皮肤鳞状细胞癌组织中埃兹蛋白和水通道蛋白3的表达*

王 璐，朱 莹，袁耀东，刘林嶓

郑州大学第一附属医院整形外科郑州450052

皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)是起源于表皮或附属器角质形成细胞(keratinocyte，KC)的一种恶性肿瘤，是最常见的非黑素瘤皮肤肿瘤之一，好发于头皮、面颈部等暴露部位的皮肤和黏膜。皮肤SCC常发生于原有慢性皮肤病变如慢性溃疡、烧伤后瘢痕、放射性损伤的基础上，约占皮肤恶性肿瘤的60%左右，好发年龄为50～60岁，然而国外报道在小于40岁的年轻人中发病率也在迅速增长［1］。埃兹蛋白(Ezrin)是一种重要的膜-细胞骨架联结蛋白，对细胞形态、分化、运动性和细胞与细胞、细胞与间质间的黏附有重要的调节作用［2］，与肿瘤的浸润和转移有关。水通道蛋白3(aquaporins-3，AQP3)属于AQPs家族的水甘油通道类，在液体稳态中发挥重要作用［3］，与多种疾病有关［4-6］。作者采用免疫组化染色方法检测皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3的表达，并分析其临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2008年至2010年郑州大学第一附属医院手术切除并经病理学确诊存档的皮肤SCC蜡块标本65例，患者男36例，女29例;高分化24例，中分化23例，低分化18例;有颈部淋巴结转移9例，均未发现远处器官转移;均未接受抗肿瘤治疗。以20例正常皮肤组织标本作对照，患者男12例，女8例。

1.2 Ezrin和AQP3的检测方法 采用免疫组化染色SP法。鼠抗人Ezrin单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司，山羊抗人AQP3多克隆抗体购自晶美生物工程有限公司，SP免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。实验步骤严格按照试剂盒说明书进行。用已知染色阳性的SCC组织切片作阳性对照，以PBS代替一抗孵育组织切片作阴性对照。

1.3 结果判定 2个蛋白阳性反应均呈棕色颗粒状分布于胞膜和(或)胞质，采用双盲法，观察至少10个代表性高倍视野。按着色强度计分，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;按阳性细胞百分数计分，＜5%为0分，5% ～为1分，25% ～为2分，50% ～为3分。两项评分相加，0～1分判为阴性，≥2分判为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0进行统计学处理。皮肤正常和SCC组织中Ezrin和AQP3阳性表达率的比较采用χ2检验，有无淋巴结转移的SCC组织中2者阳性表达率的比较采用校正χ2检验，不同分化程度SCC组织中2者阳性表达率的比较采用确切概率法，SCC组织中2者表达的关系用列联系数评价，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 皮肤正常和SCC组织中Ezrin和AQP3的表达 见图1和表1。

图1 皮肤正常及SCC组织中Ezrin(A)和AQP3(B)的表达(SP，×400)

表1 皮肤正常和SCC组织中Ezrin和AQP3的表达 例(%)

2.2 皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3的表达与临床病理特征的关系 见表2。

表2 皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3的表达与临床病理特征的关系 例(%)

2.3 皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3表达的关联性 见表3。

表3 皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3表达的关联性

3 讨论

Ezrin是一种重要的膜-细胞骨架联结蛋白，在细胞骨架和细胞膜之间起连接作用，它将胞外信号转导到细胞骨架，影响细胞骨架蛋白的构象和分布，进而改变细胞的运动能力和功能的稳定性［2］。Ezrin分布于各种类型的上皮细胞，在肿瘤中异常高表达并且表达位置显著改变。Moilanen等［7］研究表明，不同分化程度的肿瘤组织内Ezrin的表达强度和表达定位不相同，因此推断Ezrin分布异常将会导致细胞结构及生理功能发生改变，从而参与肿瘤的发生发展过程。激活状态的Ezrin可使E-cadherin在细胞内聚集而在细胞膜的表达下降，且降低E-cadherin从细胞内向细胞膜的转运速率，从而参与肿瘤的进展［8］。Ezrin还可能通过激活PI3-K/AKT路径阻止到达转移灶的肿瘤细胞凋亡，从而促进肿瘤形成转移灶［9］。激活的Ezrin能够与CD95特异性连接，促使CD95与肌动蛋白连接，导致细胞膜极性改变，从而使细胞对CD95介导的细胞凋亡途径的敏感性发生改变［10］。李留霞等［5］发现 Ezrin蛋白不仅与肿瘤的恶性程度相关，而且与肿瘤的分化程度相关。作者的研究结果显示，Ezrin在皮肤SCC组织中的表达明显高于正常皮肤组织，且其表达随SCC分化程度的降低而增强，与患者的淋巴结转移无关，提示Ezrin的表达异常可能参与了皮肤SCC的发生、发展和转移，这也为皮肤SCC的临床诊断、治疗及预后判断提供了新思路。

在哺乳动物细胞中陆续发现了共13种亚型水通道蛋白，即 AQP0～AQP12［3-11］，分别分布在不同的组织、细胞中。皮肤中的AQPs主要是AQP3［12］。AQP3不仅能转运水，还能转运甘油和尿素，因此又称水-甘油通道，在液体稳态中发挥重要作用［3］。许多疾病可能与水通道蛋白功能异常或调节失控有关［4］。Hara-Chikuma等［13］发现 AQP3 缺失小鼠皮肤基底层细胞的增殖和迁移能力减弱;将AQP3缺失小鼠暴露在致皮肤癌的因素下，它们对皮肤癌表现出明显的耐受性，可见AQP3是皮肤癌发生过程中的一个重要环节。目前已有研究［14］表明，AQPs抑制剂可显著抑制肿瘤转移。作者发现，AQP3在皮肤SCC组织中的阳表达性率显著高于正常皮肤;SCC组织中细胞分化程度越低，AQP3的表达越少，提示AQP3的表达与皮肤SCC的分化有关，但具体的机制有待进一步研究。因此，检测皮肤SCC组织中AQP3的表达有可能成为了解肿瘤分化情况的辅助指标，为皮肤 SCC的防治提供了一个新的切入点。

研究还证实皮肤SCC组织中Ezrin和AQP3的表达呈正关联，提示Ezrin和AQP3的共同表达失调可能是皮肤SCC发生、发展的机制之一，也可能对预后评估有一定的意义。

综上所述，Ezrin与AQP3的高表达可能参与了皮肤SCC的发生、发展和转移，并与其恶性程度相关，这也为皮肤SCC的临床诊断、治疗及预后判断提供了新的思路。

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