益心酮抗心肌缺血作用的实验研究

李洪斌，于 泓，杨世杰

(1.中国人民解放军第208医院，吉林 长春130062；2.吉林大学基础医学院，吉林 长春 130021)

益心酮抗心肌缺血作用的实验研究

李洪斌1，于 泓1，杨世杰2

(1.中国人民解放军第208医院，吉林 长春130062；2.吉林大学基础医学院，吉林 长春 130021)

目的研究益心酮的抗心肌缺血作用。方法采用腹腔注射异丙肾上腺素造成大鼠心肌缺血模型，运用益心酮治疗；采用皮下注射大剂量肾上腺素加寒冷刺激的方法复制大鼠急性血瘀模型，以观察益心酮对血瘀大鼠血黏度的影响；观察益心酮对大鼠血小板聚集率的影响；采用实验性急性心肌梗死犬模型，观察益心酮的抗心肌缺血作用。结果益心酮能够降低心肌缺血大鼠心电图中ST段位移，降低AST(天门冬氨酸氨基转移酶)、CPK(肌酸磷酸激酶)、LDH(乳酸脱氢酶)等心肌酶的升高程度，降低血液黏度；益心酮能够改善大鼠血瘀模型血液流变学，降低其血黏度；益心酮能够降低大鼠血小板聚集率；④益心酮能够降低心肌缺血程度(Σ-ST)，减少心肌缺血范围(N-ST)，缩小心肌梗死面积(MST)，同时能够降低血清中AST、CPK和LDH等心肌酶的升高程度。结论益心酮具有抗心肌缺血作用。

益心酮 ； 心肌缺血 ； 血液黏度； 血小板聚集 ； 心肌三酶

益心酮是中药制剂，其主要成分是山楂总黄酮。临床验证能够改善心肌缺血，目前已用于缺血性心脏病的治疗。本实验通过不同的模型，观察了益心酮对心肌缺血、血液黏度、血小板聚集率的影响，探讨其抗心肌缺血的作用机制。

1 材料与方法

1.1实验动物 Wistar大鼠，体质量220～280 g，雌雄兼用，由吉林大学实验动物中心提供，合格证号SCXK (吉)2003-0001；健康成年杂种犬，体质量12～18 kg ，雌雄兼用，由吉林大学实验动物中心提供，合格证号SYXK(吉)2002-0002。

1.2实验药品与试剂 益心酮原粉(长春三九生物制药股份有限公司)；复方丹参片(四川升和制药有限公司，批号081022)；盐酸异丙肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号080601)；盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号080801)。

1.3实验器材 心电图机6511(上海光电医用电子仪器有限公司)；LBY-N6B自清洗旋转式粘度计(北京普利生集团)；LBY-NJ全自动四通道血小板聚集仪(北京普利生集团)；LDZ5-2离心机(北京医用离心机厂)；GF-D200型半自动生化分析仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司)；RM-6000型多道生理记录仪(日本光电)；SC-3型人工呼吸机(上海)。

1.4实验方法

1.4.1对大鼠心肌缺血模型的影响[1～3]取Wistar大鼠36只，雌雄各半，体重220～280 g，随机分为6组，每组6只：空白对照组，模型对照组，阳性对照组(复方丹参片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)剂量组。各组每天灌胃给药一次(空白对照组和模型对照组分别给予生理盐水10 ml/kg)，连续5 d。除空白对照组外，其余各组均于第5天给药后1 h记录正常心电图，然后腹腔注射异丙肾上腺素4 mg/kg，记录给药后30 min的心电图，测量ST段偏移线的高度，以每组ST段偏移基线总和的mv数的均值作为心肌缺血损伤的指标。上述动物麻醉后腹主动脉取血，一部分血离心取血清，测AST(天门冬氨酸氨基转移酶)、CPK(肌酸磷酸激酶)、LDH(乳酸脱氢酶)的含量，另一部分血肝素抗凝后，测量全血黏度。

1.4.2对急性大鼠血瘀模型的影响[4,5]取Wistar大鼠36只，雌雄各半，体重220～280 g，按体重随机分为6组，每组6只，空白对照组、模型对照组、阳性对照组(复方丹参片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)剂量组。每天灌胃给药一次(空白对照组与模型对照组灌胃用生理盐水10 ml/kg)，连续5 d。除空白对照组外，其余各组末次给药后，造血瘀模型。造模方法是：皮下注射0.1%的肾上腺素0.07 ml/100 g体重，共2次，间隔4 h，并在此二次间(前后各2 h)将大鼠浸入冰水中5 min。然后动物禁食不禁水，次晨动物腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主动脉取血，肝素抗凝，置血液黏度计上测定不同切变率时全血黏度。

