独一味巴布膏对急性软组织挫伤模型大鼠的实验研究

何梦婕，杨婷，杨漾，萧海容，张康宁，廖立东，包旭*

(1.四川大学华西药学院，四川成都610041;2.甘肃独一味生物制药股份有限公司，甘肃康县746500)

独一味Lamiophlomis rotate(Benth.)Kudo为唇形科独一味属植物，该属仅一种，又名独步通，藏语称“大巴”、“打布巴”，分布在甘肃、青海、四川、云南、西藏等地。其根及其全草入药，是我国藏、蒙、纳西等民族民间常用药之一［1］。具有活血止痛、化瘀止血［2］之功效，用于治疗各种外科手术后的刀口疼痛、出血、外伤骨折、筋骨扭伤、风湿痹痛等［3］。

独一味巴布膏是专门针对软组织挫伤所引起的血瘀疼痛专门研制的新药。采用比较先进的巴布膏成型技术，弥补了其他外用剂型容易过敏、剥离困难等缺点。本实验采用砝码和哑铃造成大鼠急性软组织挫伤模型，研究其对急性软组织挫伤的作用。

1 材料与方法

1.1 试验药物、试剂独一味巴布膏:为棕褐色膏体，0.727 g(生药)/g(巴布膏)，由甘肃独一味生物制药股份有限公司提供。赋形剂:为白色膏体，由甘肃独一味生物制药股份有限公司提供。扶他林:白色乳胶剂，20 g/支(含双氯芬酸钠0.2 g)，由北京诺华制药有限公司生产。硫化钠:规格:500 g/瓶，分析纯，由天津市科密欧化学试剂有限公司生产。

1.2 动物SD大鼠，体质量190～220 g，雌雄各半，由四川大学实验动物中心提供，动物使用许可证号:第9号。实验动物使用设施许可证号:第113号。

1.3 仪器分析天平，北京赛多利斯天平有限公司，型号:BS210S。电子天平，成都市东风计量仪器有限公司，型号:T1000。

1.4 方法

1.4.1 砝码法［4］取SD大鼠60只，给药前24 h剪去大鼠背部及右下肢长毛，然后用8%硫化钠溶液对其脱毛处理，脱毛面积分别为5 cm×5 cm，2 cm×2 cm。第2天将脱毛且皮肤无破损的大鼠逐个置于自制挫伤模型台上，以0.2 kg砝码自20 cm的高度自由落下，直接打击大白鼠右下肢脱毛部位，连续同上操作3次，造成急性挫伤模型;按体质量、性别及挫伤程度随机分为6组，每组10只，雌雄各半。大鼠阴性组每鼠滴涂生理盐水10 mL/kg体质量，阳性对照组涂抹扶他林0.67 g/kg体质量，赋形剂组涂抹赋形剂4.5 g/kg体质量，药物高、中、低剂量组分别涂抹独一味巴布膏4.5 g(生药)/kg、3.0g(生药)/kg、1.5 g(生药)/kg体质量。每天给药前用生理盐水擦洗给药处，待皮肤干燥后再给予药物涂抹。每日给药1次，连续给药5 d。每日观察挫伤处的红肿，瘀血情况。并根据周国林等［5］软组织挫伤的治疗观察的评分标准再细化形成的标准进行各组鼠的评分:①有轻微红肿，但无闹瘀斑及行为障碍，0～1分;②有轻微红肿和瘀斑，但无行为障碍，1.1～2分;③有轻微红肿和瘀斑，以及轻微的行为障碍(能行走，不影响行动)，2.1～3分;④有明显红肿和瘀斑，行为障碍(向右侧倾斜)，3.1～4分;⑤严重的红肿和瘀斑，完全不能自发行走，4.1～5分。于第5天处死大鼠，取伤肢肌肉固定在10%甲醛溶液中，常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色后在光学显微镜下观察其病理变化。所得数据均以±s)表示，用SPSS10.0统计软件对组间差异进行方差分析。根据周国林等［5］肌肉挫伤评分标准(见表1)对各只鼠评分并进行统计。

1.4.2 哑铃法［5］造模时以5 kg哑铃自10 cm的高度，直接打击大白鼠右下肢脱毛部位，连续同上操作2次，造成急性挫伤模型。其余操作及评分标准与1.4.1项及表1相同。

2 结果

2.1 独一味巴布膏对大鼠急性软组织挫伤的影响见表2、表3。

表1 肌肉挫伤病理评分标准

表2 对大鼠急性软组织挫伤作用的影响(砝码)(分值，±s)

表2 对大鼠急性软组织挫伤作用的影响(砝码)(分值，±s)

