扎冲十三味丸的质量标准研究

许 勇，诸艳蓉，郏征伟，王 柯，季 申

(上海市食品药品检验所，上海 201203)

扎冲十三味丸是由石菖蒲、诃子、木香、麝香、沉香等十三味中药制成的水丸，具有祛风通窍，舒筋活血、镇静安神等功效。原质量标准中已有显微鉴别、铁盐的化学鉴别项等。为控制药品质量，保证临床用药的安全性和有效性，我们建立了用薄层色谱方法鉴别处方中诃子、木香、石菖蒲、沉香四味药材，气相色谱法鉴别处方中人工麝香，并采用高效液相色谱法对处方中石菖蒲的活性成分α－细辛醚进行了测定，建立的定性、定量方法均简便、准确、专属性强，可有效地控制本品的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外－可见光检测器，HP6890气相色谱仪，Chemstation色谱工作站。

1.2 试药 沉香、石菖蒲对照药材及没食子酸、去氢木香烃内酯、木香烃内酯、麝香酮、α－细辛醚对照品均由中国药品生物制品检定所提供。样品:扎冲十三味丸5批，分别由赤峰天奇制药有限责任公司、内蒙古库伦蒙药厂、内蒙古大唐药业有限公司提供，阴性样品由赤峰天奇制药有限责任公司提供。甲醇为色谱纯(Merck公司)，其余试剂均为分析纯，由中国医药(集团)上海化学试剂公司提供。

2 鉴别

2.1 诃子的薄层鉴别 取本品5 g，研细，加乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取按处方比例除去诃子的阴性样品5 g，同法制成阴性样品溶液。吸取上述三种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯 －甲酸(6∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品液无干扰，见图1。

图1 诃子TLC图谱

2.2 木香的薄层鉴别 取本品1.2g，研细，加二氯甲烷10mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取去氢木香烃内酯、木香烃内酯对照品，分别加二氯甲烷制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再取按处方除去木香的阴性样品1.2g，同法制成阴性样品溶液。吸取上述四种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－环己烷(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品液无干扰，见图2。

图2 木香TLC图谱

2.3 沉香的薄层鉴别 取2.2项下的供试品溶液，作为供试品溶液。另取沉香对照药材2.5 g，加石油醚10mL，超声处理20min，放冷，滤过，滤液浓缩至约1mL，作为对照药材溶液。再取按处方比例除去沉香的阴性样品1.2g，同法制成阴性样品溶液。吸取上述三种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。阴性样品液无干扰，见图3。

图3 沉香TLC图谱

2.4 石菖蒲的薄层鉴别 取2.2项下的供试品溶液，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.5 g，加石油醚10mL，浸泡12 h，超声处理30min，放冷，滤过，滤液浓缩至约1mL，作为对照药材溶液。再取按处方比例除去石菖蒲的阴性样品1.2g，同法制成阴性样品溶液。吸取上述三种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯(8∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。阴性样品液无干扰，见图4。

图4 石菖蒲TLC图谱

2.5 人工麝香的气相色谱鉴别 取本品5 g，研细，加70%甲醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取按处方比例除去人工麝香的阴性样品5 g，同法制成阴性样品溶液。再取麝香酮对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。以聚乙二醇(PEG－20M)为固定相的弹性石英毛细管柱，柱长30 m，起始温度70℃，以每分钟10℃的速率升温至230℃，保持5min。分别取上述溶液各1μL，注入气相色谱仪测定。供试品色谱中呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。阴性样品液无干扰，见图5。

图5 气相色谱图

3 α－细辛醚的含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱:ULTIMATE XB－C18(4.6mm×250mm，5μm);以甲醇为流动相A，水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱;流速0.8mL·min－1;检测波长:257 nm;柱温30℃;进样量:10μL，理论板数按α－细辛醚峰计算，不低于8000。结果样品中α－细辛醚与相邻峰分离度大于1.8，阴性样品溶液在与α－细辛醚色谱峰相同位置处无干扰峰，表明样品中其他成分对α－细辛醚的测定无干扰，见图6。

表1 梯度洗脱表

3.2 对照品溶液的制备 精密称取α－细辛醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含20 μg的溶液，即得。

图6 高效液相色谱图

3.3 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，混匀，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液20mL，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备 取按处方除去石菖蒲的阴性样品，按3.3项下的制备方法制成阴性对照溶液。

3.5 线性关系考察 精密称取α－细辛醚对照品适量，加甲醇制成浓度为86.1 μg·mL－1的对照品溶液①和浓度为8.61 μg·mL－1的对照品溶液②。分别精密吸取对照品溶液① 0.5μL、1μL、5μL、10μL;对照品溶液② 5μL、10μL 注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(ng)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析，得回归方程为:Y=4.94X+0.93，r=0.9999(n=5)。结果表明，α－细辛醚在4.305～861 ng范围内进样量与峰面积线性关系良好。

