HPLC-TOFMS法快速分离与鉴别丹香冠心注射液中的化学成分

栾晓琳，张 海，王 慧，陈 俊，张国庆

(第二军医大学东方肝胆外科医院药材科，上海 200438)

HPLC-TOFMS法快速分离与鉴别丹香冠心注射液中的化学成分

栾晓琳，张 海，王 慧，陈 俊，张国庆

(第二军医大学东方肝胆外科医院药材科，上海 200438)

目的采用HPLC-TOFMS对丹香冠心注射液中化学成分进行快速分离与鉴别。方法色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱(3.0 mm × 100 mm, 3.5 μm)，以0.5 %醋酸(A)-乙腈(B)为流动相，梯度洗脱(v/v)，0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B，进样量5 μl，流速0.5 ml/min，柱温为30 ℃，飞行时间质谱配有ESI离子源，质量数扫描范围m/z 100～1 000。结果采用HPLC-TOFMS方法对丹香冠心注射液制液进行了在线化学成分分离，共鉴别出丹香冠心注射液中31个化学成分。结论采用HPLC-TOFMS方法对丹香冠心注射液的化学成分进行快速分析鉴别，可为中药丹香冠心注射液的药效物质基础和质量控制研究奠定基础。

丹香冠心注射液；HPLC-TOFMS；鉴别

丹香冠心注射液是由丹参和降香两味药材组成的中药注射液，具有活血化瘀，理气止痛等功效[1～4]。丹香冠心注射液中所含的化学成分复杂，其中主要含有丹参的水溶性成分和降香挥发油成分[5]。目前发现的主要水溶性成分有丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、丹酚酸B等，具有抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多种药理活性[6～8]。降香挥发油具有增加冠脉流量，减慢心率，抗氧化等作用，为有效的活性成分[9,10]。目前尚未见对丹香冠心注射液进行化学成分分析鉴别的文献报道。本研究采用HPLC-TOFMS联用技术，对丹香冠心注射液中各化学成分进行分析鉴别，为进行注射液的化学成分代谢和作用机制研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1仪器与试剂 安捷伦1200系列高效液相色谱仪，包括在线脱气机，二元泵，高性能自动进样器；安捷伦6220高分辨飞行时间质谱仪， 配有标准电喷雾离子源(ESI)，Masshunter工作站及Agilent Qualitative analysis质谱分析软件(以上均为美国安捷伦公司产品)。DL700超高压等静压机(上海大隆机器厂)；KUDOS SK2200H型超声器(上海科导超声仪器公司)；METYLER AE240型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

丹香冠心注射液(上海中西制药有限公司，批号：0910095)。乙腈(Burdick & Jackson，USA)和醋酸(美国Tedia公司)均为色谱纯，实验用水为二次纯净水。其他的试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1色谱条件 色谱柱为Zorbax SB-C18柱(3.0 mm×100 mm, 3.5 μm)。以0.5 %醋酸(A)-乙腈(B)为流动相，梯度洗脱(v/v)，0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B 柱平衡时间：8 min；进样量：5 μl；流速0.5 ml/min；柱温30 ℃。

1.2.2HPLC-TOFMS质谱条件 采用ESI 源，负离子模式下：毛细管电压3 500 V, 雾化气压力35 psig, 干燥气流速10 L/min, 干燥气温度350 ℃, 碎片电压215 V；参比离子m/z 121.050 873 和922.009 798。质量数扫描范围m/z 100～ 1 000，分流比1:1。

1.2.3丹香冠心注射液样品溶液的制备 精密吸取丹香冠心注射液1 ml，加75 %甲醇稀释并定容至10 ml，摇匀,经0.22 m的微孔滤膜滤过后，即得样品溶液。

1.2.4丹香冠心注射液化学成分数据库的建立 根据丹香冠心注射液中已报道化学成分的研究文献，收集了丹香冠心注射液中化学成分信息，建立相应的化学成分数据库。

2 结果

将丹香冠心注射液样品溶液进样分析，采集HPLC-TOFMS总离子流图，如图1所示。从质谱总离子流图中搜索出31个色谱峰的分子量与已知化合物的数据库相符，大部分化合物在负离子模式下的质谱图显示[M-H]-，少数成分在负离子模式下显示[M+CH3COO]-。采集HPLC-TOFMS总离子流图，结果共鉴别出丹香冠心注射液中31个成分，结果如表1所示。