注:各组与阴性对照组比较，*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林组与赋形剂组比较，△△△P＜0.001;阴性组与赋形剂组比较，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d阴性组—104.01±0.48 4.17±0.44 4.30±0.43 4.42±0.404组别剂量/(g生药·kg－1)动物/只给药前分值给药后(d)分值.01±0.533.72±0.27扶他林组0.67 g·kg－1104.03±0.53 3.91±0.49 3.14±0.71 2.85±0.55＊＊＊△△△2.40±0.37＊＊＊△△△1.78±0.79＊＊＊△△△赋形剂组4.5103.91±0.43 4.18±0.36 4.28±0.36 4.26±0.413.91±0.283.67±0.39独一味高剂量组4.5103.98±0.52 4.04±0.42 3.80±0.33 3.46±0.45＊＊＊2.98±0.58＊＊＊2.74±0.64＊＊＊独一味中剂量组3.0103.90±0.41 4.07±0.38 3.90±0.38 3.90±0.31*3.54±0.42*3.36±0.47*独一味低剂量组1.5103.98±0.27 4.11±0.30 4.06±0.32 4.08±0.333.85±0.393.64±0.27

表3 对大鼠急性组织挫伤作用的影响(哑铃)(分值，±s)

表3 对大鼠急性组织挫伤作用的影响(哑铃)(分值，±s)

注:各组与阴性组比较*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林组与赋形剂组比较，△△△P＜0.001;阴性组与赋形剂组比较，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d阴性组—104.01±0.35 4.21±0.34 4.35±0.36 4.47±0.354组别剂量(g生药·kg－1)动物/只给药前分值给药后(d)分值.19±0.343.97±0.28扶他林组0.67 g·kg－1104.09±0.39 3.89±0.33 3.51±0.29 3.20±0.27＊＊＊△△△2.83±0.31＊＊＊△△△2.19±0.90＊＊＊△△△赋形剂组4.5103.95±0.42 4.07±0.38 4.16±0.34 4.23±0.364.27±0.354.20±0.36独一味高剂量组4.5104.01±0.39 3.88±0.37 3.63±0.33 3.51±0.36＊＊＊3.28±0.34＊＊＊3.19±0.30＊＊＊独一味中剂量组3.0104.02±0.31 3.91±0.30 3.67±0.27 3.59±0.26*3.41±0.24*3.12±0.37*独一味低剂量组1.5103.98±0.23 3.93±0.26 3.85±0.27 3.75±0.313.66±0.303.49±0.31

由表2、3可见，独一味高、中剂量有良好的改善大鼠急性软组织挫伤引起的红肿、瘀血及行走能力。与阴性组比较，具有显著差异。

2.2 病理组织学检查结果独一味巴布膏对大鼠急性软组织挫伤的病理组织学评分见表4、表5，图1、图2。

表4 对大鼠急性软组织挫伤的病理组织学评分(砝码)(分值，±s)

表4 对大鼠急性软组织挫伤的病理组织学评分(砝码)(分值，±s)

注:各组与阴性对照组比较，＊＊P＜0.01;阴性组与赋形剂组比较，P＞0.05。

组别剂量/(g生药·kg－1)动物/只分值(x±s)102.4±0.70扶他林组0.67g·kg－1100.5±0.53＊＊赋形剂组4.5 g·kg－1102.5±0.85独一味高剂量组4.5100.7±0.48＊＊独一味中剂量组3.0101.5±0.53＊＊独一味低剂量组阴性对照组－1.5102.6±0.70

表5 对大鼠急性软组织挫伤的病理组织学评分(哑铃)(分值，±s)

表5 对大鼠急性软组织挫伤的病理组织学评分(哑铃)(分值，±s)

注:各组与阴性对照组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;阴性组与赋形剂组比较，P＞0.05。

只分值阴性对照组组别剂量/(g生药·kg－1)动物/102.2±0.63扶他林组0.67 g·kg－1100.6±0.52＊＊赋形剂组4.5 g·kg－1102.7±0.67独一味高剂量组4.5100.9±0.32＊＊独一味中剂量组3.0101.5±0.85*独一味低剂量组－1.5102.3±0.67

①阴性组:可见大面积肌肉纤维出现变性坏死，断裂。肌纤维间大量毛细血管扩张充血和增生现象，组织间隙可见大量炎性细胞浸润。炎症面积广。见图1F、图2F。

②阳性组:肌肉纤维结构完整，局部区域可见肌纤维排列紊乱，变性，断裂，变形范围小，有一定数量的炎性细胞浸润。肌纤维间可见毛细血管扩张充血和增生现象。见图1E、图2E。

图1 哑铃法病理组织学照片(10×10)

图2 砝码法病理组织学照片(10×10)

③赋形剂组:可见大面积肌肉纤维出现变性坏死，断裂。肌纤维间大量毛细血管扩张充血和增生现象，组织间隙可见大量炎性细胞浸润。炎症面积广。见图1B、图2B。

④独一味高剂量组:肌肉纤维结构完整，局部区域可见肌纤维排列紊乱，变性，断裂，变形范围小，有一定数量的炎性细胞浸润。肌纤维间可见毛细血管扩张充血和增生现象。与阳性组比较，肌纤维变性例数多。见图1C、图2C。

