浅析乳制品中脂肪酸类营养强化剂检测方法

丁红梅，陈彬，张霞，杨兴龙

（南通市产品质量监督检验所，江苏 南通 226011）

浅析乳制品中脂肪酸类营养强化剂检测方法

丁红梅，陈彬，张霞，杨兴龙

（南通市产品质量监督检验所，江苏 南通 226011）

本文将乳制品经酸水解后，利用乙醇-乙醚-石油醚提取脂肪酸，在碱性条件下进行甲基化反应，用气相色谱-质谱法测定出添加的7种脂肪酸类营养强化剂。本检测方法前处理简单快捷，易于操作，方法重现性良好，其RSD可达0.82%～1.78%；回收率可达89.9%～103.6%；灵敏度高，检测限为0.1 mg/kg。

乳制品；脂肪酸类营养强化剂；检测

0 引 言

必需脂肪酸，是指人体生命活动不可缺少而体内又无法合成的，必须由食物提供的一类多不饱和脂肪酸，必需脂肪酸膳食补充已成为食品营养的世界性标准，添加了必需脂肪酸的食品与传统食品相比，能得到消费者更多的青睐。本文将乳制品样品经酸水解在碱性条件下甲基化反应用气质法测定出其添加的脂肪酸类营养强化剂含量。

1 实 验

1.1 材料

所有试剂，如未经注明均指分析纯；所有实验用水，如未经注明均指三级水。

盐酸（优级纯），无水乙醇，乙醚，氢氧化钾，无水甲醇，石油醚（沸程30～60℃），正己烷（农残级）。

α-亚麻酸甲酯标准品、γ-亚麻酸甲酯标准品、亚油酸甲酯标准品、共轭亚油甲酯标准品、花生四烯酸甲酯标准品、EPA甲酯标准品、DHA甲酯标准品，均购于上海安谱。氢氧化钾的甲醇溶液（KOH）浓度为4 mol/L，使用无水甲醇配制。

1.2 仪器

Agilent 7890A/5975C气相色谱-质谱仪，配备7683B自动进样器、增强型化学工作站。

色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱 （30m×0.25mm×0.32mm）；

超声波清洗仪，旋转蒸发仪，离心机。

1.3 方法

1.3.1 样品处理

准确称取样品5.0000 g置于200 mL具塞三角瓶中，加25 mL水加热溶解，混匀后再加15 mL盐酸，摇匀。将摇匀后样液放置超声波清洗仪中，调节水浴温度80℃超声提取45 min。取出三角瓶加入10 mL无水乙醇混匀，冷却后加25 mL乙醚入三角瓶中加塞超声提取1 min，小心开塞放出气体，再振摇1 min后再加入25 mL石油醚，塞上塞子超声提取1 min，振摇后离心或静置，使醚层、水层分开，有机层转入烧瓶中。第二次、第三次提取加入的试剂为5 mL乙醇、15 mL乙醚、15 mL石油醚，操作方法同第一次。

把提取的醚液合并，减压浓缩至近干，用正己烷溶解残留物并定容至10 mL，摇匀。准确吸取2 mL氢氧化钾的甲醇溶液，超声振摇10 min，进行甲基化反应。如果有机层有浑浊可离心至澄清，此有机层为样品待测液。

1.3.2 标准品配制

7种标准品利用正己烷配成标准混合溶液质量浓度分别为5，10，20，30 mg/L。

1.3.3 测定条件

（1）气相条件。HP-5MS毛细管色谱柱；进样口温度200℃；分流进样，分流比5∶1；载气为氦气（纯度99.999%）,流速1 mL/min；程序升温：150℃下保持5 min，以10℃/min升至250℃，保持10 min，全部程序时间25 min，自动进样，进样量1 μL。

（2）质谱条件。 电子轰击（EI）离子源；电子倍增器电压1301eV;电离电压70 eV;离子源温度230℃ ；四极杆温度150℃ ；接口温度250℃；SIM/全扫描（SCAN）采集模式，扫描质量范围：m/z 40～450；溶剂延迟时间3 min；采样频率2Hz。

