大枣多糖对S-180瘤细胞杀伤性实验研究

张仙土 付承林 陈灵斌 陈慧 林平 陈佳玉

[摘要] 目的 探讨大枣多糖对S-180瘤细胞的杀伤性及应用。 方法 将200只荷瘤BALB/c裸鼠按瘤体大小随机分为对照组，低浓度组，中浓度组，高浓度组各50只，每日分别给予腹腔注射生理盐水0.2 mL，大枣多糖0.05 g/kg，0.15 g/kg，0.25 g/kg。14 d后断颈法处死裸鼠，对比四组的抑瘤率，肿瘤细胞生长周期时间，裸鼠生存时间和病理组织学观察。 结果 大枣多糖浓度越高抑瘤率越高，肿瘤细胞生长周期时间越短，裸鼠生存时间越长。病理组织观察可见明显改变，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 大枣多糖对S-180瘤细胞具有一定的杀伤作用，为多糖治疗骨髓瘤提供了理论依据，具有较大的科学价值和实用性。

[关键词] 大枣多糖；S-180瘤细胞；裸鼠；杀伤性

[中图分类号] R965[文献标识码] A[文章编号] 1673-9701（2012）12-0020-02

大枣多糖是从植物大枣中提取的一种多糖，具有复杂多样的生物活性，近来研究发现其抗肿瘤可能有直接和间接作用[1]。本研究通过研究大枣多糖对S-180瘤细胞的杀伤性作用，为临床应用多糖治疗骨髓瘤提供理论依据，同时也为临床提供一种治疗骨髓瘤的新药物，取得了一定的效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 骨髓瘤的动物模型建立

4~6周龄雄性BALB/c裸鼠（温州医学院实验动物中心提供），体重16~20 g，于裸鼠背部皮下注射S-180瘤细胞悬液约500 μL（含细胞数为1×107 个），至瘤体大约0.5 cm3时开始给药。

1.2 分组与治疗

荷瘤BALB/c裸鼠200只按瘤体大小随机分四组，每组50只。按下述方案处理，14 d后断颈法处死裸鼠。其中对照组给予生理盐水每日0.2 mL，腹腔注射；低浓度组给予大枣多糖注射液（江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字06022221）每日0.05 g/kg，腹腔注射；中浓度组给予大枣多糖注射液每日0.15 g/kg，腹腔注射；高浓度组给予大枣多糖注射液每日0.25 g/kg，腹腔注射。

1.3 观察指标[2]

①抑瘤率：给药后每周测定瘤体长径与短径，计算瘤质量（m=1/2×长径×短径2），并计算肿瘤生长抑制率（抑瘤率）=1-实验组瘤质量/对照组瘤质量×100%。②肿瘤细胞生长周期时间（ｔｃ）：ｔｃ＝[Ｉｇ（１＋Ｇ）/ｌｇ（ｍ２/ｍ１）］×ｔ，Ｇ为肿瘤生长组分，m2和m1为某组分中不同观察时间的肿瘤质量，t为观察间隔时间。③裸鼠生存时间：指从接受治疗到自然死亡的时间。④病理组织学观察：包括大体标本检查及镜检，取肿瘤组织，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE 染色，光镜下观察，免疫组织化学。

1.4 统计学方法

所有数据均采用SPSS 13.0统计软件包进行处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，不同组间比较采用F检验，检验水准α=0.05，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察指标

大枣多糖浓度越高抑瘤率越高，肿瘤细胞生长周期时间越短，裸鼠生存时间越长，差异具有统计学意义（P < 0.05）。

2.2 病理组织学观察

各组均有Caspase-3 m RNA、Caspase-8mRNA、ERCC-1和GST-π的表达，而且可见细胞核固缩，染色质边集，部分细胞可见凋亡小体，出现不同程度的细胞坏死，各组浓度越高病理学变化越明显。

3 讨论

骨髓瘤为中老年常见的一种血液系统恶性肿瘤，目前以化疗为主，由于患者年龄较大，往往难以耐受大剂量化疗药物。目前，临床上一直探索一些具有不同机制、疗效肯定、副作用小的药物。大枣多糖是从植物大枣中提取的一种多糖，其对S-180瘤细胞有直接和间接杀伤作用[3]。直接作用主要包括影响肿瘤细胞膜的生化特性、影响细胞内信号传递途径、诱导细胞凋亡、抑制细胞代谢、直接抑制细胞增殖等途径，而间接作用主要是增强吞噬细胞的功能等。