1.4.3对大鼠血小板聚集率的影响[6]取Wistar大鼠40只，雄性，体重220～280 g，随机分为5组，每组8只：空白对照组(生理盐水10 ml/kg)，阳性对照组(复方丹参片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)剂量组。每天灌胃给药1次，连续5 d，末次给药后禁食(不禁水)12～18 h，腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主动脉取血注入枸橼酸钠溶液的硅化离心管中(枸橼酸钠与血比例1:9)抗凝，于血小板聚集仪上测定ADP诱导的血小板最大聚集率。

1.4.4对实验性心肌梗死犬的影响[7]杂种犬30只，随机分为5组，每组6只。模型对照组给予等容量注射用生理盐水，阳性对照组(复方丹参片0.84 g/kg)，实验组分为益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)剂量组,均采用灌胃给药。将家犬用戊巴比妥钠(30 mg/kg)静脉注射麻醉。背位固定，切开颈部皮肤，气管插管，连接人工呼吸机(SC-3)。于左侧第四肋间施开胸术，暴露心脏，剪开心包，行心包术,分离冠状动脉左前降支主干中下1/3交界处，穿线以备结扎，用多点湿布式吸附法标测EECG，标测点24个，分正常区(对照点)，梗死边缘区和梗死中心区。术毕，稳定15 min。记录各点心外膜心电图(EECG),同时自股静脉取血，测AST、CPK和LDH值，作为给药前值。结扎冠状动脉，制备实验性急性心肌梗死模型。灌胃给予实验药物。记录给药前、结扎、给药后15、30、45、60、90、120、150、180、240、360 minEECG,以ST段升高总mv数表示∑-ST，以ST段升高≥2 mv的导联数为N-ST。记录360 min后，第二次取静脉血测心肌三酶。最后，取下心脏，称全心重，沿冠状沟剪去大血管根部和心房，称左心室重。将左心室均匀地横断切成5片,置于硝基四氮唑兰(N-BT)染液中,在37 ℃恒温水浴箱中染色15 min。梗死区不着色，非梗死区被NBT染为蓝色。剪去各心肌片被染色非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以全心重和心室重分别得到梗死范围占全心重和心室重的百分比(%)。

2 结果

2.1对大鼠心肌缺血模型的影响

2.1.1对大鼠心肌缺血模型ST段位移的影响 各组与模型对照组比较，阳性对照组、益心酮大、中剂量组均可使ST段偏移减小。结果见表1。

表1 益心酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血模型ST段位移的影响

注：1)P<0.05,与模型对照组比较。

2.1.2对大鼠心肌缺血模型血清酶的影响 模型对照组与空白对照组比较，血清心肌三酶的释放量明显增加。各给药组与模型对照组比较，可见阳性对照组、益心酮大剂量组可显著降低血清中心肌三酶的含量P<0.01，中剂量组也可有一定幅度的降低P<0.05。结果见表2。

2.1.3对大鼠心肌缺血模型血液黏度的影响 中、低切变率时，模型对照组与空白对照组比较全血黏度明显升高，说明给予异丙肾上腺素后血液黏度增加。与模型对照组比较的结果表明：阳性对照组、益心酮大、中剂量组均能抑制异丙肾上腺素所致的大鼠血黏度的异常升高。结果见表3。

2.2对急性大鼠血瘀模型的影响 与空白对照组相比，模型对照组可见全血高中低切黏度均明显增加(P<0.01)， 表明血瘀模型成立。益心酮大、中剂量、阳性对照组均可抑制全血黏度的异常变化，降低全血黏度。益心酮大剂量组的作用明显强于阳性对照组的作用。结果见表4。

表2 益心酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血模型血清酶的影响

注：1)P<0.01与空白对照组比较；2)P<0.05，3)P<0.01,与模型对照组比较。

表3 益心酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血模型全血黏度的影响

注：1)P<0.01与空白对照组比较；2)P<0.05，3)P<0.01,与模型对照组比较。

表4 益心酮对血瘀大鼠全血黏度的影响

注：1)P<0.01与空白对照组比较；2)P<0.05，3)P<0.01,与模型对照组比较。

2.3对大鼠血小板聚集率的影响 与空白对照组比较，阳性对照组、益心酮大、中剂量组均能有效抑制血小板的聚集,结果见表5。

表5 益心酮对大鼠血小板聚集率的影响

注：1)P<0.01，2)P<0.001，与空白对照组比较。

2.4对实验性心肌梗死犬的影响

2.4.1对心肌梗死犬心肌缺血程度(∑-ST)的影响 阳性对照组实测值在90 min作用明显(P<0.05)；益心酮大剂量组实测值在45～180 min作用明显(P<0.05)；益心酮中剂量组实测值在60～180 min作用明显(P<0.05)；益心酮小剂量组实测值在120～150 min作用明显(P<0.05)。 见表6。

2.4.2对心肌梗死犬心肌缺血范围(N-ST)的影响 阳性对照组实测值在90～150 min作用明显(P<0.05)；益心酮大剂量组实测值在45～180 min作用明显(P<0.05)；益心酮中剂量组实测值在60～180 min作用明显(P<0.05)；益心酮小剂量组实测值在120 min作用明显(P<0.05)，见表7。