1.3.4 定量与定性

（1）定性。采用保留时间和MS/SCAN方法来定性，主要是利用7种营养强化剂出峰时间和3个特征离子定性。

（2）定量。利用选择特征离子α-亚麻酸甲酯（292.3,135.1,108.1,79.1）、γ-亚麻酸甲酯（292.3,194.1,150.1,93.1）、亚油酸甲酯（294.3,263.1,109.1,81.1）、共轭亚油甲酯（294.3,109.1,95.1,81.1）、花生四烯酸甲酯（203.2,105.1,91.1,150.1）、EPA甲酯（201.1,79.0,119.1,104.9）、DHA甲酯（215.1,130.9,79.1,91.1），采用外标法进行定量计算。其中，第一个特征离子为定量时使用，后三个特征离子为标准数据库定性时采用。

2 结果讨论

2.1 样品前处理方法的选择

中性脂肪为脂肪酸和甘油形成的酯。在酸、碱或酯酶的作用下可发生水解，以碱作催化剂，产物是甘油和能溶于水的盐类（即皂），此过程即为皂化作用，皂用酸水解后生产不溶于水的脂肪酸，不饱和脂肪酸从样品中提取分离后，需要甲酯化处理，常用的甲酯化方法有三氟化硼法、三甲基氢氧化硫法（TMSH）、甲醇钾法、重氮甲烷、盐酸/甲醇和氢氧化四甲胺/甲醇等[1-3]，本方法通过实验比较表明，利用浓度为4 mol/L的KOH-CH3OH能够对所提取的不饱和脂肪酸营养强化剂进行有效酯化，所选试剂相比之下更易获取制备。

2.2 样品及标准品总离子图

图1中，出峰顺序：14.10 min为γ-亚麻酸甲酯，14.29 min为亚油酸甲酯，14.37 min为α-亚麻酸甲酯，14.80 min为共轭亚油甲酯，15.98 min为花生四烯酸甲酯，16.09 min为EPA甲酯，18.15 min为DHA甲酯。 图2为调制乳样品提取离子图。

2.3 准确度与精密度实验

2.3.1 准确度实验

在市场购买婴儿奶粉、调制乳样品，分别添加质量浓度为5，10，20 mg/L的三种混合标准品，按照本文的样品处理及检测方法，进行加标回收实验,，结果如表1所示。

2.3.2 精密度

取奶粉样品各进行6次样品处理进行测定，得精密度实验结果如表2所示。

表1 回收率实验

表2 精密度实验（n=6）

取质量浓度为10 mg/L的7种营养强化剂混合标样，进样量为1 μL，测得信噪比 ，检测限以3倍噪声计算，得到7种营养强化剂仪器检测限；以5.0 g称样量，最后定容体积为10 mL，进样量1 μL（同标样）计，得到本方法的7种营养强化剂的检出限均为0.1 mg/kg。

3 结束语

此方法线性好回收率和精密度都很高，与GB5413.27-2010标准中的方法相比具有检测限低、操作方便等优点，且样品中待测组份的分离度很好，能够同时测定乳制品中添加的脂肪酸类营养强化剂，此方法适合在基层实验室推广。

[1]李全阳，岳永生，张庆朝.食品添加剂的检测技术研究[J].营养学报，1994，16（2）：223-225.

[2]朱世永，陈世京.衍生物气相色谱法[M].北京：化学工业出版杜，1993，183-207.

[3]中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所.食物营养成分测定法[M].北京：人民卫生出版杜，1990：31-45.

Detection of fatty acids nutrition enhancer in dairy products

DING Hong-mei,CHEN Bin，ZHANG Xia，YANG Xing-long
（Nantong Bureau of Produce Quality Supervision and Testing,Nantong 226011，China）

s：In this paper dairy products after acid hydrolysis,fatty acid were extracted by alcohol ether-petroleum ether，in alkaline conditions were methylated,with gas chromatography-mass spectrometry method for the determination of fatty acids nutrition enhancer.The detection method was good at simple and quick detection,easy operation,the method has good reproducibility，with RSD of 0.82%to 1.78%;recovery rate of 89.9%to 103.6%;high sensitivity and a detection limit of 0.1 mg/kg.

Dairy products；Fatty acids Nutrition Enhancer；Detection.

TS252.7

A

1001-2230（2012）09-0046-02

2012-02-20

国家质量技术监督检验检疫总局科技项目（2010QK174）；江苏省南通市科技项目（S2010004）。

丁红梅（1978-），女，工程师，从事色谱仪器检测工作。