLC)法，现采用两种方法测定肌苷含量并进行比较，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－10AT型高效液相色谱仪，SPD－10A型检测器，岛津N2000型色谱数据工作站;TU－1810型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。肌苷对照品(河南新乡华星药厂，批号为1001061);复方肌苷口服液(本院自制，批号分别为100714，100812，100916，规格为 20 mL/支，肌苷含量 0.4 g);甲醇为色谱纯，水为二次纯化水。

2 方法与结果

2.1 UV 法

2.1.1 溶液制备

精密称取肌苷30.50 mg，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得肌苷质量浓度为305μg/mL)的对照品溶液。精密吸取复方肌苷口服液5.0 mL(约相当于100 mg)，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密吸取稀释液1 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按处方比例配成不含肌苷的溶液，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。

2.1.2 波长确定

吸取对照品贮备溶液1.0 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，于200～400 nm波长范围内扫描。结果溶液在248 nm波长处有最大吸收峰，而阴性对照品溶液无干扰，故选定248 nm为检测波长。

2.1.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密吸取对照品贮备溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0 mL，分别置 50 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以水为空白，在248 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)对质量浓度(C)进行回归，得回归方程 A=0.04597C－0.00587，r=0.9999，肌苷的质量浓度线性范围为 3.05 ～24.4μg/mL。

精密度试验:取同一对照品溶液(12.2μg/mL)，依法重复测定6次。结果的 RSD=0.61%，表明方法精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置，分别于 0，1，3，5，10，24 h时在248 nm波长处测定吸光度。结果的 RSD=1.12%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

回收率试验:精密吸取已知含量的样品2.5 mL(批号为100916，含肌苷 49.40 mg)，分别加入肌苷对照品约 30，50，70 mg，置 100 mL容量瓶中，照2.1.1项下方法制备溶液，在248 nm波长处测定吸光度，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.1.4 样品含量测定

取3批样品，依法制成供试品溶液并测定含量。结果见表2。

2.2 HPLC 法

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromasil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:甲醇－ 水(10 ∶90);检测波长:248 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进量样:20 μL。在该色谱条件下，肌苷的保留时间约为6 min。色谱图见图1。

2.2.2 溶液制备

精密称取肌苷51.20 mg，置100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得肌苷质量浓度为512μg/mL的对照品溶液。精密吸取复方肌苷口服液5.0 mL(约相当于100 mg)，置100 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，再精密吸取稀释液2 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，用0.45 μm的滤膜滤过，得供试品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.2.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密吸取对照品贮备液 2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分别置 100 mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL以各质量浓度(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标进行回归，得回归方程 Y=55452 X－6705.4(r=0.9999)。结果表明，肌苷质量浓度在10.24～35.84μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液(20.48μg/mL)，按拟订的色谱条件进样6次，结果的 RSD=0.70%，表明该法精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，1，3，5，10，24 h时分别进样测定峰面积。结果的 RSD=1.23%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

回收率试验:精密吸取已知含量的样品 2.5 mL(批号为100916，含量 49.40 mg)，分别加入对照品约 30，50，70 mg，置 100 mL容量瓶中，照2.2.2项下方法制备溶液，依法测定。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

取对照品溶液4 mL(含肌苷2048μg)，置100 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，取此对照品溶液和3批样品按2.2.2项下方法制成供试品溶液各20 μL，分别注入色谱仪，按外标法以峰面积计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果比较(标示量%，，n=3)

表2 样品含量测定结果比较(标示量%，，n=3)

3 讨论

复方肌苷口服液除含有肌苷外，还有硒酸脂多糖，但在248 nm波长处不干扰，故样品可不经处理直接测定。本试验分别采用UV法和HPLC法对3批样品中肌苷含量进行测定，结果比较无显著性差异(P＞0.05)，而UV法更具有操作简单，方法便捷、快速，费用低廉，更适合生产时中间体含量及医院制剂测定的优点。

[1]江苏省卫生局.江苏省药品标准[M].南京:江苏科学技术出版社，1985:38.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:205.