姜黄素自微乳颗粒的研究

2012-05-01国大亮朱晓薇张艳军

药学研究 2012年6期

国大亮，朱晓薇，张艳军

(天津中医药大学，天津 300193)

姜黄素是从姜科植物姜黄(Curcuma longa L.)的干燥根茎中提取的一种二苯基庚二酮类化合物［1］。姜黄素是姜黄的主要有效成分之一，有重要的经济价值和广泛的药理作用，动物实验和文献报道表明其具有降血脂、抗肿瘤、抗氧化、抗凝、抗淀粉样蛋白聚合、抑制HIV－1整合酶活性等作用［2］。姜黄素亲脂性强，难溶于水，对酸、碱、光、热、金属离子均不稳定，口服吸收差，生物利用度低，因而限制了姜黄素在临床上的应用和进一步的研究开发［3］。

鉴于此，本实验在无水的条件下，首先将姜黄素、油相、非离子表面活性剂、助表面活性剂按适当比例混合，制备得较稳定的姜黄素自微乳。口服姜黄素自微乳后，在胃液中因胃蠕动和乳化剂作用下自发形成O/W型微乳，微乳可提高姜黄素的水溶性，提高其口服吸收和生物利用度［4］。由于姜黄素自微乳室温下呈液态，不宜携带与服用，因此本实验又筛选适宜的吸收剂，令姜黄素自微乳固化，制成了颗粒剂，使自微乳的携带与服用更加方便。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TN－100B型托盘天平(上海精科天平)，恒温磁力加热搅拌器(江苏省金坛市荣华机器制造有限公司，85－2型)，精密电子天平(上海精密科学仪器有限公司，FA1004N)。

1.2 试药肉豆蔻酸异丙酯(国药集团化学试剂有限公司，化学纯)，聚乙二醇400(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，聚氧乙烯蓖麻油EL 35(徳国BASF公司)，淀粉(天津市干腌食品公司，食品级)，糊精(西安宏昌药业)，微晶纤维素(台湾明台化工股份有限公司)，葡萄糖(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，蔗糖粉(天津中医药大学药物制剂实验室提供)，甘露醇、枸橼酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯)，山梨酸(天津市北方天医化学试剂有限公司，分析纯)，聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(天津市科密欧化学试剂有限公司，化学纯)，聚乙二醇8000(天津市瑞金物化学品有限公司，化学纯)，聚维酮(天津市科密欧化学试剂开发中心)，姜黄素标准品(中国药品生物制品检定所，批号0823－9802)，其余试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 姜黄素自微乳的制备称取32g聚氧乙烯蓖麻油EL、8 g聚乙二醇400，置于100mL三角瓶中，37℃水浴加热，以恒温磁力加热搅拌器搅拌30min，加入10g肉豆蔻酸异丙酯，搅拌均匀。精密称取2g姜黄素，少量多次加入三角瓶中，室温搅拌24 h。

2.2 吸收剂的筛选将吸收剂粉碎，分别过100目筛，备用。称取1.00g姜黄素自微乳，置于小蒸发皿中，少量多次加入吸收剂，以玻棒搅拌均匀，将吸附固化的自微乳过筛，以自由通过14目筛，轻压后可通过60目筛为度，记录加入吸收剂的质量，分别计算各吸收剂的吸收比(固化比=自微乳质量:吸收剂质量)，重复3次，计算平均值。

2.3 自微乳颗粒的制备称取5 g姜黄素自微乳，加入吸收剂搅拌均匀，滴入适量30%聚维酮溶液，制成软材，以14目筛湿法制粒，50℃干燥，整粒，16目筛整粒，密闭保存。

2.4 自微乳颗粒的溶出分别量取250mL人工胃液，加于溶出杯中，依2010版《中国药典》附录“溶出度测定法”，设定转速为 100 rpm，于 0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10min 吸取溶出液3mL，以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以人工胃液为空白，于420 nm测定吸光度，以溶出液最大吸光度为100%，求算各时间点相对累积溶出率，以时间为横坐标，相对累积溶出率为纵坐标，绘制累积溶出曲线，以excel软件按式－1进行Weibull概率模型拟合［5］，求算Td和T50。

2.5 姜黄素自微乳颗粒的含量测定

2.5.1 供试品溶液的制备取约20mg姜黄素自微乳颗粒，精密称定，置于50mL量瓶中，加入约40mL甲醇，超声震荡5min，溶液自然冷却至室温，以甲醇稀释至刻度，混匀，精密吸取5mL稀释至10mL，混匀，取适量溶液以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以甲醇为空白，于420 nm测定吸光度，外标法计算含量。

2.5.2 线性范围精密称取2.8mg姜黄素标准品，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密吸取此溶液，分别稀释成浓度为 4.48、3.36、2.24、1.12、0.56 μg·mL－1的溶液，于420 nm测定吸光度，以姜黄素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标进行线性回归，建立回归方程。姜黄素在0.26～5.20 μg·mL－1范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.1964X－0.0048，相关系数 R2=0.9999。

2.5.3 精密度以甲醇为空白对照，分别取姜黄素标准品溶液高浓度(4.48 μg·mL－1)、中浓度(2.24 μg·mL－1)、低浓度(1.12 μg·mL－1)，以甲醇为空白，于 420 nm 下测定吸光度，连续测定5次，求算RSD。高浓度的RSD为0.15%，中浓度的RSD为0.39%，低浓度的RSD为0.97%。

2.5.4 稳定性将2.24 μg·mL－1的姜黄素标准品溶液室温放置，分别于 0、2、4、6、8、10 h 取样，以甲醇为空白，于 420 nm测定吸光度，计算RSD。姜黄素标准品溶液在测定条件下10 h内稳定，RSD为1.13%。

2.5.5 回收率取空白颗粒适量，置于50mL量瓶中，加入姜黄素标准品溶液0.5mL，以甲醇稀释至刻度，超声震荡5min，取适量溶液以0.45μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，以甲醇为空白，于420 nm测定吸光度，外标法测定姜黄素含量，计算回收率和RSD。姜黄素平均加样回收率为100.31%，RSD 为 0.80%。

3 实验结果

3.1 吸收剂的选择多糖类辅料对姜黄素自微乳有较好的吸附性，糖醇酸类辅料的吸附性次之，聚乙二醇类辅料的吸附性较差，但枸橼酸和山梨酸吸附性最差。固化比详见表1。

表1 吸收剂的固化比

3.2 自微乳颗粒的溶出速率从每类吸收剂中选择吸收比最小的两种吸收剂制备自微乳颗粒，以人工胃液为溶出介质测定颗粒的溶出速率，经Weibull概率模型拟合，可见微晶纤维素和甘露醇的Td和T50明显小于其他吸收剂，由于纤维素类吸收剂一般对药物都有一定吸附损失，综合考虑以甘露醇作为吸收剂制备姜黄素自微乳颗粒剂较为合适。以甘露醇为吸收剂的姜黄素自微乳颗粒外标法测得姜黄素含量为0.63%。结果如图1和表2所示。