⑤独一味中剂量组:肌肉纤维结构出现局部性缺失，严重可见肌纤维变性坏死，断裂。肌纤维间大量毛细血管扩张充血和增生现象，组织间隙可见数量较多的炎性细胞浸润。见图1D、图2D。

⑥独一味低剂量组:可见大面积肌肉纤维出现变性坏死，断裂。肌纤维间大量毛细血管扩张充血和增生现象，组织间隙可见大量炎性细胞浸润。炎症面积广。见图1A、图2A。

以上结果表明，独一味巴布膏以4.5、3.0 g(生药)/kg给大鼠皮肤涂抹给药，每日1次，连续5 d，能改善砝码和哑铃所致大鼠急性挫伤症状。说明独一味巴布膏具有显著改善肌肉组织挫伤的作用。

3 讨论

急性软组织挫伤系指人体运动系统、皮肤以下骨骼之外的组织所发生的一系列扭伤、挫伤、拉伤等外伤［6］因素而致局部损伤、出血、水肿、肌肉痉挛或肌肉错位，包括肌肉、韧带、筋膜、肌腱、滑膜、脂肪、关节囊等组织以及周围神经、血管的不同情况的急性损伤［7］。引起损伤后机体的反应为:首先是无数毛细血管的破裂、出血，局部有细胞的失活。随即发生炎性反应，在组织胺、5-羟色胺等炎性因子的作用下，微血管先发生短暂的收缩，然后扩张和充血，通透性增加，血管内的水、蛋白和一些细胞从血管内渗入组织间隙，主要以局部急性炎症和组织修复为特征，临床表现为局部疼痛、压痛、肿胀、青紫瘀斑、肢体活动功能障碍等［8］。中医认为其病机为“气滞与血瘀”并见，在治疗软组织挫伤方面有长期的临床实践，其中以中药外治法独具特色，包括贴药、敷药、擦剂、腾洗药等，一般采用活血化瘀、理气止痛的治疗原则［9］。局部外服中药可以使药效集中作用于局部，高效而且安全，发挥较大的治疗作用［10］。

巴布膏剂在《中国药典》2005年版中由于皮肤亲和性好、使用安全方便、刺激性小、生产无工业“三废”，已被公认为是透皮给药体系发展的新方向［11］，独一味作为传统的治疗跌打损伤藏药，在多年的临床应用中，其镇痛、消炎、活血化瘀的作用确切，但上市销售品种均以口服制剂为主，如胶囊剂、颗粒剂、滴丸等，将其开发成外用巴布膏剂，实现了剂型和给药途径上的重大突破。

机械损伤能使组织断裂或细胞破裂，击伤的强弱和持续时间的不同，引起的后果也不同［12］。本实验采用直接击伤的方法造成动物软组织损伤，所以实验时严格控制了打击的高度和质量，使在等同的条件下造成软组织损伤的强度一致。本研究中，独一味巴布膏对哑铃和砝码两种方法所致的急性软组织挫伤，无论从肉眼观察，还是病理组织学检查，均验证了该药物在治疗血瘀(软组织损伤)方面的药理作用，为临床应用提供了药理学参考。

［1］马维宁.藏药独一味及制剂的药理及临床研究概述［J］.中国民族医药杂志，2005，2(1):39-40.

［2］沈建伟，王锐娟，王环，等.藏药独一味的研究进展［J］.安徽农业科学，2008，36(5):1920-1922.

［3］李茂星，贾正平，张汝学.镇痛止血药独一味的研究概况［J］.中药材，2004，27(3):222-224.

［4］李卫星，谭大琦.消瘀止痛膏对大鼠急性软组织损伤的治疗作用［J］.中医正骨，2000，12(1):11-12.

［5］周国林，姚全胜，潘玉英.一种动物软组织损伤的实验方法［J］.中国药理学通报，1991，7(5):396-399.

［6］丁伟国，章建华.中医药治疗急性软组织损伤实验研究进展［J］.甘肃中医学院学报，2008，25(1):51-53.

［7］杨小欣.活血化瘀药治疗急性软组织扭挫伤机理分析［J］.中医正骨，2003，15(10):57.

［8］佃仁森，王和鸣，练克俭，等.中药促进软组织损伤修复的临床研究进展［J］.中国中医骨伤科杂志，2008，16(3):68-72.

［9］赵士贵.独一味的药理及临床应用［J］.时珍国医国药，2004，15(12):873-873.

［10］王乐杨，金立伦.中药外用治疗急性软组织损伤的研究进展［C］//2010年度全国医药学术论文交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集，2010.

［11］贾伟，刘云斌.中药巴布剂的研究现状［J］.中国中药杂志，2003，28(1):7-10.

［12］徐闯，王建发，王晓旭，等.三七红花酒对软组织损伤大鼠疗效观察［J］.中兽医医药杂志，2010(1):33-35.