本研究中大枣多糖浓度越高抑瘤率越高，肿瘤细胞生长周期时间越短，裸鼠生存时间越长，差异有统计学意义（P < 0.05）。肿瘤细胞通常具有很强的增殖能力，主要体现在S期的DNA复制旺盛、合成活跃。现有的抗肿瘤药物有很多是影响细胞周期而发挥作用。以细胞周期过程中的各种调节因子为药物作用靶点，研究开发新型的细胞周期调控药物，也是当前研究新型抗肿瘤药物的重要方向。影响或调节细胞周期的药物可以抑制细胞增殖，诱导细胞分化或导致细胞死亡。也有学者认为[4]CyclinB1、CyclinD1均为细胞周期蛋白，是细胞周期调控因子，与细胞癌变密切相关，通过对细胞周期的有序调控可以抑制肿瘤，其中G1/S和G2/M两个检查点是细胞周期调控的关键，以此判断大枣多糖的生理作用。

Han等研究认为[5]，影响或调节细胞周期的药物可以抑制肿瘤细胞的增殖，从而诱导细胞分化或导致细胞死亡。此外，Li等[6]研究亦发现具有S-180瘤细胞的裸鼠经过治疗后其细胞周期可大都停留在G0/G1期，即静止或合成前期，从而提高抑瘤率和裸鼠生存时间。本研究中各组均有Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA、ERCC-1和GST-π的表达，而且可见细胞核固缩，染色质边集，部分细胞可见凋亡小体，出现不同程度的细胞坏死，且各组浓度越高，其病理学变化越明显。

李颖博等认为[7]，作为细胞凋亡中最关键的酶，Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA的活化可引起细胞不可逆凋亡，是细胞凋亡的标志。而GST-π作为一种与机体解毒功能相关的酶能有机的结合谷胱甘肽，在细胞分化、转录因子激活、DNA修复和保护细胞免受损害等方面起重要作用。ERCC-1在核苷酸切除修复（NER）系统中起着核酸内切酶和损伤识别的双重功能，其表达水平与NER系统的活性关系密切，是NER途径一种重要酶。

上述病理组织的变化，均能进一步证明大枣多糖对S-180瘤细胞生长分化起着积极的抑制作用，且浓度越高抑制作用越强。

总而言之，大枣多糖对S-180瘤细胞具有一定的杀伤作用，可为多糖治疗骨髓瘤提供了理论依据，具有较大的科学价值和实用性，值得在临床科研中推广使用。

[参考文献]

[1]李娟. 多发性骨髓瘤诊治新进展[J]. 实用医学杂志，2005，21（3）：225-229.

[2]钱青，张志勇. 植物活性多糖的药理作用及应用研究进展[J]. 华西医学，2009，24（1）：250-252.

[3]吴波，梁谋，佟丽，等. 茯苓多糖抗肿瘤作用与机理的实验研究[J]. 中国药理学通报，1994，10（4）：300-304.

[4]Yuan C，Pan X，Gong Y，et al. Effects of astragalus polysaccharides (APS) on the expression of immune response genes in head kidney，gill and spleen of the common carp，Cyprinus carpio L.[J]. Int Immunopharmacol，2008，8（1）：51-58.

[5]Han SB，Lee CW，Kang JS，et al. Acidic polysaccharidefrom Phellinus linteus inhibits melanoma cell metastasis by blocking cell adhesion and invasion[J]. Int Immunopharmacol，2006，6（4）：697-702.

[6]Li SG，Wang DG，Tian W，et al. Characterization and anti-tumor activity of a polysaccharide from hedysarum polybotrys Hand.-Mazz[J]. Carbohydrate Polymers，2008，73（2）：344-350.

[7]李颖博，李宇华，王瑞，等. 灵芝多糖对肿瘤细胞与内皮细胞相互作用的影响[J]. 中国药理学通报，2008，24（2）：250-253.

（收稿日期：2011-12-06）