食管鳞状细胞癌组织中23种肿瘤相关蛋白的表达*

崔文燕，郭 明，原 园，周福有，张 朋，王伟鹏，赵学科，陈元方，任景丽，王立东#

1)新乡医学院癌症研究中心新乡453003 2)郑州大学第一附属医院河南省食管癌重点开放实验室郑州450052 3)安阳肿瘤医院外科安阳455000 4)磁县医院病理科磁县056500 5)鹤壁市卫生局鹤壁458030 6)郑州大学第二附属医院病理科郑州450014

临床上首次就诊的食管癌患者中，95%以上为中晚期患者［1］，其预后极差，5 a生存率仅为10%左右［2］，临床分期、分化程度和淋巴结转移等被认为是影响食管癌预后的重要因素［3-6］。该研究通过分析食管癌组织中23种肿瘤相关蛋白的表达与食管癌患者淋巴结转移、分化程度及临床分期之间的关系，寻找与食管癌预后相关的重要候选蛋白。

1 材料与方法

1.1 标本来源 标本来自河南省食管癌重点开放实验室积累的2000年至2011年食管癌手术切除标本，且均经病理学证实为鳞状细胞癌。679例患者术前未经放化疗或免疫治疗，其中男440例，年龄38～85(59.2 ±8.4)岁;女 239 例，年龄 33 ～82(60.9 ±7.9)岁;淋巴结转移:有258例，无401例(20例不详);分化程度:低分化321例，中分化292例，高分化41例(25例不详);临床分期:早期66例，中晚期585例(28例不详)。

1.2 23种蛋白的免疫组织化学检测 采用ABC法检测23种肿瘤相关蛋白(各蛋白检测例数见表1)，包括:信号传导相关蛋白、细胞分化增殖相关蛋白、凋亡和修复相关蛋白和细胞黏附相关蛋白等。单克隆抗体(7 种):Fascin、CK5/6、CK20、CD56、CD117、MUC1、AE1/AE3;多克隆抗体(16 种):P53、P63、Ki67、Ezrin、CK、PLK1、CK18、CD34、E-cad、NSE、CTTN、Syn、CgA、S100、Vim、C-myc。ABC 试剂盒和DAB底物试剂盒购自美国Vector公司，小牛冻干血清蛋白购自美国Sigma公司。严格按照试剂盒说明书步骤操作，用已知的食管癌组织切片作阳性对照，用PBS液代替一抗作阴性对照。

根据23种蛋白着色部位的不同，阳性染色评定标准分为2种。①细胞核着色(5种，分别是P63、P53、CD56、Ki67和C-myc):阳性反应呈棕黄色或棕褐色颗粒。定性:无染色为0分，明显高于背景者为1分，有较多棕黄色颗粒者为2分，有大量深棕黄色颗粒者为3分;定量:高倍镜下随机观察至少5个视野，计数阳性细胞，取均值，阳性细胞数比例＜5%为0分，～25%为1分，～50%为2分，＞51%为3分，定性和定量评分之和≤1分者为阴性，＞1者为阳性。②胞质着色(余18种):阳性反应表现为棕黄色或淡黄色颗粒。定性:无染色为0分，明显高于背景者1分，有较多棕黄色颗粒者2分，有大量深棕黄色颗粒者3分。定量:高倍镜下随机观察至少5个视野，计数阳性细胞，取均值，阳性细胞数比例＜5%为0分，～25%为1分，～75%为2分，＞75%为3分。定性和定量评分之和≤1分者为阴性，＞1分者为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0处理数据，运用χ2检验、校正χ2检验或精确概率法分析淋巴结转移、分化程度、临床分期等因素与23种肿瘤相关蛋白表达的关系，缺失数据不参与相关指标的分析。检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 食管癌组织中23种蛋白的表达情况 见表1。在食管癌组织中，阳性率较高(≥80%)的蛋白是AE1/AE3、P63、CK5/6、CK、Ki67、MUC1;其次(50% ～80%)是 CD34、Fascin、E-cad、P53、C-myc、Vim、Ezrin;表达较低(≤50%)的是 NSE、CD117、CK18、PLK1、CD56、CTTN、Syn、S100、CgA、CK20，见表1。

表1 食管癌组织中23种蛋白的表达情况

2.2 23种蛋白与食管癌患者临床病理因素的关系13种蛋白与食管癌患者临床病理因素无关，10种蛋白与食管癌患者临床病理因素有关，见表2。

表2 10种蛋白与患者临床病理因素的关系

3 讨论

该研究分析了23种肿瘤相关蛋白的表达与食管癌患者临床病理因素的关系，发现Syn、CD56和Ki67高表达分别与淋巴结转移、低分化和临床中晚期有关，提示这一组分子变化可能是评价食管癌预后差的重要候选指标;而 P63、E-cad、Fascin、Ezrin、PLK1、Vim和CTTN高表达则分别与淋巴结转移阴性、中高分化和临床早期有关，提示这一组分子变化可能是评价食管癌预后好的重要候选指标。

国内外研究报道这10种蛋白与食管癌预后的关系不尽相同。有研究［7］报道，Syn、CD56和 Ki67高表达与食管癌预后不良有关;P63、E-cad、Fascin、Ezrin、PLK1、Vim和CTTN高表达与食管癌预后好密切相关［8-9］;但也有报道［10-11］Ezrin、Fascin 等蛋白高表达与食管癌预后不良有关。研究结果的不同可能是由于单纯分析某一指标与淋巴结转移、分化程度及临床分期之间的关系，且用于判断蛋白与预后的关系存在很多客观和主观因素，需进一步扩大样本量重复验证，并将这些指标联合检测才能为判断食管癌预后提供更好的依据。

该研究研究结果提示:①食管癌预后过程涉及多种肿瘤相关蛋白，食管癌预后分子基础很复杂。②许多肿瘤相关蛋白表达改变发生在食管癌早期阶段，这些蛋白在早期即可引起机体的免疫反应，产生自身抗体，检测这些自身抗体的血清水平，可在一定程度上反映食管癌病变程度［12-14］，这些指标有可能成为判断食管癌预后的重要分子标志物，为探讨食管癌预后的分子基础提供依据。

该研究所选择的蛋白指标是依据河南、河北几家医院病理科食管癌组织免疫组化指标筛选所得，很显然，这些蛋白并不能完全反映食管癌预后所涉及的全部蛋白，进一步通过人群随访、扩大样本量，验证这些蛋白对食管癌预后的生物学意义，从中优化组合出最具代表性的几组蛋白，制备成检测蛋白芯片，将能提高食管癌早期筛查的灵敏度和特异度，为提高食管癌预后5 a生存率提供新的靶点和思路。

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