2.4.3对心肌梗死犬心肌缺血面积的影响 阳性对照组，益心酮大剂量组、中剂量组均可明显减少梗死/全心及梗死/左心面积(P<0.05)，其它各组无显著性差异，见表8。

表6 益心酮对心肌梗死犬缺血程度的影响

注：1)P<0.01，2)P<0.001，3)P<0.0001，与模型对照组比较。

表7 益心酮对心肌梗死犬缺血范围的影响

注：1)P<0.01，与模型对照组比较。

表8 益心酮对心肌梗死犬心肌梗死面积的影响

1)P<0.01，2)P<0.001，与模型对照组比较。

2.4.4对心肌三酶(AST，CPK，LDH)的影响 阳性对照组，益心酮小、中、大剂量组，与模型对照组比较均可明显降低血清实测值中AST的含量(P<0.05)；阳性对照组，益心酮中、大剂量组，与模型对照组比较均可明显降低血清实测值中CK的含量(P<0.05)；益心酮大剂量组与模型对照组比较明显降低血清实测值中LDH的含量(P<0.05)。结果见表9。

表9益心酮对心肌梗死犬血清中AST、CPK、LDH的影响

1)P<0.05,与模型对照组比较。

3 讨论

本实验主要采用了大鼠和犬作为实验动物，这样从不同种属的动物制造模型观察益心酮的抗心肌缺血的作用，从而使其药理作用的研究更加完整、全面。

对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血模型，采用心电图机描记心电图，测量ST段偏移线的高度，从每组ST段偏移基线高度的总和的mv数均值作为心肌缺血程度的指标，可以更加直观地获得心肌缺血程度的情况，以评价药物的作用，但麻醉剂水合氯醛对大鼠的心电情况有一定的影响，容易干扰心电图，从而影响实验结果的准确，这一点需进一步探讨。

本实验分别观察了益心酮对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血模型和急性大鼠血瘀模型血黏度的影响以及其对血小板聚集率的影响，发现益心酮均能降低大鼠的血黏度，改善其血液流变性，降低了血小板的聚集率，提示益心酮通过提高红细胞、血小板的表面电荷，增加血液有形细胞之间斥力使电泳减少，加快红细胞及血小板在血中流速，促进轴流，减少边流和聚集粘附，从而达到活血化瘀，降低血液黏度，减少聚集的作用。由于血小板聚集减少，TXA2释放将大为减少，cAMP破坏减少，大大缓解了冠状动脉的痉挛，起到缓解、控制心绞痛的临床效果。我们采用皮下注射大剂量肾上腺素加寒冷刺激的方法复制大鼠急性血瘀模型，使动物血液呈高黏、聚、凝状态。以此观察益心酮对血瘀模型大鼠的血液黏度的影响，结果显示益心酮可抑制血瘀模型大鼠血液流变学的异常变化，降低全血黏度。

本实验采用了目前应用最为广泛的冠状动脉结扎法，以研究益心酮对实验性心肌梗死犬心外膜电图(EECG)、心肌梗死面积(MIS)、心肌三酶的影响。实验证明，益心酮能够降低心肌梗死犬的心肌缺血程度(Σ-ST)，减少心肌缺血范围(N-ST)，缩小心肌梗死面积(MIS)，降低其血清中天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 、肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量，具有抗心肌缺血作用。

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2010-01-20

[修回日期] 2011-04-21

Experimentalstudyonanti-myocardialischemiaeffectofYixintong

LI Hong-bin1,YU Hong1,YANG Shi-jie2

(1.208th Hospital of PLA, Changchun 130062,China;2.School of Basic Medical Sciences，Jilin University，Changchun 130021，China)

ObjectiveTo study the anti-myocardial ischemia effect of Yixintong.MethodsThe rat myocardial ischemia model was caused by isoprenaline and the experiment myocardial infraction dogs were used to observe the effect of Yixintong. Blood stasis model was used to observe the effect of Yixintong on blood viscosity and platelet aggregation.ResultsYixintong (0.4 g/kg, 0.2 g/kg)could decrease ST length and rise serum enzyme(such as AST,CPK and LDH). Yixintong (0.4 g/kg,0.2 g/kg) could also lower the blood viscosity. Yixintong could improve hemorrheologic abnormality and lower the whole blood viscosity. Yixintong could inhibit platelet aggregation of rat. Yixintong could ameliorate the myocardial ischemia degree(Σ-ST) and decrease the myocardial ischemia coverage(N-ST). Yixintong could also decrease the rised serum enzyme(such as AST,CPK and LDH).ConclusionsYixintong had a protective and therapeutic action to the experimental myocardial ischemia．

Yinxintong；myocardial ischemia；blood viscosity；platelet aggregation；myocardia enzyme

李洪斌(1971-)，男，硕士，主管药师.Tel：(0431)86988967，E-mail: mrlihongbin@hotmail.com.

R965

A

1006-0111(2011)03-0188-05