3.6 精密度试验 精密吸取8.61 μg·mL－1的对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定，计算α－细辛醚峰面积的RSD为0.1%，结果表明仪器精密度良好。

3.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0、3、6、17、34 h 进样测定，结果 α－细辛醚峰面积的RSD为1.8%。表明供试品溶液在34 h内基本稳定。

3.8 重复性试验 取同一批样品6份，分别按“3.3”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，α－细辛醚平均含量为18.37 μg/丸，RSD为1.0%。表明实验方法重复性良好。

3.9 加样回收率试验 取本品粉末约0.75 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，一式9份，以3份为一组，分别精密加入α－细辛醚对照品溶液① 1.2mL、1.0mL、0.8mL，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30min，放冷，再称定重量，分别用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样分析，记录峰面积，测定，结果见表2。

表2 α－细辛醚准确度试验

3.10 样品测定 按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，测定5批样品中α－细辛醚的含量，用外标法计算，结果见表3。

表3 α－细辛醚样品测定结果

4 讨论

4.1 木香、沉香、石菖蒲的薄层鉴别 木香中的主要标志性成分为木香烃内酯和去氢木香烃内酯。试验中，利用木香烃内酯和去氢木香烃内酯极性小、易溶于三氯甲烷、二氯甲烷等有机溶剂的特点，采用毒性较小的二氯甲烷做溶剂，超声提取样品。为了简化试验步骤，沉香、石菖蒲的薄层鉴别，亦采用该供试品溶液进行薄层鉴别，得到了满意的结果。

4.2 麝香的气相色谱鉴别方法 处方中的人工麝香为名贵药材［1］，原标准中并未建立其气相色谱鉴别，为了控制药品的质量，在试验过程中，我们研究摸索了麝香的气相鉴别方法。因本品为水丸，易溶于一定浓度的甲醇溶液，不易溶于乙酸乙酯等有机溶剂，因此，在样品的前处理过程中，采用70%甲醇超声提取的方式，但麝香酮对照品不易溶于70%甲醇溶液，因此采用了乙酸乙酯配制麝香酮对照品溶液。

4.3 石菖蒲测定成分的选择 石菖蒲为天南星科植物石菖蒲(Acorus tatarinowii Schott)的干燥根茎。具有开窍豁痰、醒神益智、化湿开胃等功效［1］。石菖蒲含有大量的挥发油，其主要功效成分有α－细辛醚和β－细辛醚［2～4］等，α－细辛醚和β－细辛醚是顺反异构体，因考虑到β－细辛醚较不稳定，易在特定条件下转化为α－细辛醚［5］，故最终确定α－细辛醚为石菖蒲含量测定的指标性成分。

4.4 α－细辛醚含量测定检测波长的确定 经二极管阵列检测器进行紫外光谱扫描，样品色谱图中α－细辛醚色谱峰的紫外光谱与对照品一致，在257 nm处有最大吸收，故确定检测波长为257 nm。

4.5 α－细辛醚含量测定提取方法的选择 α－细辛醚的含量测定方法文献已报道的有气相色谱法［5］、高效液相色谱法［6］等，但复方制剂扎冲十三味丸中α－细辛醚的含量测定方法未见报道。在试验中采取回流提取、超声提取等多种方法进行了试验，结果超声处理提取效率最高，故采用超声处理的提取方式。同时我们对70%甲醇、90%甲醇、甲醇、乙醇4种提取溶剂进行了考察，结果，乙醇的提取效率最低，而随着甲醇比例的提高，α－细辛醚的提取效率显著增加，当采用纯甲醇进行提取时，α－细辛醚的提取效率最高。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［2］郭玫，郭力，董晓萍.石菖蒲中α、β－细辛醚含量的测定［J］.成都中医药大学学报，1999，22(4):26 －27.

［3］董小萍，邓放.石菖蒲质量标准研究进展［J］.成都中医药大学学报，2001，24(1):60 －63.

［4］陈兴权，赵天生，李永昕，等.石菖蒲挥发油制备α－细辛醚的研究［J］.精细化工，2000，17(7):376 －378.

［5］魏立平，吴玫涵.用气相色谱法同时测定石菖蒲挥发油中α－细辛醚和β－细辛醚的含量［J］.解放军药学学报，2005，21(1):62 －64.

［6］陈泽彬，陈日来，陈连剑，等.小儿遗尿分散片中α－细辛醚的含量测定［J］.中国现代药物应用，2010，4(11):1－2.