肝病相关自身抗体检测在自身免疫性肝病诊断中的价值研究

高会霞 刘玉珍

自身免疫性肝病是一组病因和发病机理尚不完全清楚、但多数认为和自身免疫有关的肝脏疾病，临床常见的主要有自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)及原发性硬化性胆管炎(PSC).早期诊断及治疗对这些疾病发展及预后至关重要，而实验室检查特别是自身抗体检查对这些疾病的诊断有重要意义。本研究对我院2914 份自身抗体检验结果并结合临床进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2007年10月至2010年10月我医院门诊及住院就诊肝病患者2914 例送检标本，并对自身抗体阳性529病例的查阅临床资料。乃入病例中，男139例，女390例;平均年龄(49±15)岁;诊断为PBC的61例和AIH的57例患者均符合美国肝病学会2000年版PBC和AIH诊疗指南。

1.2 方法

1.2.1 检测患者外周血自身抗体及其滴度:采用德国欧蒙实验诊断公司肝脏马赛克，间接免疫荧光法检测患者外周血自身抗体:抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、，抗肝细胞膜抗体(LMA)、抗肝细胞溶质抗原1型抗体(LC-1)、抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)，抗线粒体抗体(AMA)-M2亚型，。待检血清自1:100起稀释，与组织细胞孵育30分钟;加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗体结合30分钟;洗片、封片后荧光显微镜观察结果。组织或细胞内出现特异性绿色荧光、血清稀释度〉1∶100为阳性。

1.2.2 ELISA法检测全部血清的病毒学肝炎指标:HbsAg、抗-HBs、HbeAg、抗-HBe、抗-HBc、HAVIgM、HCVIgG、HEVIgM、CMV-IgM、EB-IgM等。

1.3 统计学分析应用SPSS 11.5统计软件，计量资料以表示，采用t检验，计数资料以例数或百分率进行描述，应用四格表χ2检验，P ＜0.05为差异有统计学意义

2 结果

2.1 2714 份临床送检标本中肝病相关自身抗体检测结果自身抗体阳性472例，阳性率17.4%，抗核抗体(ANA)阳性418例，阳性率15.4%，抗线粒体抗体(AMA)阳性124例，阳性率4.57%，抗平滑肌抗体阳性91例，阳性率3.35%，抗肝肾微粒体抗体(LKM)阳性12例，阳性率0.59%，抗肝细胞膜抗体阳性(LMA)8例，阳性率0.29%，抗肝细胞溶质抗原1型抗体(LC-1)阳性5例，阳性率0.18%，抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)阳性3例，阳性率0.11%，2914 例送检标本中诊断为AIH 59例，检出率为2.17%，诊断为 PBC 61例，检出率为2.24%。自身抗体阳性患者74.57%诊断为病毒性肝炎及相关疾病。见表1。

表1 472例不同肝病患者自身抗体检测结果 例(%)

2.2 不同肝病患者自身抗体与临床诊断的关系 PBC组和AIH组血清中各种自身抗体阳性率及滴度明显高于其他肝病组，差异有统计学意义(P ＜0.01)。77.0%的PBC患者 ANA阳性，滴度均为1∶320以上，而且PBC患者中73.8%的AMAM2亚型阳性;98.3%的AIH患者ANA阳性，滴度均为1∶320以上，在AIH中可见23.7%的ASMA阳性，且98%荧光模型为滴度大于1∶320的抗肌动蛋白型，并可见20.3%的LKM、8.5%的LC-1、3.4%的LSP抗体阳性。在其他肝病中多见ANA抗体阳性，且多为低滴度。见表1。

2.3 AIH和PBC的荧光模型 ANA的核型特征显著，抗核模型抗体在PBC中的比例51.1%显著高于在AIH中比例6.9%，AIH中多以颗粒型、着丝点型、以及二者的混合核型常见。见图 1、表 2。

图1 ANA在AIH与PBC中的荧光模型

表2 ANA阳性的AIH和PBC患者的荧光模型例(%)

2.4 ANA检测阳性滴度≥1∶320、1∶100及阴性乙型肝炎患者肝功能比较 ANA检测阳性滴度≥1∶320乙型肝炎患者与滴度1∶100及ANA阴性乙型肝炎患者ALT AST ALP GGT之间均数比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 ANA检测阳性滴度≥1∶320、1∶100及阴性乙型肝炎患者肝功能指标比较 U/L

表3 ANA检测阳性滴度≥1∶320、1∶100及阴性乙型肝炎患者肝功能指标比较 U/L

ALT AST GGT ALP TBIL ALB ANA阳性≥1∶320 512±47 312±15 411±287 504±371 58±35 32±9类别187±21 117±33 92±61 142±73 63±37 33±10 ANA阳性1∶100 212±13 110±26 88±55 139±67 53±46 31±11 ANA阴性

