人参强心滴丸中梓醇的含量测定

侯芳洁 李春花 陈琳

人参强心滴丸由人参、丹参、生地黄、蟾酥等四味中药组成，主治慢性心功能不全。方中生地黄的有效成分是梓醇，但因梓醇是环稀醚萜苷类，其结构不稳定而易被破环［1］。为确保人参强心滴丸的质量，本试验以生地黄有效成分梓醇的含量为指标，采用高效液相色谱法进行测定，报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱系统 SPD-10AVD，SPD-10A VP紫外检测器，手动进样器，N2010色谱工作站(浙江大学)，TD200/型电子天平(天津天平仪器有限公司)，TG328B型分析天平(上海精科仪器厂)，KQ-500DV型数控超声清洗机(昆山市超声仪器有限公司)，DHG-9070A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)，1810-BC石英自动双重纯水蒸馏器(江苏省金坛市白塔石英玻仪厂)。

1.2 试剂与药品 乙腈(色谱纯，德国Fisher Scientific，批号:061495-053786)，双蒸水(自制)，梓醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110808-200508)。人参、丹参购自乐仁堂药房，生地黄、蟾酥购于安国药材市场，经鉴定均符合2010版药典规定，人参强心滴丸(本课题组自制，批号:20100301，20100302，20100303)。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件:色谱柱:Kromasil C18(4.6 ×200 mm，5 μm)柱，流动相:水-乙腈(99.5:0.5)，流速:1.0ml/min，检测波长:210 nm，进样量:20 μl，柱温:20℃。此条件下，梓醇保留时间在7.80min，梓醇色谱峰与其他色谱峰达到基线分离，且峰形稳定。理论塔板数:按梓醇峰计算不低于5000 。

1.3.2 对照品溶液的制备:精密称取用五氧化二磷减压干燥24 h的梓醇标准品10.12mg，置100ml容量瓶中，双蒸水定容，溶解，备用。

1.3.3 供试品溶液制备:精密称取人参强心滴丸4.00 g，研碎，加双蒸水适量，超声提取40min，待冷却后定容至50ml。

1.3.4 阴性样品溶液的制备:依处方比例，用人参、丹参和蟾酥三味药材制备缺生地黄的滴丸，根据1.3.3项，制备阴性样品溶液。

2 结果

2.1 系统适应性实验 精密吸取已制备好的对照品、供试品和阴性样品溶液，照1.3.1项下色谱条件，各进样20 μl。结果表明，供试品与对照品溶液均在相同保留时间内出现梓醇吸收峰，阴性对照品液在该处无吸收峰。见图1～3。

图1 梓醇标准品色谱图

图2 人参强心滴丸样品色谱图

图3 人参强心滴丸阴性色谱图

2.2 标准曲线的制备 分别精密移取对照品溶液1、2、4、6、8、10ml至10ml容量瓶中定容。将所配不同浓度溶液分别按色谱条件进样，测峰面积，并以梓醇的峰面积Y为纵坐标对样品浓度X(mg/ml)进行回归，得标准曲线方程:Y=4058433X+95959.7589(r=0.9996，n=6)。在上述色谱条件及 0.01012～0.1012mg/ml范围内，梓醇的峰面积(Y)与浓度(X，mg/ml)呈良好的线性关系。

2.3 精密度实验 取对照品溶液，连续进样5次，按上述色谱条件进行检测，测定梓醇峰面积，RSD为2.89%(n=5)，结果表明该方法精密度良好。

2.4 稳定性实验 取上述同一供试品液和对照品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h 取样，按上述色谱条件测定峰面积，RSD 分别为1.20%和2.87%。该结果表明，供试品液和对照品溶液在12 h内均稳定。

2.5 重现性实验 精密称取同一批次的人参强心滴丸4.00 g，按上述方法分别制备6份供试品溶液，进行含量测定，样品中梓醇含量的RSD为2.38%(n=6)。结果表明，该测定方法的重现性良好。

2.6 加样回收率实验 称取已知含量的同一批滴丸9份，3份为一组，按样品含量的80%、100%、120%添加对照品，照供试品项下制备，测定，计算回收率。样品的平均加样回收率为99.04%，RSD 为1.69%(n=9)。见表1。

表1 人参强心滴丸加样回收率实验结果

2.7 样品含量测定 取三批人参强心滴丸(批号:20100301，20100302，20100303)，依法制成供试品液，每批2份，测定滴丸中梓醇的含量，由实验结果可知，人参强心滴丸中梓醇含量平均值为0.3704mg/g。见表2。

表2 人参强心滴丸中梓醇含量

3 讨论

3.1 检测波长和流动相的确定 将标准品溶液进行紫外扫描，选择其λmax作为检测波长(210 nm)。刘海洋等［2］流动相为:水-乙腈(99∶1)，杨菁等［3］流动相为:0.1% 磷酸-乙腈(99∶1)，经预实验，本实验选择流动相为:水-乙腈(99.5∶0.5)，在该条件下梓醇峰能与其他峰基线分离，且保留时间较短(7.80min)，大大提高检测效率。

3.2 梓醇含量的确定 人参强心滴丸的平均丸重为0.05 g，本实验以梓醇计平均含量为0.3704mg/g。考虑到药材来源、生产损耗、储存等因素的影响，按平均值的80%计算，暂定本品每丸梓醇含量不小于0.0148mg/丸。

1 王宏洁，边宝林，杨健.地黄中梓醇变化条件的探讨.中国中药杂志，1997，22:408.

2 刘海洋，李冀，雷勇，等.地黄中梓醇的含量测定及其提取分离工艺研究.中医药信息，2010，27:87-88.

3 杨菁，刘影，白剑，等.生地黄中梓醇纯化工艺优选.中成药，2010，32:416-417.