图1丹香冠心注射液样品溶液的HPLC-TOFMS总离子流图

表1 丹香冠心注射液中各化学成分的HPLC-TOFMS分析结果

3 讨论

3.1流动相的选择 实验中分别比较了甲醇-水和乙腈-水系统，由于采用甲醇-水体系时，基线不稳定，干扰较大，故选择乙腈-水体系。加入适量醋酸调节pH，抑制了组分的离解，增强了化学成分的保留。将溶剂调节到最佳的分配系数，使丹香冠心注射液中各成分有效地分离，结合各因素确定适宜的流动相组成为乙腈-0.5%醋酸。

3.2鉴别结果 根据飞行时间质谱测得的精确分子量，应用Qualitative Analysis质谱分析软件计算可能的分子组成(误差<5 ppm)，结合自建的丹香冠心注射液化学成分数据库，将理论值与实测值进行比对，对丹香冠心注射液进行HPLC分离的30余个主要色谱峰进行分析，确定了31个成分的分子组成。

[1] 中国药典2010版.一部[S].2010: 70, 213.

[2] 李小娟,沃兴德.丹参酮的药理作用研究进展[J].现代生物医学进展,2008,8(12):2378.

[3] 黄赵刚,刘 钢,夏 泉,等. HPLC法测定不同厂家丹参注射液中丹参素和原儿茶醛的含量[J].安徽医药,2008,12(11):1055.

[4] 朱 庆,谢松强,肖晋芳,等.复方降香胶囊的抗心肌缺血作用[J].沈阳药科大学学报,2006,23(9):586.

[5] 王玉团,彭艳丽,李 勇. HPLC法测定注射用丹香冠心中丹参素钠和原儿茶醛的含量[J].食品与药品, 2007,9(5):21.

[6] 孙国祥,孙金山,赵 新. 丹参水溶性成分HPLC数字化指纹图谱研究[J].中国南药,2008,6(3):356.

[7] Zeng GF, Xiao HB, Liu JX,etal. Identification of phenolic constituents inRadixSalviamiltiorrhizae by liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry,2006,20:499.

[8] Yang M, Liu AH, Guan SH,etal. Characterization of tanshinones in the roots ofSalviaMiltiorrhiza(Dan-shen) by high-performance liquid chromatography with electrospray ionization tandem mass spectrometry[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry,2006,20:1268.

[9] 王 靖,张铁军,廖茂梁. HPLC法测定降香挥发油羟丙基-[3-环糊精包合物中反式一橙花叔醇][J].天津中医药大学学报,2006,25(2):92.

[10] Tao Y, Wang Y. Bioactive sesquiterpenes isolated from the essential oil ofDalbergiaodoriferaT. Chen[J]. Fitoterapia 2010, 81:393.

2010-08-06

[修回日期] 2010-10-08

RapidseparationandidentificationofchemicalcomponentsinDanxiangguanxininjectionbyHPLC-TOFMS

LUAN Xiao-lin, ZHANG Hai, WANG Hui, CHEN Jun, ZHANG Guo-qing

(Department of Pharmacy, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438,China)

ObjectiveTo separate and identify the components in Danxiangguanxin injection by high performance liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry (HPLC-TOFMS).MethodsAgilent Zorbax SB-Cl8column (3.0 mm×100 mm, 3.5 μm) was used for separation and identification of chemical components in Danxiangguanxin injection with a mobile phase of 0.5 % acetic acid (A) and acetonitrile (B) in gradient elution. 0～25 min, 2%～33% B; 25～30 min, 33%～95% B; the flowing rate was 0.5 ml/min and the injection volume was 5 μl. And the time-of-flight mass spectrometer was equipped with an EIS ion source. Scanning mass range was ranged between m/z 100～1000.ResultsThirty-one chemical compounds in Danxiangguanxin injection were identified unequivocally.ConclusionChromatographic demonstration of chemical compounds in Danxiangguanxin injection could provide foundation for the further metabolism and action mechanism study of Danxiangguanxin injection.

Danxiangguanxin injection; HPLC-TOFMS; identification

栾晓琳(1982-)，女，药师.E-mail：luanxl@hotmail.com.

张国庆.Tel：(021)81875571,E-mail：zhanggq@smmu.edu.cn.

R917

A

1006-0111(2011)03-0214-03