3 讨论

近年来，随着自身抗体的检测越来越受到临床及实验室的重视，临床医生对自身免疫性肝病认识程度明显提高，相继有文章报道，但对于自身免疫性肝病的发病率及患病率的报道较少。本研究连续收集我院门诊及住院就诊肝病患者2914 例送检标本，具有一定的参考价值。

从查阅到的529例患者的临床资料分析，AIH患者59例，检出率为2.17%，其中ANA阳性率最高(58/59)98.3%，且滴度大于1∶320，可见ANA的检测在AIH的诊断中的重要性。未发现ANA较特定的荧光模型，表明ANA单个抗体无诊断价值。在AIH中可见23.7%的ASMA阳性，且98%荧光模型为滴度大于1∶320的抗肌动蛋白型(抗-actin)，其他肝病患者中ASMA阳性率低，且多为低滴度。可见高滴度的抗actin是Ⅰ型AIH的特异性标志，与报道一致，故临床上开展抗actin抗体检测能增加Ⅰ型AIH的诊断率。LKM是Ⅱ型AIH的标志性抗体，本组资料中LKM阳性率(12/59)20.3%，显著高于其他肝病，因此检测LKM可提高ANA阴性的AIH患者诊断率。LMA阳性率(8/59)13.6%，LC-1阳性率(5/59)8.5%，LSP阳性率(3/59)3.4%，这几种抗体是Ⅱ型AIH另三个标志性抗体，对AIH的诊断具有较高的特异性。

本研究中PBC的检出率为2.24%，AMA阳性是本病最重要的免疫学诊断指标，AMAM2亚型为 PBC 特异性抗体［1，2］，通过检测AMA-M2可早期发现PBC［3］。本资料61例 PBC患者中AMAM2亚型的阳性率是74%，在其他肝病中未见AMAM2亚型阳性，说明M2抗体对PBC诊断最具特异性，与国内外的报道一致［4］。PBC患者出现的ANA的阳性率为77%，其主要荧光模型中为核膜型(51.1%)、着丝点型(21.1%)，并显著高于其他肝病，可见ANA荧光模型分析对AMA阴性的PBC有相当重要的意义。

本研究结果还提示病毒性肝炎(HBV、HCV、HEV等)可见低滴度(1∶100)的 ANA、ASMA、AMA，高滴度少见，可见低滴度自身抗体对自身免疫性肝病无明确诊断意义。对于病毒性肝炎患者临床查出病毒指标后，不再对病人进行自身抗体检测，而明确此次发病原因是自身免疫性疾病并发了病毒感染还是病毒性肝炎发病是非常重要的，通常高滴度自身抗体的存在与自身免疫性疾病密切相关［4，5］。本文比较了 ANA滴度≥1∶320、1∶100 及阴性乙型肝炎患者肝功能，发现 ANA≥1∶320阳性乙型肝炎患者的ALT、AST、ALP GGT明显高于ANA 1∶100及阴性乙型肝炎患者，提示病毒感染过程中自身免疫反应加重了患者肝损伤［6］，而临床上治疗两种疾病方法不同，如将ANA≥1∶320阳性乙型肝炎患者进行抗病毒治疗，可能更加增强自身免疫性细胞，将会加重原有病情。因此在为患者进行抗病毒治疗前，需进行自身抗体及滴度检测以实施有针对性的个体治疗［7，8］。

综上所述，自身抗体检测不仅对自身免疫性肝病的临床诊断、鉴别诊断、治疗的具有重要意义，对其他抗病毒治疗的乙肝患者进行自身抗体检测有助于疾病的治疗。

1 Margare FB，David EJJ.Antimitochondral and other autoantibodies in primary biliary cirrhosis.Autoimmune liver disease.2nd ed.Amstendam:Elsevier，1998.287-304.

2 Talwalkar JA，Lindor KD.Primary bilary cirrhosis.Lancet，2003，362:3-61.

3 Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.The follow-up of a symtom atic persons with antibodies to pyruvate dehydrogenase in adullt population samples.J Gastroentenrol，2001，36:248-254.

4 马燕，林炳亮，严颖，等.自身免疫性肝病的回顾性研究.国际内科学杂志，2008，35:501-504.

5 刘燕敏，闫惠平，汪俊韬.肝功能异常患者中自身抗体及自身免疫性肝病的检测.中华肝脏杂志，2004，12:360-362.

6 张海萍，闫惠平，冯霞，等.乙肝病毒感染者血清抗核抗体特征及临床相关性.首都医科大学报，2007，2:154-157.

7 张利方，李方，石莉萍，等.自身免疫性肝炎和乙型肝炎患者自身抗体检测及对比分析.微循环学杂志，2010，20:40-41，46.

8 张利方，郑山根，周萍.自身免疫性肝病患者自身抗体检测及临床意义.免疫学杂志，2009，25:416-417.